HPLC法測(cè)定孕坤通膠囊中芍藥苷的含量

宋志釗 劉 元 李星宇

廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022

孕坤通膠囊處方來源于廣西民間經(jīng)驗(yàn)方，主要由赤芍、千斤拔等11味中藥組成，具有活血化瘀，通經(jīng)活絡(luò)之功效，用于血瘀證女性不孕。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為女子不孕最常見原因之一是血瘀停滯，赤芍在方中起祛瘀止痛，活血通經(jīng)作用。研究表明赤芍抑制血小板聚集引，改善紅細(xì)胞的通透性，增加紅細(xì)胞對(duì)低滲張力的抗性，有一定穩(wěn)定紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的作用［1，2]。另外，赤芍總苷能明顯延長(zhǎng)大鼠和小鼠的凝血時(shí)間，并能延長(zhǎng)電刺激大鼠頸總動(dòng)脈血栓形成的時(shí)間。因此，摸索本方中赤芍的指標(biāo)成分芍藥苷的含量測(cè)定方法，可作為控制本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)之一?，F(xiàn)參考《中國(guó)藥典》2005年版一部［3]，測(cè)定孕坤通膠囊中芍藥苷的含量。

1 儀器與試藥

日本島津LC-10ATVP高效液相色譜儀，SPD-10AVP紫外檢測(cè)儀;威瑪龍色譜工作站;TC-C18柱 (4.6mm×250mm，5μm);KQ-100VDB雙頻數(shù)控超聲清洗儀。甲醇為色譜純，水為超純水，其余所用試劑均為分析純。芍藥苷對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用，批號(hào)110736-200526);孕坤通膠囊3批，批號(hào)為：100401、100402、100403，由南寧市冠峰制藥有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Appollo C18色譜柱 (4.6mm×250mm，5mm);檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;流動(dòng)相：甲醇 -0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液 (28：72);流速：1.0 mL·min-1;柱溫為室溫。理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于3000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品9.9mg，置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成396μg/ml對(duì)照品溶液，備用。精密吸取上述對(duì)照品溶液1.0mL，置10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得 (39.6μg·mL-1)。

2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物20粒，精密稱定，研細(xì)，混勻，取約0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇 20ml，超聲處理 30分鐘 (頻率45kHz、功率90W)，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍考察 精密稱取芍藥苷對(duì)照品9.9mg，置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成396μg/ml對(duì)照品溶液，備用。分別精密吸取0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml，分別置 10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣10ul，測(cè)定。以芍藥苷對(duì)照品進(jìn)樣量μg為橫坐標(biāo) (X)，峰面積積分值為縱坐標(biāo) (Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=6.94×105X+1.43×104，r=0.9997。結(jié)果表明：芍藥苷進(jìn)樣量在0.099 ～1.584μg之間與峰面積積分值呈線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 分別吸取同一供試品溶液 (100401)，進(jìn)樣5次，依次測(cè)定，即得。測(cè)得供試品RSD為0.42%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào) (100401)樣品，按供試品溶液制備方法制備6份，分別進(jìn)樣，測(cè)定，即得。結(jié)果測(cè)得芍藥苷為0.835mg/粒，RSD=0.48%(n=6)。表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別于0，4，8，12，16h進(jìn)行測(cè)定，即得。結(jié)果供試品中槲皮苷含量的RSD為0.47%，表明供試品溶液在16h內(nèi)保持穩(wěn)定。

表1 加樣回收試驗(yàn)測(cè)量結(jié)果 (n=6)

2.8 加樣回收試驗(yàn) 取已測(cè)知含量 (0.835mg/粒，批號(hào)100401)的供試品0.25g，精密稱定，精密加入396μg/ml芍藥苷對(duì)照品溶液1.2ml，按供試液制備項(xiàng)下的方法制備。結(jié)果芍藥苷平均回收率為98.2%，RSD為1.25%(n=6)，結(jié)果見表1。

2.9 樣品測(cè)定 按供試液的制備及檢測(cè)方法，測(cè)定3批孕坤通膠囊中芍藥苷含量 (mg/粒)分別為 0.846、0.732、0.798 。

3 討論

3.1 對(duì)芍藥苷對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描，其結(jié)果在230nm處有最大吸收，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。參照《中國(guó)藥典》2005年版一部里有關(guān)芍藥苷含量測(cè)定方法，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相，考察多個(gè)比例，最后確定甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液 (28：72)的比例較為適合。

3.2 采用超聲處理30min、加熱回流1h、索氏提取2h進(jìn)行提取方法考察，結(jié)果三者提取結(jié)果相差不大，但超聲處理更簡(jiǎn)便、快捷，故采用超聲處理法。采用甲醇、水、50%甲醇作提取溶劑進(jìn)行考察，用甲醇提取所得含量比高，且雜質(zhì)較少，故采用甲醇作為提取溶劑。以超聲處理15min、30min、45min，進(jìn)行提取時(shí)間考察，超聲處理15min，測(cè)得結(jié)果較低，超聲處理30min、45min，兩者無明顯差別，故超聲處理時(shí)間定為30min。

［1]劉超，王靜，楊軍.赤芍總甙活血化瘀作用的研究 ［J].中藥材，2000，23(9)：557-560.

［2]趙春景，王芳，赫飛.赤芍對(duì)乙肝黃疸患者紅細(xì)胞通透性的影響［J].中醫(yī)藥研究，1999，15(5)：42-43.

［3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典 (一部)［S].2005：109.