熱休克蛋白60對冠心病的診斷價值

馬揚 梁麗

熱休克蛋白(heat shock protein，HSPs)是一組高度保守且廣泛表達的蛋白質分子家族，因其可隨多種應激反應如高溫、感染等而快速上調，亦被稱為應激蛋白(stress protein)。HSP60是其中的一個大家族，近來已成為研究的熱點，研究認為HSP60有致動脈粥樣硬化作用，并能促進炎癥反應釋放各種細胞因子從而引起粥樣斑塊不穩定［1，2］。本文通過測定血清HSP60水平，探討HSP60水平與冠狀動脈病變的發生及嚴重程度的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年12月～20011年5月在我院住院的冠心病患者78例(冠心病組)，所選病例均符合WHO關于缺血性心臟病的診斷標準。其中男45例，女33例;平均年齡(59±6)歲;其中急性心肌梗死(AMI)31例，不穩定型心絞痛(UAP)30例，穩定型心絞痛(SAP)17例，排除：(1)嚴重或活動性感染性疾病;(2)嚴重血液性疾病;(3)肝腎功能不全;(4)骨髓移植術;(5)風濕瓣膜性心臟病;(6)嚴重創傷或腫瘤;(7)近期使用抗氧化、非甾體類消炎鎮痛藥等;(8)免疫性疾病。選取本院健康體檢者70例為對照組，男40例，女30例;平均年齡(51±9)歲。組間年齡、性別比、體重指數、吸煙史、家族史差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法 所有受檢者禁食水8 h以上，于清晨抽取空腹靜脈血2 ml，4 000 r/min離心15 min分離血清，-80℃保存血清以備集中測定HSP60抗體。實驗時吸取上層血清100μl，應用酶聯免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)測定血清中可溶性HSP60水平，試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供，嚴格按照試劑盒操作，靈敏度為1.0μg/L。

1.3 統計學分析應用SPSS13.0統計軟件，計量資料以±s表示，兩組間比較采用t檢驗，多組樣本均數采用單因素方差分析(ANOVA)，組間比較采用dunnett-t檢驗或q檢驗，P ＜0.05為差異統計學有意義。

2 結果

2.1 冠心病組患者血清HSP60水平為(3 198±1 215)pg/ml，健康對照者為(396±201)pg/ml，2組差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 冠心病組各亞型間AMI與UAP組血清HSP60較SAP組明顯升高，AMI患者血清HSP60水平亦高于UAP組(P＜0.05)。見表1。

3 討論

HSP60在進化中高度保守，其主要定位于細胞線粒體內，作為分子伴侶生理狀態下，參與新生蛋白質多肽鏈的正確折疊及裝配，并可使未折疊、錯折疊失活的多肽鏈重新折疊產生生物活性，提高細胞對熱及其他刺激的耐受性。在應激狀態下如冷熱、缺血缺氧、糖分損失、組織創傷、游離自由基的作用、微生物感染以及有機毒物、重金屬、砷、福等環境因素，都可誘導HSP過度表達或異位表達，作為一種自身抗原被免疫系統識別，激發機體免疫應答或作為一種信號分子在信號轉導中起作用。

動脈粥樣硬化(AS)被認為是一種免疫炎性疾病，眾多研究表明炎癥標記物如CRP以及感染肺炎衣原體、巨細胞病毒抗體均AS的發生明確相關，免疫炎性反應是動脈粥樣硬化斑塊形成的始動因素，同時也是斑塊不穩定重要原因之一［3］。研究表明HSP60、LPS、ox2LDL等自身抗原可誘發機體自身免疫反應，其中HSP60是近來最為重視的抗原，由于人類與原核生物HSP60基因序列70%的同源性，應激狀態下的血管內皮細胞、平滑肌細胞HSP60表達增多，通過TLR受體信號通路誘導大量的細胞因子如 IL-6、IL-10、TNF-α、E-選擇素、ICAM-1、VCAM等，促進炎癥反應加速了粥樣斑塊形成［4］。同時外源HSP60與內源HSP60表位發生交叉反應，機體抗HSP60免疫反應增強，進一步導致血管損傷。

本研究中，冠心病患者較正常對照人群血清HSP60水平明顯增高，差異有統計學意義。且不穩定的冠心病患者(AMI，UAP)中，血清HSP60較對照組及SAP者均明顯升高。此外，心肌梗死患者血清HSP60亦高于不穩定型心絞痛患者。由此可見，HSP60水平與動脈粥樣硬化病變的嚴重程度成正比，HSP60水平上升可能預測斑塊的不穩定性，這與國內外學者研究一致。Zhang等［5］研究發現Hsp60水平升高導致冠心病風險增加，且急性心肌梗塞可導致Hsp60釋放。Xiao等［6］的5年隨訪研究顯示高水平的HSP60與早期頸動脈粥樣硬化相關，其可能為早期血管炎癥的促發因素。因此檢測血清HSP60水平將有助于冠心病的診斷，HSP60有望成為CHD的一個新的獨立危險因子。

表1 冠心病組與對照組間血清HSP60水平表達情況±s

表1 冠心病組與對照組間血清HSP60水平表達情況±s

注：與對照組比較，*P ＜0.05;與AMI比較，#P ＜0.05;與UAP比較，△P ＜0.05

AMI(n=31) 4 556±925 UAP(n=30) 2 914±492#SAP(n=17) 1 223±396#△

1 Xu Q，Schet G，Perschinka H，et al.serum soluble heat shock protein 60 is elevated in subjcets with atheroscleors is in a genera1 population.Circulation，2000，102：14-20.

2 Hasan A，Sadoh D，Palmer R，et al.The immune responses to human and microbial heat shock proteins in periodontal disease with and without coronary heart disease.Clin Exp Immunol，2005，142：585-594.

3 Wick G，Knoflach M，Xu Q.Autoimmune and inflammatory mechanisms in atherosclerosis.Annu Rev Immunol，2004，22：361-403.

4 Mandal K，Afzal AR，Brecker SJ，et al.Association of serum soluble heat shock protein 60 with toll-like receptor 4 polymorphism and severity of coronary artery disease.Heart，2006，92：683-685.

5 Zhang X，He M，Cheng L，et al.Elevated heat shock protein 60 levels are associated with higher risk of coronary heart disease in Chinese.Circulation，2008，118：2687-2693.

6 Xiao Q，Mandal K，Schett G，et al.Association of serum-soluble heat shock protein 60 with carotid atherosclerosis：clinical significance determined in a follow-up study.Stroke，2005，36：2571-2576.