地龍酒炙前后水煎液氣味的吹掃捕集-GC-MS-嗅聞聯用研究

張 萌 徐 碩 高 志 宋煥祿 王 璇 蔡少青

1.北京大學藥學院，北京 100191；2.北京工商大學食品學院，北京 100048

廣地龍為鉅蚓科動物參環毛蚓Pheretima aspergillum（E.Perrier）的干燥體，具有清熱定驚、通絡、平喘、利尿等功效[1]，為中藥常用藥物。近年來的研究主要關注其抗凝血、溶栓和改善血液循環作用[2]。地龍在臨床多以水煎液形式使用，然而濃烈的腥臭味常常讓服用者難以忍受。一般認為酒炙這種傳統的炮制方法具有矯臭解腥的作用[3-4]，而且酒炙地龍較生地龍具有更優的活血通絡作用[5]，但目前對于上述矯臭解腥的原理以及藥理作用的物質基礎并不明確，且對地龍氣味成分的分析研究還未見報道。頂空法（靜態頂空）是一種以分析置于密封容器中的樣品上方的蒸汽組成為基礎的氣相色譜法，它能真實地反映樣品的氣味組成，揭示人們所嗅到的氣味本質。吹掃捕集法（動態頂空）是利用高純惰性氣體連續通過待測樣品并攜帶揮發性有機物進入捕集裝置的色譜法。同靜態頂空相比，吹掃捕集技術能夠分析高分子量的揮發性和半揮發性的化合物，不需要使用溶劑萃取[6-7]。該技術具有樣品前處理簡單、靈敏度高、操作簡便、可實現在線測定以及富集倍數高的特點，其與氣相色譜（GC）-質譜法（MS）聯用在揮發性物質的分析中應用廣泛[8-10]。

本文采用吹掃捕集-GC-MS-嗅聞聯用技術，對地龍水煎液進行了氣味成分研究，并比較了地龍酒炙前后氣味成分的變化，以期找到改善地龍水煎液腥臭味的方法。本實驗還加入了嗅覺檢測器，在氣相色譜柱末端安裝分流口，分流樣品到質譜儀和嗅覺檢測器，使得對氣味成分的分析更加直觀。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 6890N GC系統、Agilent 5975c inert XL MS檢測器、Gerstel TDS/TDU/ALEX氣泵、Gerstel TDS3熱脫附系統、TDSA2熱脫附自動進樣器、三口吹掃捕集玻璃容器、水浴循環系統（國華2004-21超級恒溫水浴）、Gerstel thermo extractor、Gerstel Tenax TA 吸附管。

1.2 試藥

地龍生品（批號：6173）于2007年8月購自北京市同仁堂藥材公司，經北京大學藥學院蔡少青教授鑒定為鉅蚓科動物參環毛蚓Pheretima aspergillum（E.Perrier）的干燥體。商品酒地龍（批號：6167）于2007年8月購自山東濟南同仁堂藥店，地龍酒炙品（批號：YH1）為生品6167的自制酒炙品。以上藥材憑證標本均保存于北京大學藥學院生藥標本室。

2 方法與結果

2.1 樣品的提取及吹掃捕集

將地龍藥材剪成約0.5 cm長的小段，稱取10 g樣品，加水100 mL，加熱回流提取，保持沸騰1 h，用紗布過濾。

吹掃捕集：量取上述濾液30 mL，置于吹掃捕集瓶中密封，接循環水，50℃水浴平衡20 min。將捕集管插入瓶的一端，另一端插入氮氣管，50℃吹掃1 h。之后將捕集管連在氮吹儀上，吹干捕集管內的水分。

2.2 儀器條件

熱脫附條件：將Tenax吸附管放入熱脫附系統TDSA2，自動進樣。

脫附條件：初始溫度35℃，保持0.5 min，延遲2 min，以60℃/min升溫到230℃，保持1 min，傳輸線溫度300℃。

冷進樣系統條件：初始溫度為-100℃，平衡0.2 min，以10℃/min升溫到 300℃，保持 0.5 min。

GC 條件：HB-5 毛細管柱，30 m×250 μm×0.25 μm；升溫程序：35℃保持2 min，以5℃/min的升溫速度升至200℃，再以10℃/min的速度升至270℃，保持5 min。不分流進樣。

MS條件：EI源；離子源溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；掃描范圍：m/z 30～400；掃描方式：全圖譜掃描；溶劑延遲：2 min。

2.3 樣品分析結果

每份樣品平行測定兩次，3個樣品的總離子流色譜圖（TIC）分別見圖1、2、3。地龍的氣味成分在 25 min 內出現。地龍水煎液中最主要的峰為8.5 min左右的己醛，此成分具有青草味道。

從TIC圖可看出，同一份藥材的生品與酒炙品差異并不顯著。酒炙品的多數色譜峰的峰面積要高于生品。地龍酒炙后氣相成分主要的變化是在TIC圖的9.5 min出現的糠醛峰明顯增高。商品酒地龍的色譜峰均較低，可能跟放置較久有關。將3份樣品的6次測定結果進行統計，提取出6次檢測中全部檢測到且匹配度大于0.90的色譜峰。結果共有32個成分符合上述要求，其中包含12個氣味成分，具體見表1。

實驗表明地龍生品、地龍酒炙品和商品酒地龍熱水煎液的氣味無明顯差別，酒炙后氣味成分含量無明顯降低。酒炙地龍水煎液在放置2 h后能明顯降低腥臭味。

圖1 地龍生品的TIC圖

3 討論

筆者曾設計單盲實驗，請實驗室12位同學分別對地龍酒炙前后的藥材和水煎液的氣味進行了評價，結果如下：①藥材：12人中有12人認為酒炙品腥味較大；②水煎液：12人中有10人認為酒炙品腥臭程度較大，1人認為生品腥臭程度較大，1人認為腥臭程度無明顯差別。受試者均反映兩者氣味有細微差別。水煎液放置2 h后12人全部反映酒炙品腥臭程度小于生品。

圖2 地龍酒炙品的TIC圖

圖3 商品酒地龍的TIC圖

表1 地龍酒炙前后水煎液共有揮發性成分

這一結果證明了酒炙并不能立刻使地龍藥材或水煎液的腥臭味降低，反而會在短時間內使腥臭味加重，而此實驗中地龍酒炙品色譜峰峰面積高于生品的結果也得到相同結論。推測原因為酒炙可促進地龍中氣味成分的揮發，水煎后氣味快速揮發，使得腥臭味加重，但放置一段時間后由于大部分氣味成分已散發出去，因此水煎液腥臭味降低。

另外，本實驗的結果表明酒炙后地龍水煎液的氣味成分并無明顯減少，相反多數揮發性成分的量有所增高，其中增高較明顯的為糠醛，有類似杏仁油氣味，但因該化合物含量很低，實驗中并未聞到其氣味。

本文采用吹掃捕集-GC-MS-嗅聞聯用的方法對地龍水煎液進行了分析。結果表明，酒炙前后水煎液中主要含有32個共有成分，其中12個為氣味成分，可作為控制地龍臭味的參考依據，為進一步研究動物藥去臭方法奠定了基礎。中藥的氣味研究目前尚處于空白狀況，本研究試圖建立一種適用于具腥臭味中藥的分析方法，以期對中藥矯臭解腥方法的研究提供幫助。

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