蛋白酶激活受體-2與抑癌基因P53、人表皮生長因子受體-2在乳腺癌組織中的表達及其意義

陸奕宇 蘇式兵

上海中醫(yī)藥大學中醫(yī)復雜系統(tǒng)研究中心，上海 201203

乳腺浸潤性導管癌（IDC），是一種常見、多發(fā)、嚴重威脅女性健康的惡性腫瘤。近年來發(fā)病率有明顯的上升趨勢，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多因素、多步驟的復雜過程，在其發(fā)生、發(fā)展過程中伴隨多種基因和蛋白的改變。相關(guān)研究表明，ER、PR、HER-2等生物分子標志物在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用，對判斷腫瘤的預后及指導內(nèi)分泌治療有重要的臨床意義[1]。通過對生物標志物的研究，可以更深入地認識乳腺癌的生物學行為。

PAR-2屬于PAR家族，為典型的七次跨膜G蛋白耦聯(lián)受體。PAR-2是胰酶受體，可被體內(nèi)多種內(nèi)源性激活劑激活[2]。PAR-2在胃腸道、胰腺、腎臟、肝臟、前列腺等器官廣泛表達[3]，同時在多種惡性癌癥中[4-5]高表達。近年來的研究提示，PAR-2與腫瘤細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。

P53基因是抑癌基因，分為野生型和突變型，野生型P53的半衰期很短，濃度很低，難以測出。突變型P53蛋白則半衰期延長，濃度增加，可用免疫組織化學方法測出。因此，一般測出的P53是突變型，P53陽性者預后較差。有50%的腫瘤帶有P53基因突變，P53突變是乳腺癌發(fā)生的早期信號，并貫穿于乳腺癌的發(fā)展演變過程。

原癌基因HER-2也稱為CerBb-2或Her-2/neu，是人類表皮生長因子受體（EGFR）家族的第2個成員。HER-2過表達會激活癌基因，促進腫瘤發(fā)生。HER-2通過與不同的EGFR配體作用后，表達水平及其活性發(fā)生變化，增加了腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。目前HER-2已被公認為是與乳腺癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的原癌基因。

筆者采用組織芯片的免疫組化染色法檢測PAR-2、P53、HER-2在乳腺癌組織的表達，并分析它們與臨床資料的關(guān)系，探討其在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

組織芯片（Od-CT-RpBre01）購自上海生物芯片公司。芯片具有76例乳腺浸潤性導管癌患者的手術(shù)組織樣本。所有乳腺癌病例均經(jīng)HE染色病理檢查確診，患者均為女性，年齡31～80歲，中位年齡55歲。所有病例術(shù)前未接受化療和放療。

PAR-2鼠抗人單克隆抗體（SAM-11），Santa Cruz公司；P53 鼠抗人多克隆抗體（E-5），Santa Cruz公司；HER-2 兔抗人單克隆抗體（2242），Cell Signaling Technology公司；免疫組化試劑盒，DAKO公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化方法 采用免疫組織化學抗原熱修復技術(shù)檢測各蛋白表達。嚴格按照試劑盒操作說明進行，DAB顯色。用枸櫞酸高溫高壓法進行抗原修復。

1.2.2 免疫組化結(jié)果判斷 染色結(jié)果判定參照Fromowitz等[6]的評分標準，無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性范圍＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；以上兩項結(jié)果相加，分值≥2分判定免疫組化染色為陽性（+）。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0對實驗數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗或Fisher精確概率法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 PAR-2、P53、HER-2在浸潤性乳腺癌組織的表達

76例病例中PAR-2陽性率為84.2%（64/76），P53陽性率為 43.4%（33/76），HER-2陽性率為 55.3%（42/76）。PAR-2、P53、HER-2在浸潤性乳腺癌組織的表達見圖1。

2.2 PAR-2、P53、HER-2與組織病理指標的關(guān)系

PAR-2、HER-2的表達與年齡、臨床分期無關(guān)；P53的表達與臨床分期有關(guān)（P=0.03）；PAR-2、P53的表達與組織學分級無關(guān)；HER-2的表達與組織學分級有關(guān)（P=0.034），陽性表達率越高者，越趨于腫瘤低分化；PAR-2、P53、HER-2的表達與腫瘤直徑均無關(guān)；PAR-2的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P=0.022）。 見表1。

圖1 PAR-2、P53、HER-2在浸潤性乳腺癌組織的表達（×400）

表1 PAR-2、P53、HER-2與組織病理指標的分析結(jié)果

2.3 PAR-2與P53或HER-2聯(lián)合與組織病理學指標的關(guān)系

PAR-2與P53同時表達為陽性的病例數(shù)占全部病例數(shù)的39.5%（30/76），且其陽性表達率與乳腺癌組織病理學分級顯著相關(guān)（P=0.046）；PAR-2與HER-2表達為陽性的病例數(shù)占全部病例數(shù)的 53.9%（41/76），PAR-2（+）且 HER-2（+）病例組的陽性表達率與組織病理學分級有關(guān)（P=0.005），陽性表達率越高者，越趨于腫瘤低分化。PAR-2（+）且P53（+）病例組的陽性表達率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移雖然沒有顯著性差異，但仍有相關(guān)的趨勢。見表2。

表2 PAR-2與P53或HER-2聯(lián)合與組織病理學指標的關(guān)系

2.4 PAR-2與P53或HER-2表達的關(guān)系

在64例PAR-2陽性表達的乳腺癌患者中，P53陽性為30例；12例PAR-2陰性表達中，P53陰性為9例。在64例PAR-2陽性表達的乳腺癌患者中，HER-2陽性為41例；在12例PAR-2陰性表達中，HER-2陰性為11例。PAR-2與HER-2表達有關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.001）。見表3。

表3 PAR-2表達與P53或HER-2的關(guān)系

3 討論

PAR-2與腫瘤細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，但其引起腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的具體機制尚不明確，可能與腫瘤細胞中存在大量活化的胰蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶、組織因子（tissue factor，TF）及表皮生長因子受體等相互作用有關(guān)。目前對其在腫瘤中的功能研究已有相關(guān)報道，如Su等[7]的研究表明PAR-2可能通過Gαi-c-Src-JNK-paxillin信號通路激活乳腺癌細胞并實現(xiàn)一系列功能。Fujimoto等[8]研究顯示，PAR-2在胃癌中過表達，并且與腫瘤的淋巴結(jié)浸潤相關(guān)，提示PAR-2與胃癌的進展有關(guān)。Jahan等[5]發(fā)現(xiàn)PAR-2在子宮頸癌中高表達，且生存率降低。關(guān)于PAR2和腫瘤轉(zhuǎn)移，目前雖也有一定的研究，但認識不多。PAR-2在乳腺癌方面的研究目前國內(nèi)尚無相關(guān)報道，國外亦僅有少量文獻報道。

本研究中P53陽性率與組織學分級、腫瘤直徑差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），而與臨床分期相關(guān)差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。但國內(nèi)外文獻關(guān)于P53表達與臨床分期、組織學分級、腫瘤直徑及ER、PR的關(guān)系報道并不一致[9-10]。因此，P53可作為判斷其預后的一個指標，但目前仍認為其不是一個獨立判斷預后的指標，其臨床意義需進一步研究探討。

本實驗研究顯示，HER-2在乳腺癌組織中陽性表達率為55.3%，其陽性表達與組織學分級，PR表達有關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），HER-2陽性表達率越高者，越趨于腫瘤低分化。相關(guān)研究顯示，HER-2陽性與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床病理分期有關(guān)，其產(chǎn)物過度表達常提示惡性程度高、預后差[11]。

本研究中PAR-2的表達與臨床分期、組織學分級、腫瘤直徑無關(guān)，差異無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05），與 ER、P53、HER-2的表達及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均相關(guān)差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），提示PAR-2與ER、P53、HER-2在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能存在著某種聯(lián)系。已有文獻提及PAR-2的表達與ER表達之間存在聯(lián)系，Collier等[12]的研究中觀察到，雌激素刺激后的MCF-7細胞中，隨著ER表達的激活，PAR-2的表達也隨之增加。50%～70%的乳腺癌患者有突變P53蛋白的表達，是乳腺癌重要的預后因素，目前有體外實驗報道[13]TF刺激血管內(nèi)皮細胞后，細胞內(nèi)P53的表達增加，而TF能夠與細胞因子Ⅶ結(jié)合后激活PAR-2[14]，來介導細胞信號轉(zhuǎn)導。另有研究報道，P53可以直接調(diào)控PAR家族中的PAR-1，野生型P53能夠抑制PAR-1的活化，同時突變型的P53可以激活PR-1功能。PAR-1與PAR-2同屬PAR家族，它們在腫瘤轉(zhuǎn)移中都扮演了重要的角色，同時亦有研究發(fā)現(xiàn)PAR-1和PAR-2之間也存在信號傳導[15-16]，共同參與腫瘤的轉(zhuǎn)移。上述研究提示PAR-2與P53可能通過TF或PAR-1等來實現(xiàn)某些腫瘤細胞功能。本研究中，PAR-2與HER-2之間的表達有關(guān)，但目前尚未有關(guān)于PAR-2與HER-2之間關(guān)系的研究報道。

綜上，通過本實驗發(fā)現(xiàn)PAR-2，P53，HER-2與乳腺癌某些臨床病理指標之間具有相關(guān)性，但與以往文獻報道結(jié)果仍有諸多不一致，仍需大樣本前瞻性的臨床研究來進一步證實它們在診斷乳腺癌以及指導治療方面的臨床價值。同時PAR-2與P53，HER-2表達上的相關(guān)性也揭示PAR-2在浸潤性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能協(xié)同上述蛋白執(zhí)行某些腫瘤細胞的功能。PAR-2能否作為未來乳腺癌診斷及治療的靶標，它在乳腺癌中究竟扮演了什么樣的角色?這些問題將在今后的研究中加以探討。

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