不同授粉品種對獼猴桃品種種子性狀、籽油含量及成分的影響

卜范文 ，何科佳 ，賈德翠 ，鐘彩虹 ，王仁才

（1.湖南省園藝研究所，湖南 長沙 410125；2.國家農業(yè)部華中地區(qū)果樹科學觀測實驗站，湖南 長沙 410125；3.長沙時鮮水果工程技術研究中心，湖南 長沙 410125；4.吉首市農業(yè)局，湖南 吉首 416000；5.中國科學院武漢植物園，湖北 武漢 430074；6.湖南省農業(yè)大學，湖南 長沙 410128）

獼猴桃在植物分類學上屬獼猴桃科（Actinidiaceae）獼猴桃屬（Actinidia Lindl）植物，其果實味道鮮美，營養(yǎng)豐富，有“果中珍品”、“Vc 之王”、“長壽之果”、“食療佳品”之美稱[1－3]。獼猴桃特別是獼猴桃籽油的保健價值正逐漸被人們發(fā)現(xiàn)和認可。經測定，獼猴桃籽粒中含油率平均為28.85%，其中不飽和脂肪酸含量高達90.37%，而亞油酸、亞麻酸含量平均占不飽和脂肪酸的74.83%[4－5]。“米良一號”獼猴桃的含油率為28.3%，氣相色譜測定其脂肪酸組成，α-亞麻酸含量高達63.99%，在迄今發(fā)現(xiàn)的所有含α-亞麻酸的植物中名列前茅，可作為補充n-3不飽和脂肪酸的重要保健油資源加以開發(fā)利用[6－8]。研究還發(fā)現(xiàn)某些種類的獼猴桃籽油中含有角鯊烯。隨著獼猴桃籽油保健功能及其相關產品的研發(fā)，對影響獼猴桃籽油含量和成分影響因子的研究也日漸深入，卜范文[9]等研究發(fā)現(xiàn)不同種類獼猴桃的籽油含量和成分差異較大，其中大籽獼猴桃種子出油率達30.57%，果實出油率為1.02%；闊葉獼猴桃出籽率達5.02%，種子出油率為14.97%；漓江獼猴桃角鯊烯含量高達0.52%，都極具開發(fā)價值。該研究以4個栽培品種（豐悅、翠玉、沁香、米良1號）為母本，以4個不同的授粉品種為父本，研究了不同授粉品種對不同獼猴桃品種籽油含量及成份的影響，旨在為通過栽培手段提高鮮食獼猴桃保健價值提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試品種 獼猴桃不同品種采自湖南省農業(yè)科學院園藝研究所獼猴桃品種資源圃。授粉試驗采用的雄性品種為楚源M1（中華獼猴桃）、楚源M3（中華獼猴桃）、楚源M5（美味獼猴桃）、幫增1號（美味獼猴桃），雌性品種為豐悅、翠玉、沁香、米良1號。

1.1.2 儀器與試劑 試驗主要儀器有旋轉蒸發(fā)儀RE-52AA（上海亞榮生化儀器廠）、高速萬能粉碎機FW-100型（江西紅星機械有限責任公司）、電子數(shù)顯游標卡尺（安微通和量具廠）、低溫冷卻液循環(huán)泵DLSB型（北京比朗實驗設備有限公司）、北京醫(yī)用離心機LDZ4－0.8（北京京立離心機有限公司）、循環(huán)水真空泵SHZ-Ⅲ（上海亞榮生化儀器廠）、數(shù)控超聲波清洗器KQ－250DE型（昆山市超聲儀器有限公司）、恒溫水浴鍋DK-S24（上海精宏實驗設備有限公司）、電熱恒溫干燥箱DHG-9246A（上海精宏實驗設備有限公司）、分析天平AY-220（日本島津）。主要試劑為石油醚（沸程60～90℃）、三氟化硼、無水乙醚、正己烷、甲醇、KOH等，均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 試驗設計 授粉試驗在湖南省園藝研究所獼猴桃栽培園完成。以湖南省園藝研究所獼猴桃栽培園豐悅、翠玉、沁香、米良1號為試材，每個雌性品種分別用不同雄性品種花粉進行授粉。4個雄性品種分別為楚源M1、楚源M3、楚源M5，以及對照幫增1號。用以上4種花粉分別給4個試材品種雌株授粉（開花之前應套袋），每處理授粉100朵花，重復3次。授完粉后立即套袋以避免其他花粉的污染，3 d后摘除袋子（均已經授粉成功）。

1.2.2 獼猴桃種子性狀及籽油含量測定 在果實充分成熟期（可溶性固形物在6.5%~7.5%），收集上述處理的獼猴桃果實各約5 kg，測定果實大小。待果實軟熟后，洗出種子，分別測定種子的性狀，包括大小、千粒重、出籽率及單果種子數(shù)量。采用超聲波+溶劑提取法提取獼猴桃籽油[10－12]，每處理重復4次，測定果實籽油含量。（1）果實、種子大小測定：用千分之一電子分析天平測定果實的單果重及種子千粒重；用0～150 mm電子數(shù)顯游標卡尺分別測定果實與種子縱、橫徑。（2）出籽率：出籽率（%）=種子重量（g）/果實重量（g）。（3）籽油含量測定：用高速萬能粉碎機粉碎已干燥去雜的獼猴桃種子（30~40目），每次稱取5 g，裝入三角瓶中并加入40 mL石油醚溶液（料液比8∶1），用數(shù)控超聲波清洗器進行萃取，30℃、200 w萃取20 min，再4 000 r/m離心3.5 min。離心后的溶液用旋轉蒸發(fā)儀蒸餾濃縮，回收溶劑，將提取的獼猴桃籽油放入干燥箱中（95℃）恒溫鼓風干燥，直到恒重。籽油含量=（樣品籽油重量／樣品種子重量）×100%。（4）單位果重含油量：單位果重含油量（%）=出籽率×籽油含量。

1.2.3 籽油成分的氣相色譜-質譜分析（GC-MS）籽油甲酯化后采用GC-MS分析籽油成分與含量，比較品種間及同一品種用不同授粉品種獲得的種子出油率的差異。（1）樣品甲酯化：取0.1 g籽油加入乙醚與正己烷混合液（混合比為2∶1）1 mL，再加入甲醇1 mL，皂化液（0.5 mol/L KOH—甲醇）1 mL，混勻。于60℃水浴皂化至油珠消失，冷卻后加入甲醇醋化液（14%二氟化硼—甲醇）1 mL，靜置10 min，加入純凈水至10 mL，振蕩，取上清液進行色譜分析。（2）色譜柱：Rtx-5ms，0.25 μm×0.25 mm×30 m；升溫程序：初溫170℃，保持3 min，升溫速率17℃/min，終溫 200℃，保持 17 min；進樣口：250℃；分流比：1∶30；柱流速：1.0；離子源溫度 200℃；接口溫度：220℃；質核比掃描范圍：40~500 m/z。（3）相對含量由其峰面積歸一化法計算。

2 結果與分析

2.1 不同授粉品種對單果重及出籽率的影響

在獼猴桃不同雌性品種間采用不同雄性品種授粉，對果實大小、重量影響較大（圖1）。采用中華獼猴桃雄株授粉，果實重量降低；采用美味獼猴桃雄株授粉，果實重量增加。其中，楚源M5授粉于米良1號時果實最大，平均單果重達119.9 g，楚源M1授粉于豐悅時果實最小，平均單果重僅65.4 g。不同授粉品種對果實出籽率影響較?。▓D2），僅楚源M1具有降低出籽率的趨勢。

2.2 不同授粉品種對種子性狀的影響

不同授粉品種間種子千粒重差異較?。▓D3），楚源M1授粉于翠玉、沁香、米良1號時與其他處理具有明顯差異。而楚源M3、楚源M5、幫增1號授粉時各品種間無顯著差異。其中，楚源M1授粉于豐悅時，種子千粒重最小，為1.34 g，楚源M5和幫增1號分別授粉于沁香和米良1號時，種子千粒重最大，達 1.87 g。

不同授粉品種間種子籽油含量無顯著性差異（圖4）。不同雌性品種間種子千粒重和籽油含量差異顯著，但不同授粉品種間無顯著性差異，說明雌性品種對種子性狀的影響高于授粉（雄性）品種。

2.3 不同授粉品種對籽油成分的影響

不同授粉品種授粉后，獼猴桃籽油中總不飽和脂肪酸的含量相對穩(wěn)定，各處理之間差異較?。▓D5，圖6）。但各處理之間不飽和脂肪酸的含量不同，如各授粉處理間α-亞麻酸含量差異不明顯，而角鯊烯含量則差異極為明顯。楚源M1授粉于米良1號的種子油中角鯊烯含量最高，達1.2%，楚源M5授粉于米良1號時含量最低，僅微量存在。沁香品種不同處理時角鯊烯含量也具有較大差別。中華獼猴桃品種翠玉、豐悅的不同授粉品種獲得的種子油中未能檢測出角鯊烯存在。這表明采用不同種類的花粉對獼猴桃種子內角鯊烯的形成和積累具有極大影響。

2.4 不同授粉品種對單位果重含油量的影響

不同授粉品種進行授粉處理對單位果重含油量的影響在各雌性品種間反應不同（圖7），不同授粉品種授粉于豐悅和沁香時單位果重含油量差別不明顯，而楚源M1授粉于翠玉和米良1號時，單位果重含油量明顯比其他3種處理要小。

3 小結

已有研究報道，采用不同授粉品種，對獼猴桃雌性品種的果實生長發(fā)育都有較大影響。該研究以4個栽培品種豐悅、翠玉、沁香、米良1號為母本，以楚源M1、楚源M3、楚源M5、幫增1號為父本，即授粉品種，研究了不同授粉品種對不同獼猴桃品種籽油含量及成份的影響。研究結果表明，采用不同授粉品種，對獼猴桃雌性品種的果實生長發(fā)育都有較大影響。雄性美味獼猴桃授粉可以增加出籽率、種子千粒重，但整體上對α-亞麻酸含量影響不大，對角鯊烯的積累也不利；楚源M1不利于提高種子大小等性狀，但對提高α-亞麻酸相對含量有一定作用，在增加角鯊烯含量方面效果顯著，在生產和育種上都可以加以利用。

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