HPLC-ELSD法測定排石膠囊中熊果酸的含量

徐富柱 程 龍

江蘇省南京同仁堂藥業有限責任公司，江蘇 南京 210012

排石膠囊的處方來源于中國藥典品種排石顆粒，由連錢草、車前子、木通、徐長卿、甘草、滑石等十味藥組成。該方具有清熱利水，通淋排石的功效，用于下焦濕熱所致的石淋，癥見腰腹疼痛、排尿不暢或伴有血尿，或泌尿系結石見上述證候者。原標準中采用分光光度法測定總黃酮的含量，缺乏專屬性。本研究改用HPLC-ELSD法測定君藥連錢草中熊果酸的含量，以更好的控制藥品質量。

1 儀器與試藥

Waters2695型液相色譜儀，Alltech-2000型蒸發光散射檢測器，Empower工作站，空氣發生器 (北京，中興匯利)，Millipore-Q純水器，梅特勒百萬分之一電子天平。

甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為雙蒸水。熊果酸對照品購自中國生物制品檢定所，批號為110742-200314。排石膠囊 (自制)。缺味陰性樣品：按處方分別配成相應的缺味處方藥，模擬制劑工藝，加相應輔料制備。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：漢邦 Lichrospher5-C18柱 (4.6mm×250mm，5μm);流動相：甲醇 -水 -冰醋酸 (83∶17∶0.1); 流速：1.0ml/min，柱溫：35℃;進樣量：20uL;ELSD檢測器參數：漂移管溫度：72℃，氣體流速：1.9L/min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取熊果酸對照品約16.0mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成濃度為0.64mg/ml的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備

精密稱取本品裝量差異項下內容物細粉5.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min(功率250W，頻率50KHz)，取出，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液25ml，蒸至適量，殘渣甲醇溶解轉移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備

取缺連錢草藥材的制劑5.0g，精密稱定，同供試品溶液方法制備陰性對照溶液并測定。結果陰性無干擾，見圖1～3。

圖1 熊果酸

圖2 排石膠囊

圖3 陰性對照

2.3 系統適應性與專屬性試驗

精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各進樣20uL，按2.1項下色譜條件測定，色譜圖見圖1-3。以熊果酸計，理論塔板數應不低于5000。

2.4 線性關系考察

取對照品溶液 (濃度為0.64mg/ml)分別進樣10ul，15ul，20ul，25ul，30ul，35ul，按 2.1 項下色譜條件測定，記錄峰面積。以進樣量的常用對數為橫坐標，以峰面積的常用對數為縱坐標，繪制標準曲線，得熊果酸的回歸方程為 lgA=1.41lgC+5.15，r=0.9991(n=6)，結果表明熊果酸在6.400μg-22.400μg范圍內呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

取對照品溶液按2.1項下色譜條件連續進樣5次，按已確定的色譜條件重復進樣5次，測定峰面積積分值，計算RSD為3.5%。

2.6 穩定性試驗

取供試品溶液，在室溫放置0，2，4，8，12，24小時后分別進樣，按2.1項下色譜條件測定。結果表明，樣品溶液在24小時內基本穩定，樣品峰面積的RSD為0.98%。

2.7 重復性試驗

取同一批號樣品，精密稱取6份，制成供試品溶液，按2.1項下測定，熊果酸的平均含量為1.83mg/g，RSD為1.64%，表明重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的制劑六份 (含量為1.83mg/g)2g，精密稱定，精密加入熊果酸對照品溶液 (3.80 mg/ml)1ml，揮干，照供試品溶液的制備方法制得溶液，測定，計算回收率，熊果酸的平均回收率為98.7%，RSD為2.10%，見表1。

表1 加樣回收率測定結果

2.9 樣品含量測定

取三批樣品，按供試品溶液的制備方法制備成供試品溶液，測定樣品含量，結果見表2。

表2 3批樣品含量測定結果

4 討論

4.1 連錢草具有利濕通淋、清熱解毒、散瘀消腫的功效，臨床上用于治療熱淋、石淋、濕熱黃疸等疾病，是排石膠囊處方中的君藥。本法采用高效液相色譜法測定連錢草中熊果酸的含量，能較好的控制該制劑質量。

4.2 曾對樣品提取溶劑進行考察，分別選用甲醇、三氯甲烷、乙醚作為溶劑，按供試品制備方法制備樣品，依色譜條件進樣，計算含量。結果表明甲醇提取率高，提取雜質少，故優選甲醇作為提取溶劑。

［1]高磊，石薔.HPLC測定遇上愈傷接骨膠囊中熊果酸的含量［J].中成藥，2008，30(2);287-289.