地龍酒炙前后水煎液氣味的吹掃捕集-GC-MS-嗅聞聯(lián)用研究

張 萌 徐 碩 高 志 宋煥祿 王 璇 蔡少青

1.北京大學(xué)藥學(xué)院，北京 100191；2.北京工商大學(xué)食品學(xué)院，北京 100048

廣地龍為鉅蚓科動物參環(huán)毛蚓Pheretima aspergillum（E.Perrier）的干燥體，具有清熱定驚、通絡(luò)、平喘、利尿等功效[1]，為中藥常用藥物。近年來的研究主要關(guān)注其抗凝血、溶栓和改善血液循環(huán)作用[2]。地龍在臨床多以水煎液形式使用，然而濃烈的腥臭味常常讓服用者難以忍受。一般認(rèn)為酒炙這種傳統(tǒng)的炮制方法具有矯臭解腥的作用[3-4]，而且酒炙地龍較生地龍具有更優(yōu)的活血通絡(luò)作用[5]，但目前對于上述矯臭解腥的原理以及藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)并不明確，且對地龍氣味成分的分析研究還未見報道。頂空法（靜態(tài)頂空）是一種以分析置于密封容器中的樣品上方的蒸汽組成為基礎(chǔ)的氣相色譜法，它能真實地反映樣品的氣味組成，揭示人們所嗅到的氣味本質(zhì)。吹掃捕集法（動態(tài)頂空）是利用高純惰性氣體連續(xù)通過待測樣品并攜帶揮發(fā)性有機物進入捕集裝置的色譜法。同靜態(tài)頂空相比，吹掃捕集技術(shù)能夠分析高分子量的揮發(fā)性和半揮發(fā)性的化合物，不需要使用溶劑萃取[6-7]。該技術(shù)具有樣品前處理簡單、靈敏度高、操作簡便、可實現(xiàn)在線測定以及富集倍數(shù)高的特點，其與氣相色譜（GC）-質(zhì)譜法（MS）聯(lián)用在揮發(fā)性物質(zhì)的分析中應(yīng)用廣泛[8-10]。

本文采用吹掃捕集-GC-MS-嗅聞聯(lián)用技術(shù)，對地龍水煎液進行了氣味成分研究，并比較了地龍酒炙前后氣味成分的變化，以期找到改善地龍水煎液腥臭味的方法。本實驗還加入了嗅覺檢測器，在氣相色譜柱末端安裝分流口，分流樣品到質(zhì)譜儀和嗅覺檢測器，使得對氣味成分的分析更加直觀。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 6890N GC系統(tǒng)、Agilent 5975c inert XL MS檢測器、Gerstel TDS/TDU/ALEX氣泵、Gerstel TDS3熱脫附系統(tǒng)、TDSA2熱脫附自動進樣器、三口吹掃捕集玻璃容器、水浴循環(huán)系統(tǒng)（國華2004-21超級恒溫水浴）、Gerstel thermo extractor、Gerstel Tenax TA 吸附管。

1.2 試藥

地龍生品（批號：6173）于2007年8月購自北京市同仁堂藥材公司，經(jīng)北京大學(xué)藥學(xué)院蔡少青教授鑒定為鉅蚓科動物參環(huán)毛蚓Pheretima aspergillum（E.Perrier）的干燥體。商品酒地龍（批號：6167）于2007年8月購自山東濟南同仁堂藥店，地龍酒炙品（批號：YH1）為生品6167的自制酒炙品。以上藥材憑證標(biāo)本均保存于北京大學(xué)藥學(xué)院生藥標(biāo)本室。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的提取及吹掃捕集

將地龍藥材剪成約0.5 cm長的小段，稱取10 g樣品，加水100 mL，加熱回流提取，保持沸騰1 h，用紗布過濾。

吹掃捕集：量取上述濾液30 mL，置于吹掃捕集瓶中密封，接循環(huán)水，50℃水浴平衡20 min。將捕集管插入瓶的一端，另一端插入氮氣管，50℃吹掃1 h。之后將捕集管連在氮吹儀上，吹干捕集管內(nèi)的水分。

2.2 儀器條件

熱脫附條件：將Tenax吸附管放入熱脫附系統(tǒng)TDSA2，自動進樣。

脫附條件：初始溫度35℃，保持0.5 min，延遲2 min，以60℃/min升溫到230℃，保持1 min，傳輸線溫度300℃。

冷進樣系統(tǒng)條件：初始溫度為-100℃，平衡0.2 min，以10℃/min升溫到 300℃，保持 0.5 min。

GC 條件：HB-5 毛細(xì)管柱，30 m×250 μm×0.25 μm；升溫程序：35℃保持2 min，以5℃/min的升溫速度升至200℃，再以10℃/min的速度升至270℃，保持5 min。不分流進樣。

MS條件：EI源；離子源溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；掃描范圍：m/z 30～400；掃描方式：全圖譜掃描；溶劑延遲：2 min。

2.3 樣品分析結(jié)果

每份樣品平行測定兩次，3個樣品的總離子流色譜圖（TIC）分別見圖1、2、3。地龍的氣味成分在 25 min 內(nèi)出現(xiàn)。地龍水煎液中最主要的峰為8.5 min左右的己醛，此成分具有青草味道。

從TIC圖可看出，同一份藥材的生品與酒炙品差異并不顯著。酒炙品的多數(shù)色譜峰的峰面積要高于生品。地龍酒炙后氣相成分主要的變化是在TIC圖的9.5 min出現(xiàn)的糠醛峰明顯增高。商品酒地龍的色譜峰均較低，可能跟放置較久有關(guān)。將3份樣品的6次測定結(jié)果進行統(tǒng)計，提取出6次檢測中全部檢測到且匹配度大于0.90的色譜峰。結(jié)果共有32個成分符合上述要求，其中包含12個氣味成分，具體見表1。

實驗表明地龍生品、地龍酒炙品和商品酒地龍熱水煎液的氣味無明顯差別，酒炙后氣味成分含量無明顯降低。酒炙地龍水煎液在放置2 h后能明顯降低腥臭味。

圖1 地龍生品的TIC圖

3 討論

筆者曾設(shè)計單盲實驗，請實驗室12位同學(xué)分別對地龍酒炙前后的藥材和水煎液的氣味進行了評價，結(jié)果如下：①藥材：12人中有12人認(rèn)為酒炙品腥味較大；②水煎液：12人中有10人認(rèn)為酒炙品腥臭程度較大，1人認(rèn)為生品腥臭程度較大，1人認(rèn)為腥臭程度無明顯差別。受試者均反映兩者氣味有細(xì)微差別。水煎液放置2 h后12人全部反映酒炙品腥臭程度小于生品。

圖2 地龍酒炙品的TIC圖

圖3 商品酒地龍的TIC圖

表1 地龍酒炙前后水煎液共有揮發(fā)性成分

這一結(jié)果證明了酒炙并不能立刻使地龍藥材或水煎液的腥臭味降低，反而會在短時間內(nèi)使腥臭味加重，而此實驗中地龍酒炙品色譜峰峰面積高于生品的結(jié)果也得到相同結(jié)論。推測原因為酒炙可促進地龍中氣味成分的揮發(fā)，水煎后氣味快速揮發(fā)，使得腥臭味加重，但放置一段時間后由于大部分氣味成分已散發(fā)出去，因此水煎液腥臭味降低。

另外，本實驗的結(jié)果表明酒炙后地龍水煎液的氣味成分并無明顯減少，相反多數(shù)揮發(fā)性成分的量有所增高，其中增高較明顯的為糠醛，有類似杏仁油氣味，但因該化合物含量很低，實驗中并未聞到其氣味。

本文采用吹掃捕集-GC-MS-嗅聞聯(lián)用的方法對地龍水煎液進行了分析。結(jié)果表明，酒炙前后水煎液中主要含有32個共有成分，其中12個為氣味成分，可作為控制地龍臭味的參考依據(jù)，為進一步研究動物藥去臭方法奠定了基礎(chǔ)。中藥的氣味研究目前尚處于空白狀況，本研究試圖建立一種適用于具腥臭味中藥的分析方法，以期對中藥矯臭解腥方法的研究提供幫助。

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