露兜簕氨基酸及無機微量元素分析

彭麗華 劉嘉煒 鄭家概 成金樂 冼美廷

1.廣州中醫藥大學中藥資源科學與工程研究中心，教育部 (省部共建)中藥資源科學重點實驗室，廣東 廣州 510006;2.廣東省中智藥業集團有限公司，廣東 中山 528437;3.廣東省廣州分析測試中心，廣東 廣州 510070

露兜簕為露兜樹屬植物露兜樹PandanuSTectorius Soland的干燥根和根莖。露兜簕在嶺南地區廣泛用于民間傳統醫學，具有平肝清熱，去濕利尿，發汗解表，行氣止痛的功效，用于治感冒發熱，風濕痹痛，肝火頭痛，肝炎、肝硬化腹水，尿路感染，腎炎水腫，眼結膜炎，跌打損傷等病癥［1-2]。露兜簕作為一種民間草藥在嶺南地區使用已有悠久歷史，并收載于廣東地方藥材2011年版。但有關露兜簕的現代藥理學和藥效物質基礎研究報道有限。早期植物化學研究表明含有豆甾醇和脂肪酸等化學成分［3]。最近我們課題組從露兜簕醇提取物中分離鑒定出一組新結構環木菠蘿烷三萜化合物 (研究結果另文發表)。但尚未見對露兜簕氨基酸和無機微量元素分析測定的報道。為了從多途徑探索該藥用植物的藥效物質基礎，本研究分析測定了露兜簕各種氨基酸和無機微量元素的種類和含量，共檢測出16種氨基酸和20種無機微量元素，旨在為露兜簕的藥效物質基礎和質量標準建立提供基礎證據。

1 材料

1.1 藥材 露兜簕收集于廣東省陽江市陽西縣程村鎮紅光村，經中國科學院華南植物園葉華谷教授鑒定為露兜樹屬植物露兜樹 (PandanuSTectorius Soland)的根和根莖。露兜簕常溫陰干，取適量藥材用粉碎機粉碎，過五號篩，60℃烘干至恒重，放置干燥器中備用。

1.2 儀器 全譜直讀等離子體原子發射光譜儀 (IRIS Advantage，美國 Thermo Jarrell Ash Corporation);AL204型電子天平 (瑞士METFLER TOLEDO);Agilent1100型高效液相色譜儀

1.3 試劑 氨基酸對照品、衍生試劑ortho-Phthalaldehyde(OPA)及Fluorene methoxycarbonyl(FMOC)購自SIGMA公司;硝酸，高氯酸，Na2HPO4等試劑均分析純;甲醇和乙腈為HPLC級。

2 方法

2.1 氨基酸含量測定

2.1.1 樣品處理 準確稱取0.2 g露兜簕干燥粉末置水解管中，加入2 mL HCl(6 M)，滴加兩滴新蒸餾的苯酚，將水解管置于冷凍劑中，冷凍3～5 min，抽真空，充入氮氣，再抽真空，充氮氣，在充氮氣狀態下封口，置110℃的恒溫干燥箱內水解23 h后，取出冷卻。將水解液濾過，去離子水多次洗滌水解管，將水解液全部轉移至100 mL容量瓶中，加入堿中和多余的酸后，去離子水定容。樣品平行重復3次。

2.1.2 衍生化 衍生在HP1050自動進樣器上在線自動完成，程序如下： (1)吸取2.0 μL硼酸鹽緩沖液 (pH=10.5); (2) 吸取 2.0 μL OPA; (3) 吸取 1.0 μL 樣品;(4) 混合 5 次; (5) 等待 1.00 min; (6) 吸取 1.0 μL FMOC;(7)混合5次;(8)等待1.00 min;(9)進樣。

2.1.3 液相色譜 Hypersil ODS色譜柱 (4.0×125 mm，粒徑5 μm); 流動相 (A)：Na2HPO4緩沖液 (PB，10 Mm，pH=7.2); 流動相 (B) ∶PB ∶MeOH∶MeCN(50∶35∶15)。線性梯度：在0～25 min內，流動相B以線性從0%上升至100%。流速：1.0 mL/min;柱溫40℃;檢測波長：0 min時，激發波長340 nm，發射波長450 nm，檢測一級氨基酸的OPA衍生物;20.5 min后，將波長切換至激發波長260 nm，發射波長305 nm檢測二級氨基酸 (脯氨酸)的FMOC衍生物，結果見表1。

表1 露兜簕根和根莖的各種氨基酸含量分析結果 (n=3，μg/g)

2.2 無機微量元素測定 精密稱取露兜簕粗粉 (0.5 g)，置凱氏燒瓶中，加5-l0 mL的硝酸-高氯酸 (4∶1)混合溶液，混勻，微波消解至溶液澄明，冒濃煙，最后消解液呈無色透明或略帶黃色，放冷，用2%硝酸溶液轉溶消解液至50 mL量瓶中，并加水定容稀釋至刻度，搖勻，即得。每份樣品平行重復3次，同法制備空白溶液。全譜直讀等離子體原子發射光譜儀測定樣品，結果見表2。

表2 露兜簕根和根莖中多種無機微量元素含量 (n=3，μg/g)

3 結果

3.1 氨基酸組成和含量 從表1中可見，露兜簕藥材共檢測到16種氨基酸，其中7種人體必需氨基酸，分別為亮氨酸，異亮氨酸，賴氨酸，苯丙氨酸，蘇氨酸，蛋氨酸及纈氨酸;含量較高的氨基酸有谷氨酸 (1.5μg/g)、天門冬氨酸 (1.3μg/g) 和亮氨酸 (1.0μg/g); 含量最低是蛋氨酸(0.1μg/g)。

3.2 無機微量元素種類和含量測定 采用等離子體原子發射光譜法檢測露兜簕粉末硝化產物，從表2中可見，共檢測出K、Ca、Mg、Si和 Sr等20種微量元素，其中含有Mg、Fe、Mn、Cr、Zn、Cu、Ni六種人體必需微量元素，含有Cd、Al、Pb三種有害重金屬元素。

4 討論

4.1 本研究采用柱前衍生液相色譜法分析露兜簕水解氨基酸，共分析檢測出16種氨基酸，總含量為10.5μg/g。其中亮氨酸，異亮氨酸和賴氨酸等7種人體必需氨基酸占其氨基酸總量的37%以上，可見露兜簕所含氨基酸的種類和含量都比較豐富。

4.2 本研究利用等離子體原子發射光譜法檢測露兜簕粉末硝化產物，共分析出Fe、Mn和Cr等二十種無機微量元素。其中Fe、Mn、Cr、Zn、Ni、Cu為人體必需微量元素，且鐵和錳的含量分別達358 μg/g和52.8 μg/g。微量元素對維持人體的新陳代謝是必不可缺的。研究表明中藥藥性藥效與微量元素種類及其含量有關［4]。本文實驗數據提示露兜簕所含無機微量元素在人體內可能具有某些生理和藥理活性。此外，露兜簕藥材中還檢測到Cd(0.4 μg/g) 和Pb(16.0 μg/g)等有害重金屬元素［5]。為了保證藥材飲片的質量和用藥安全性，露兜簕藥材的質量標準應考慮Cd和Pb等有害重金屬元素的檢測。

綜上所述，露兜簕藥材含有較豐富的人體必需氨基酸和無機微量元素，本論文實驗數據可為露兜簕藥材藥效物質基礎和質量標準建立提供基礎參考數據。

［1]南京中醫藥大學.中藥大辭典［M].上?？茖W技術出版社，1975：3863-3864.

［2]中國科學院華南植物研究所.廣東植物志 (第六卷) ［M].廣東科技出版社，1995：400-402.

［3]彭麗華，成金樂，詹若挺，等.露兜樹屬植物的化學成分及藥理活性研究進展［J].中藥材，2010，33(4)：640-643.

［4]秦俊法.中國的中藥微量元素研究［J].廣東微量元素科學，2011，18(1)：1-10.