動態濁度法定量檢測地龍注射液中的細菌內毒素

廣東省佛山市禪城區中心醫院（528031）張朝陽 歐有權 羅潤嫦 賴永娥

本文通過動態濁度法定量檢測地龍注射液中的細菌內毒素含量，建立地龍注射液中細菌內毒素定量分析的方法。

1 材料與儀器

地龍注射液（批號：0909404、901007、090702，規格：2ml/支，廣東省博羅先鋒藥業集團有限公司）；動態濁度鱟試劑（批號：0907252，1.25mL/支，湛江安度斯生物有限公司）；細菌內毒素工作標準品（批號：150601-200961，150/支，中國藥品生物制品檢定所）；細菌內毒素檢查用水（批號：0909080，5mL/支，湛江安度斯生物有限公司）；BET-32B型細菌內毒素測定儀（天津大學無線電廠）；ZH-2型漩渦混合器（天津藥典儀器廠）。

附表1 標準曲線的可靠性試驗

附表2 地龍注射液干擾預實驗結果

附表3 地龍注射液定量檢查結果

2 方法與結果

2.1 細菌內毒素限值的確定 按細菌內毒素限值公式L=K/M，K為人用每kg體重每1h最大可接受的內毒素劑量，非放射性注射劑的K值為5.0Eu?kg-1?h-1，M為1h內每kg體重人的最大給藥劑量。地龍注射液〔國家食品藥品監督管理局中成藥地方標準上升國家標準部分（內科肺系一分冊）WS-11340（ZD-1340）2002〕一次2ml，其L值為L=K/M=5/（2/60）=150Eu/ml。考慮到藥廠可作中間產品的質量控制，把安全系數提高5倍。限值確立為L=150Eu/ml÷5=30Eu/ml。

2.2 標準曲線的制作及可靠性[1]用細菌內毒素檢查用水將細菌內毒素工作標準品進行溶解稀釋，使其最終內毒素濃度分別為5.0，1.0，0.2，0.04Eu/ml稀釋系列。各取0.2ml分別加到預先加有0.1ml動態濁度鱟試劑反應管內，混合均勻。立即插入BET-32B型細菌內毒素測定儀進行自動檢測，其中每一濃度做2支平行管，并同時做2支陰性對照管（NC）（見附表1）。

結果標準曲線為lgT=2.7465+（-0.22252lgC），r=0.9931，|r|＞0.980，標準曲線最低內毒素濃度點λ1=0.04Eu/ml，陰性對照內毒素小于標準曲線最低點，標準曲線成立。

2.3 干擾實驗

2.3.1 供試品最大稀釋倍數計算[1]按公式MVD=L?C/λ，地龍注射液的L=30EU/ml，C為1.0 ml/ml，選取0.04～5.0Eu/ml的范圍測試。標準曲線的最低內毒素濃度λ1為0.04Eu/ml，其最大稀釋倍數均為MVD=30×1.0/0.04=750倍。

2.3.2 供試品溶液配制及干擾預實驗[2][3]將地龍注射液（批號0909404）的pH值調至6.0～8.0，用細菌內毒素檢查用水依次稀釋為1∶50，1∶100，1∶200等比系列稀釋液，作為供試品空白管（Et）。同時再分別取內毒素標準溶液濃度為2λ(λ為中點濃度0.5 Eu/ml)和供試品各等比系列的2倍濃度稀釋液，在稀釋用試管中等量混合，得到在此稀釋倍數下含λm內毒素的供試品溶液，作為供試品陽性管（Es）。分別取上述溶液各0.2ml加入預先加有0.1ml動態濁度法鱟試劑反應管內，混合均勻。立即插入BET-32B型細菌內毒素測定儀進行自動檢測，其中每一濃度做2支平行管，并同時做2支陰性對照管（NC），2支陽性對照管（PC）。計算回收率（%）=（Es-Et）/λ×100%（見附表2）。供試品等比稀釋液中，1∶50，1∶100，1∶200稀釋液的回收率分別為147%和113%和116%。稀釋液的回收率均在50%～200%之間，符合中國藥典規定。在日常檢查中選1∶100稀釋液。

2.4 定量檢查 根據以上預干擾實驗結果，對3批地龍注射液以1∶100稀釋液進行定量檢查（見附表3）。

3 討論

3.1 動態濁度法有快速、大范圍定量的特性，使干擾實驗在一兩次實驗后完成，節約成本，更適合于成份復雜，干擾大的中藥注射劑的內毒素檢測。

3.2 上述實驗結果顯示，地龍注射液稀釋倍數在100倍時，測得的內毒素回收率為113%，回收率接近100%，最接近真實值。經3批供試品干擾試驗結果測得的內毒素回收率均接近100%，表明該稀釋倍數的供試品溶液對本試驗已無干擾作用。