五指山苦丁茶不同部位多糖含量的測(cè)定

陳文 王湘君 徐云升 趙陽(yáng) 邵東旭 林芳松

（1 瓊州學(xué)院理工學(xué)院 海南 三亞572022；2 瓊州學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 海南 三亞 572022 3 新鄉(xiāng)市環(huán)境保護(hù)監(jiān)測(cè)站, 河南 新鄉(xiāng) 453003）

0 引言

海南省五指山苦丁茶屬冬青科的兩個(gè)種，即冬青科冬青屬大葉冬青和冬青科冬青屬苦丁茶[1]。苦丁茶是一種中藥,具有清熱解毒、消炎、調(diào)節(jié)腸胃等功效,是民間一種較為高級(jí)的茶品[2],海南五指山不少地區(qū)建立了苦丁茶基地,集種植、加工、銷(xiāo)售于一體,并取得了較好的經(jīng)濟(jì)效益。筆者對(duì)五指山一些苦丁茶基地的調(diào)查發(fā)現(xiàn),不少苦丁茶葉遭到丟棄,不能有效地利用,造成很大的浪費(fèi)。為此實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定不同部位苦丁茶葉的多糖含量, 為評(píng)價(jià)苦丁茶的質(zhì)量,進(jìn)一步綜合利用苦丁茶提供一定依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)研究

1.1 五指山苦丁茶中多糖含量的測(cè)定

茶葉中可被利用的生物活性成分茶多糖是非常重要的，糖類(lèi)是自然界最多的有機(jī)化合物，也是重要生物高分子化合物和重要信息分子。多糖及糖復(fù)合物分布廣泛，功能多種多樣，它們參與細(xì)胞各種生命活動(dòng)調(diào)節(jié)。有的多糖具有特殊生物活性，是一種免疫調(diào)節(jié)劑，且無(wú)毒副作用，被作為臨床用藥或疫苗[3]。

茶多糖是茶葉中的一種生理活性物質(zhì),是由糖類(lèi)、蛋白質(zhì)、果膠和灰分組成的一種類(lèi)似靈芝多糖和人參多糖的高分子化合物,其相對(duì)分子量為107000[4]。從化學(xué)組成上看,可以分為由均一單糖糖基組成的均多糖、多種單糖糖基組成的雜多糖及結(jié)合肽鏈或脂類(lèi)等物質(zhì)的復(fù)合多糖，約占茶葉干物質(zhì)的20%。茶多糖是一種水溶性的復(fù)合多糖，產(chǎn)品的外觀呈淡褐色,熱水中溶解度約 76%，不溶于高濃度的有機(jī)溶劑。高溫下易喪失活性，過(guò)酸或偏堿性均會(huì)使多糖部分降解。經(jīng)分離純化茶多糖為粉末狀固體，不易潮解，無(wú)味，溶于水，不溶于高濃度有機(jī)溶劑。茶多糖的研究在二十世紀(jì)90年代初已經(jīng)開(kāi)始研究，幾十年的研究表明：茶多糖其杰出功效是降血糖、降血脂，從而達(dá)到防治糖尿病作用，同時(shí)在抗凝、防血栓形成，保護(hù)血相和增強(qiáng)人體非特異性免疫能力等方面均有明顯效果，是一種很有開(kāi)發(fā)前景天然藥物。目前國(guó)內(nèi)外都在發(fā)展多糖的研究，我國(guó)主要集中在人參、銀耳、黑木耳、刺參和黃茂等名貴中藥材的研究上，對(duì)茶多糖的研究較少，尚處于初級(jí)研究階段。不過(guò)不少營(yíng)養(yǎng)學(xué)家已預(yù)言, 21 世紀(jì)將是 “多糖時(shí)代”。隨著糖生物學(xué)和糖化學(xué)的發(fā)展,人們將對(duì)茶多糖有更多的了解,更好地利

用茶多糖的生理功能,為人類(lèi)的身體健康與生活質(zhì)量的提高服務(wù)。

1.1.1 材料、設(shè)備與試劑

1.1.1.1 苦丁茶樣品

新鮮苦丁茶樣品：采摘自主峰1867m 的五指山野生苦丁茶

一級(jí)品苦丁茶：一芽?jī)扇~，肥壯嬌嫩

二級(jí)品苦丁茶：靠近一芽?jī)扇~一端的茶葉

三級(jí)品苦丁茶：老葉但未脫落的茶葉

四級(jí)品苦丁茶：脫落的老葉

將采摘的苦丁茶按四個(gè)等級(jí)分類(lèi),分別用自來(lái)水,雙蒸水洗凈,風(fēng)干。所有樣品均于80 °C 恒溫干燥8 h,粉碎備用。

1.1.1.2 主要設(shè)備

電子調(diào)溫電熱套：天津市泰斯特儀器有限公司

電子分析天平（萬(wàn)分之一）：賽多利斯特科學(xué)儀器（北京）有限公司

容量瓶：10mL，100mL，1000mL

吸量管：10mL，5mL，2mL，0.5mL

TU-1901 型雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司

HH-1 數(shù)顯恒溫水浴鍋：金壇市開(kāi)發(fā)區(qū)吉特實(shí)驗(yàn)儀器廠

常用的化學(xué)實(shí)驗(yàn)玻璃儀器

1.1.1.3 主要試劑

（1）無(wú)水葡萄糖（A·R）（標(biāo)準(zhǔn)品）

（2）蒽酮溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取蒽酮0.4039g 先加6mL 無(wú)水乙醇助溶，后加75℅的硫酸200mL，搖勻置于棕色瓶中備用（現(xiàn)配現(xiàn)用避光低溫保存）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 苦丁茶黃酮樣品液制備

1.2.1.1 樣品處理

將不同級(jí)別新鮮苦丁茶粉碎樣品過(guò)80 目篩,用0.0001g分析天平準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品粉末苦丁茶樣品約2g 置于圓底燒瓶中，加50ml 蒸餾水加熱回流2 次，每次45min，然后過(guò)濾，合并濾液，用蒸餾水定容至100ml，取1ml 稀釋至50ml，搖勻，備用[5]。

1.2.2 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：

用電子分析天平準(zhǔn)確稱(chēng)取 105℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品16.01mg 置于100ml 的容量瓶中，加水溶解并定容，備用[6]。

取此標(biāo)準(zhǔn)液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml 分別置于25ml的容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。各精密吸取2.0ml置于具塞試管中，冰浴，各加入 0.5‰的蒽酮－硫酸試劑4ml，混勻，沸水浴7min，用流動(dòng)的水迅速冷至室溫，放置10min 后，于620nm 處測(cè)定吸光度以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度（C）為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程。

1.2.3 最佳波長(zhǎng)的選擇

取標(biāo)準(zhǔn)待測(cè)液（7 支比色管）在TU-1901 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上，550-650nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，取最大吸收波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)，最后得到620nm 處吸收最大。在620nm的最佳波長(zhǎng)處,測(cè)定吸光度 A。然后以葡萄糖準(zhǔn)液的濃度為橫坐標(biāo),以其吸光度A 為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4 苦丁茶樣品多糖含量測(cè)定

分別準(zhǔn)確量取不同級(jí)別苦丁茶樣品茶多糖溶液 2ml 于具塞試管中，冰浴3min,加入0.5‰的蒽酮硫酸試劑4ml,再沸水浴7min,冷卻后，用1cm 比色皿,以試劑空白作參比,于波長(zhǎng)620nm 處測(cè)吸光度,重復(fù)測(cè)定六次。

1.2.5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.2.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

表1-1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

圖1-1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液吸光度曲線圖

1.2.5.2 樣品實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果

計(jì)算公式：

茶多糖物質(zhì)總含量（%）=2C×10-3×100 × 25 ÷2 ×100℅

C：測(cè)定樣品多糖平均濃度

表2 各等級(jí)茶葉樣品實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與結(jié)果

經(jīng)數(shù)據(jù)處理和計(jì)算得出不同等級(jí)即不同部位海南五指山苦丁茶多糖含量不一樣，四個(gè)等級(jí)的五指山苦丁茶中多糖含量分別為5.945℅、5.875℅、5.777℅和5.681℅，一級(jí)苦丁茶多糖含量較豐富，其他級(jí)別整體含量與之相差不大。苦丁茶葉中糖類(lèi)物質(zhì)一般占到干重的 20%～25%，但是泡茶時(shí)最多泡出它的5%左右。

2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論與分析

2.1 與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)不同等級(jí)苦丁茶物質(zhì)含量比較

2.1.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

五指山苦丁茶中兩種物質(zhì)與廣東、貴州、浙江、四川苦丁茶進(jìn)行對(duì)比[7]。

表2-1 國(guó)內(nèi)不同等級(jí)苦丁茶中多糖含量

經(jīng)過(guò)表格的數(shù)據(jù)對(duì)比可知，五指山兩個(gè)等級(jí)的苦丁茶中的多糖含量均比廣東、貴州、浙江、四川這四個(gè)省份的苦丁茶高，但大大低于茶葉的多糖含量[8]（茶葉的含量一般為20%～25%）。是構(gòu)成了海南五指山苦丁茶味濃、先苦而回味甘甜、澀味感和收斂性不強(qiáng)等品質(zhì)特征的原因。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

苦丁茶多糖是重要的一個(gè)天然藥物,有很好的保健作用，糖類(lèi)化合物在較高溫度下被硫酸作用脫水生成糠醛或糠醛衍生物,能與蒽酮縮合生成藍(lán)綠色化合物。實(shí)驗(yàn)采用無(wú)水葡萄糖作為基準(zhǔn)物質(zhì)，原料為不同等級(jí)的海南五指山苦丁茶，采用硫酸-蒽酮法，通過(guò)TU-1901 型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，測(cè)定茶葉中茶多糖含量，方法簡(jiǎn)單快速并具有較好的精密度與準(zhǔn)確度，基準(zhǔn)物質(zhì)無(wú)水葡萄糖便宜易得、對(duì)儀器條件要求不高的優(yōu)點(diǎn)。作為一種對(duì)于茶葉品質(zhì)的初步鑒定、快速測(cè)定方法，有一定應(yīng)用價(jià)值。

實(shí)驗(yàn)存在以下問(wèn)題，所采用苦丁茶樣品材料的等級(jí)級(jí)別較少并且等級(jí)級(jí)數(shù)相差不大，數(shù)據(jù)顯示相差不明顯；另因蒽酮-硫酸溶液的穩(wěn)定性（如受環(huán)境如光照、溫度等條件影響較大）較差，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響，故蒽酮硫酸溶液用于多糖含量測(cè)定時(shí),宜新鮮配制并注意避光。測(cè)量結(jié)果存在著一定的誤差，有待以后繼續(xù)研究改進(jìn)。實(shí)驗(yàn)測(cè)量時(shí)采用多次平行測(cè)定，準(zhǔn)確度相對(duì)較高，仍具有參考價(jià)值。

3 結(jié)論

苦丁茶是天然保健綠色食品，有較好的藥用價(jià)值。五指山苦丁茶樣品中多糖的含量是：一級(jí)品> 二級(jí)品> 三級(jí)品>四級(jí)品。 一級(jí)品與二級(jí)品差別不大,而三級(jí)品和四級(jí)品則差別較大,尤其四級(jí)品含量較低。不同部位的苦丁茶多糖含量存在著一定的差別, 就多糖含量來(lái)分析,三級(jí)品老葉但未脫落的苦丁茶仍可利用。建議在采摘苦丁茶時(shí),同時(shí)采摘未脫落的老葉,以免脫落后成分損失而失去利用價(jià)值。

海南五指山地區(qū)四季如春，獨(dú)特的氣候?qū)ΨN植苦丁茶可以提供優(yōu)越的環(huán)境，對(duì)實(shí)現(xiàn)海南五指山苦丁茶產(chǎn)業(yè)化，市場(chǎng)化具有重要意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果相對(duì)國(guó)內(nèi)其它地區(qū)有較強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，這對(duì)五指山苦丁茶發(fā)展研究提供科學(xué)的參考價(jià)值。目前，國(guó)家正在大力發(fā)展海南國(guó)際旅游島，應(yīng)合理利用發(fā)展契機(jī)，開(kāi)發(fā)五指山苦丁茶產(chǎn)業(yè)如飲料等新產(chǎn)品，具備良好的發(fā)展前景,促使苦丁茶行業(yè)迅猛發(fā)展。