HPLC測定翼梗五味子中五味子酯甲的含量

丁蓓蒂 陳 浩 劉 航

四川省樂山市食品藥品檢驗所，四川 樂山 614000

木蘭科植物翼梗五味子Schisandra henryi Clarke，分布于我國長江以南各省區(qū)。為《四川省中藥材標準》2010年版“西五味子”來源之一，有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心等功效。根據(jù)文獻報道及藥效學(xué)研究結(jié)果，翼梗五味子中含有五味子酯甲、去氧五味子素、五味子乙素、五味子甲素等成分。為此，本文采用高效液相色譜法對翼梗五味子中五味子酯甲進行了含量測定研究，為進一步建立五味子藥材質(zhì)量標準提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

美國Agilent1100液相色譜儀;五味子酯甲對照品為中國藥品生物制品檢定所提供 (批號1529-201001，含量測定用);翼梗五味子購自樂山市中藥材公司 (樣1-2號)、樂山市龍馬藥業(yè) (樣3-4號)、成都中藥材市場 (樣5-6號);四氫呋喃為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱 Diamonsil C18(250×4.6mm)4μm;流動相四氫呋喃 -水 (40：60)，檢測波長為254nm，柱溫為35℃，流速為1.0ml/min。對照品及樣品的HPLC圖見圖1。

2.2 供試品溶液的制備 取樣品粉末 (過三號篩)約 1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理 (功率250W，頻率40kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 線性范圍的考察

精密稱取五味子酯甲對照品11.48mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液;精密量取貯備液 0.1、0.5、1.0、2.5、5.0，置 10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液及貯備液各10μl，注入高效液相色譜儀分別進行測定。以進樣量 (μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程為 Y=1187.7x-13.646，r=0.9999，結(jié)果表明五味子酯甲在 0.04592 ～4.592μg與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗 精密量吸取五味子酯甲對照品溶液10μl，連續(xù)進樣 5次，結(jié)果五味子酯甲峰面積的 RSD為 0.25%。

2.5 穩(wěn)定性試驗 精密量吸取供試品溶液20μl，分別于0，4，8，12，24h按上述色譜條件進樣測定，計算RSD為0.58%。結(jié)果表明供試品溶液中五味子酯甲在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗 精密稱取翼梗五味子藥材同批號樣品6份，每份約1.0g，按前述供試品制備方法及色譜條件進行五味子酯甲含量測定，測得五味子酯甲平均含量 (按干燥品計算) 為0.0612%，RSD為1.82%。

2.7 回收率試驗

精密吸取濃度為0.459mg/ml的對照品溶液1.0ml，共6份，分別置50ml錐形瓶中，水浴上揮干甲醇。取已知含量的樣品 (1號樣品，HPLC法測定含量為0.0612%)6份，每份約0.8g，共6份，精密稱定，置上述圓底燒瓶中，按擬定方法進行供試品溶液制備和五味子酯甲含量測定(按干燥品計算)，結(jié)果見表1。

表1 回收率測定結(jié)果

以上試驗結(jié)果表明，該方法準確度良好。

2.8 樣品測定

按正文含量測定方法測定6批樣品中五味子酯甲含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品的含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

3.1.1 測定波長的選擇

采用甲醇作溶劑制備五味子酯甲對照品溶液，在200～500nm波長下掃描其光譜圖，結(jié)果在254nm波長處有最大吸收，故測定波長選定為254nm。

3.1.2 流動相的選擇

采用流動相四氫呋喃-水 (40：60)對本品供試品溶液進行系統(tǒng)適用性考察，結(jié)果在該流動相下，本品五味子酯甲峰形對稱，理論板數(shù)6000，分離度符合要求。因此選定四氫呋喃-水 (40：60)作為測定流動相。

3.2 提取方法及時間的考察

取本品粉末1.0g，4份為一組，精密稱定，置錐形瓶中，每組分別精密加入甲醇25ml、乙醇25ml，稱定重量，分別超聲處理30min、45min、60min、90min或水浴上加熱回流30min、45min、60min、90min，放冷，再稱定重量，用所加溶劑補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。進樣量20μl，按上述選定的色譜條件實驗，結(jié)果表明：甲醇提取效果優(yōu)于乙醇，采用超聲處理30min與其余方法無明顯差異，因此選定超聲處理30min為本品提取方法。

3.3 本實驗建立的翼梗五味子藥材中測定五味子酯甲的高效液相色譜法，具操作性、穩(wěn)定性及代表性。測定了翼梗五味子多批次藥材中五味子酯甲含量，為五味子藥材質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

［1]國家藥典委員會.中國藥典［S].一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：210.

［2]中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志［M].第二十四卷.北京：科學(xué)出版社，1983：129-134.

［3]肖培根.新編中藥志［M].第三卷.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：284-291.