精制紫河車膠囊對去勢雌性小鼠的治療作用研究

張 悅，陳軍霞，卞 凌，潘林梅

（1.南京醫(yī)科大學附屬南京婦幼保健院，江蘇 南京 210004；2.南京中醫(yī)藥大學中藥復(fù)方分離工程重點實驗室，江蘇 南京 210029）

更年期綜合癥是更年期婦女卵巢功能減退，雌激素水平降低，引起月經(jīng)周期變化、潮熱、心悸、抑郁、易激動，注意力難于集中等。臨床上多補充雌激素以緩解癥狀，但長期應(yīng)用激素能誘發(fā)婦科腫瘤，本院在臨床中發(fā)現(xiàn)精制紫河車膠囊對更年期綜合征具有良好效果，為研究其機制，本實驗觀察精制紫河車膠囊對去勢雌性小鼠的治療作用。

1 材料

精制紫河車膠囊（南京市婦幼保健院制劑室，由胎盤等組成，內(nèi)含生藥0.5 g /粒）；己烯雌酚（北京中新制藥廠，批號：20110301）；水合氯醛（岳陽威特瑞化工有限公司，批號：20100821）；戊巴比妥鈉（南京生興生物技術(shù)有限公司，批號：20081216）；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、丙二醛（MDA）測試盒、谷胱甘肽 過氧化物酶（GSH-PX）測試盒，由南京生興生物技術(shù)有限公司提供；其余試劑均為分析純。

SPF級ICR雌性小鼠，上海斯萊克實驗動物有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證SCXK（滬）2007-0005，體質(zhì)量18～22 g，動物分籠飼養(yǎng)，室溫（22±1）℃，自由飲水攝食。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 去勢小鼠造模與分組給藥方法[1]

取ICR雌性小鼠，在鼠板上腹部朝上，用戊巴比妥鈉麻醉，在下腹部、離開脊柱兩側(cè)各2 cm處切口，分離肌肉，用小鑷子取出卵巢；結(jié)扎，剪去卵巢，其余組織放回腹腔內(nèi)，縫合。假手術(shù)組打開腹腔即縫合。注射適量抗生素，防止感染。小鼠作陰道涂片檢查，確定為間情期的小鼠進行下一步研究，將造模成功小鼠分為6組：假手術(shù)組、模型組、己烯雌酚組（0.001g/kg）、精制紫河車膠囊低、中、高劑量組分別為6×0.0026=（0.78、1.56、3.12 g/kg）。精制紫河車膠囊臨用前用生理鹽水配成混懸液，灌胃給藥，其余組灌胃相同容積生理鹽水溶液。

2.2 自主活動的影響實驗

各組動物在給藥后7 d，測定自主活動的影響，方法是將小鼠置于自主活動儀中，測定自主活動次數(shù)，精制紫河車膠囊各組與模型組相比，能顯著減少小鼠的自主活動次數(shù)（P＜0.01），己烯雌酚組也能減少自主活動次數(shù)。結(jié)果見表1。

表1 精制紫河車膠囊對去勢雌性小鼠自主活動的影響（±s，n=10）

表1 精制紫河車膠囊對去勢雌性小鼠自主活動的影響（±s，n=10）

注：與模型組比較*P＜0.05；**P＜0.01。

組別 劑量（g.kg-1）自主活動數(shù)假手術(shù)組 — 96.3±17.3*模型組 — 134.7±23.1己烯雌酚 0.001 85.2±26.8*精制紫河車膠囊組 0.78 84.8±18.9*1.56 79.6±22.7*3.12 75.8±17.5**

2.3 學習記憶的影響實驗

上述各組動物，在給藥10 d后，進行學習記憶的影響實驗，將小鼠放入反應(yīng)箱內(nèi)，通以36V交流電，訓練5 min并記錄錯誤次數(shù)，以此作為學習記憶能力。在24 h后重作測試，記錄第一次跳下平臺的潛伏期和5 min內(nèi)錯誤次數(shù)。

結(jié)果表明，精制紫河車膠囊各組與模型組相比，能改善小鼠的學習記憶能力；24 h后測試，精制紫河車膠囊各組與模型組相比，能延長潛伏期，明顯減少錯誤次數(shù)。己烯雌酚組亦有相同效果。結(jié)果見表2。

表2 精制紫河車膠囊對去勢雌性小鼠學習記憶能力的影響（±s，n=10）

表2 精制紫河車膠囊對去勢雌性小鼠學習記憶能力的影響（±s，n=10）

注：與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。

錯誤次數(shù)假手術(shù)組 — 2.3±1.5* 86.3±23.7* 1.9±1.1*模型組 — 5.8±2.1 26.1±26.8 3.7±1.4己烯雌酚 0.001 3.2±2.4* 79.3±17.7* 2.0±0.8*精制紫河車膠囊組 0.78 3.4±3.1* 58.6±19.4* 2.3±1.4*1.56 2.9±2.5* 60.1±22.6* 1.8±1.8**3.12 3.1±1.8** 67.3±25.2* 1.7±0.7**組別 劑量（g/kg-1）訓練錯誤次數(shù)潛伏期（S）

2.4 對鎮(zhèn)靜催眠的影響實驗

上述各組動物給藥15 d后，進行對鎮(zhèn)靜催眠的影響實驗研究，首先在動物給藥后1 h，腹腔注射戊巴比妥鈉（35 mg·kg），觀察如果小鼠15 min內(nèi)翻正反射消失，并且時間超過1 min，表明造模成功。記錄小鼠進入睡眠的潛伏期時間、睡眠小鼠數(shù)量及各組小鼠睡眠時間。

結(jié)果表明，精制紫河車膠囊各組與模型組比較，能增加進入睡眠狀態(tài)的小鼠數(shù)量.縮短小鼠進入睡眠的潛伏時間，延長睡眠時間。己烯雌酚組具有類似效果。見表3。

2.5 血清中SOD、MDA、GSH-PX含量測定

上述各組動物給藥40 d后，在最后一次給藥后1 h，眼眶后靜脈叢取血，分離血清，測定SOD、MDA、GSH-PX含量。

上述結(jié)果表明精制紫河車膠囊各組與模型組相比，能增加小鼠血清中SOD、GSH-PX活力，降低MDA含量，己烯雌酚組具有類似結(jié)果。見表4。

3 討論

本實驗通過建立小鼠更年期綜合征模型，觀察精制紫河車膠囊的作用機制，結(jié)果顯示，精制紫河車膠囊對去勢雌性小鼠具有鎮(zhèn)靜催眠作用，并能提高學習記憶能力，增加SOD、GSH-PX活力，降低MDA含量，表明精制紫河車膠囊對自由基損傷有一定的保護作用，這為其臨床用于治療婦女更年期綜合征提供了實驗依據(jù)。[2]

表3 精制紫河車膠囊對去勢雌性小鼠睡眠的影響（±s，n=10）

表3 精制紫河車膠囊對去勢雌性小鼠睡眠的影響（±s，n=10）

注：與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。

組 別 劑量（g/kg-1） 入眠小鼠（只）入眠率（%）潛伏期（min）睡眠時間（min）假手術(shù)組 — 0 0 16模型組 — 0 0 16己烯雌酚 0.001 10 100 6.76±1.62* 24.52±21.65**精制紫河車膠囊組 0.78 3 30 6.97±1.15* 25.76±18.54 1.56 5 50 7.81±1.64** 26.51±21.92 3.12 9 90 8.78±0.93** 27.45±20.43

表4 精制紫河車膠囊對去勢雌性血清SOD、MDA、GSH-PX的影響（±s，n=10）

表4 精制紫河車膠囊對去勢雌性血清SOD、MDA、GSH-PX的影響（±s，n=10）

注：與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 劑量（g/kg-1）SOD（U·mL-1）GSH PX（S）MDA含量（nmoL·mL-1）假手術(shù)組 — 72.34±6.15* 156.33±14.73* 4.92±2.73*模型組 — 55.87±12.13 119.15±22.83 7.74±1.63己烯雌酚 0.001 73.41±8.35* 175.75±27.76* 5.10±1.68*精制紫河車膠囊組 0.78 69.19±9.21* 58.6±29.71** 5.93±1.24 1.56 69.63±9.72* 60.1±26.17** 4.38±1.18*3.12 73.93±10.33** 67.3±23.81* 4.87±0.97*

[1]徐叔云,卞如濂,陳 修.藥理實驗方法學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:805,827.

[2]方玉榮,王立金,周 昕.圍絕經(jīng)期婦女血清性激素水平與自由基/血脂含量的變化[J].實用婦產(chǎn)科雜志,2004,20(3):151-152.