CD44v6和ICAM-1在胃癌組織中的表達(dá)及意義

邵建富 王敬瑄 鄭寶軍 馮俊偉

胃癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)胃癌多年來(lái)一直是死亡率最高的惡性腫瘤。浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是腫瘤的最重要惡性特征之一，是胃癌治療失敗導(dǎo)致死亡的主要原因。本課題應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)正常胃組織、良性病變組織和胃癌組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1的表達(dá)水平，并觀察它們與臨床病理特征尤其是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，旨在探討各指標(biāo)在胃癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移中的作用，為胃癌的治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 取自2008年6月至2011年6月河北省唐山市人民醫(yī)院普外科及河北省唐山工人醫(yī)院腫瘤外科手術(shù)標(biāo)本及胃鏡活檢標(biāo)本共138例，其中胃癌組織78例，胃良性病變組織30例，正常胃組織30例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組45例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組33例，術(shù)前均未進(jìn)行化療或放療，臨床資料完整。

1.2 方法 將標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片。采用免疫組化S-P法，鼠抗人CD44v6、ICAM-1單克隆抗體、SP人組織檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn) 切片中陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞膜和胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒。按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%，5% ～25%，26% ～50%，＞50%分為－、+、++、+++四級(jí)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常胃組織、良性病變和胃癌組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1的表達(dá) CD44v6蛋白陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞膜上，在細(xì)胞膜周圍呈連續(xù)的棕黃色線狀或帶狀分布(圖1、2)。在正常胃組織及胃良性病變中有少量表達(dá)，陽(yáng)性率分別為3.33%和10.00%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。在胃癌組織中CD44v6表達(dá)陽(yáng)性率為78.21%，明顯高于正常胃組織及胃良性病變組織(P ＜0.01)。

ICAM-1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)位于胞膜或胞漿，表現(xiàn)為胞膜或胞漿內(nèi)出現(xiàn)彌漫棕黃色顆粒(圖3、4)。ICAM-1蛋白在正常胃組織中陽(yáng)性率為0，在胃良性病變中有極少量表達(dá)，陽(yáng)性率為3.33%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05);在胃癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率為65.38%，明顯高于正常胃組織及胃良性病變組織(P＜0.01)。見(jiàn)表 1。

表1 不同組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1蛋白表達(dá)水平比較

圖1 正常胃組織中CD44v6陰性表達(dá)(SP×200)

圖2 胃癌組織中CD44v6強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(SP×200)

圖3 正常胃組織中ICAM-1陰性表達(dá)(SP×100)

圖4 胃癌組織中ICAM-1強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(B)(SP×200)

2.2 胃癌組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 胃癌組織中粘附分子CD44v6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在低分化組為87.72%，明顯高于高、中分化組的50.00%和53.33%(P ＜0.05)，在 T3、T4 組為 92.59%和 93.33%，明顯高于 T1、T2 組的53.85%和 65.22%(P ＜0.05)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為82.22%，明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的72.73%(P ＜0.05)，在 TNM 分期Ⅲ、Ⅳ組為 88.00%和 94.12%，明顯高于Ⅰ、Ⅱ組的57.14%和68.18%(P ＜0.05)。在不同發(fā)生部位、大體類型及高和中分化組、T1和T2組、T3和T4組、Ⅰ和Ⅱ組、Ⅲ和Ⅳ組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

胃癌組織中粘附分子ICAM-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在T3、T4組為 81.48% 和 86.67%，明顯高于 T1、T2 組的 30.77% 和52.17%(P ＜0.05)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為 77.78%，明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的48.48%(P ＜0.05)，在TNM分期Ⅲ、Ⅳ組為76.00%和88.24%，明顯高于Ⅰ、Ⅱ組的42.86%和50.00%(P＜0.05)。在不同發(fā)生部位、大體類型、分化程度及 T1和T2組、T3和T4組、Ⅰ和Ⅱ組、Ⅲ和Ⅳ組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。見(jiàn)表2。

表2 粘附分子CD44v6和ICAM-1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系 例

2.3 胃癌組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1蛋白的表達(dá)檢測(cè)胃癌轉(zhuǎn)移 胃癌組織中粘附分子CD44v6蛋白陽(yáng)性表達(dá)檢測(cè)胃癌轉(zhuǎn)移的敏感度為82.22%，特異度為27.27%;ICAM-1蛋白高表達(dá)檢測(cè)胃癌轉(zhuǎn)移的敏感度為77.78%，特異度為51.52%;兩項(xiàng)并聯(lián)后檢測(cè)胃癌轉(zhuǎn)移的敏感度為97.78%，較之測(cè)定單項(xiàng)指標(biāo)明顯提高(P ＜0.05)，特異度為15.15%;串聯(lián)后檢測(cè)胃癌轉(zhuǎn)移的敏感度為20.00%，特異度提高到90.91%，與測(cè)定單項(xiàng)指標(biāo)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

表3 胃癌組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1蛋白的表達(dá)檢測(cè)胃癌轉(zhuǎn)移情況

3 討論

CD44v6是含V6變異體的CD44拼接變異體，它通過(guò)與透明質(zhì)酸(HA)結(jié)合，影響腫瘤細(xì)胞之間以及腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)的結(jié)合能力，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。本研究顯示粘附分子CD44v6在正常胃組織和胃良性病變組織中有少量表達(dá)，胃癌組織中表達(dá)明顯增加。證實(shí)了CD44v6在介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞間和細(xì)胞-基質(zhì)間的粘附，參與細(xì)胞移動(dòng)、腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等過(guò)程中的作用，促進(jìn)了胃癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移［1］。有研究發(fā)現(xiàn)CD44v6的表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，是判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后評(píng)估的重要指標(biāo)［2－4］。本研究結(jié)果顯示，粘附分子CD44v6與胃癌的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)，探討其機(jī)制可能為胃癌CD44v6蛋白的過(guò)度表達(dá)一方面介導(dǎo)了瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附，另一方面可能激活體細(xì)胞內(nèi)某些信號(hào)的傳導(dǎo)機(jī)制，使瘤細(xì)胞分泌蛋白水解酶，加速細(xì)胞外基質(zhì)的降解，有利于癌細(xì)胞的播散轉(zhuǎn)移。CD44v6陽(yáng)性細(xì)胞更易與毛細(xì)血管后小靜脈中的高柱狀內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，使腫瘤更易進(jìn)入淋巴系統(tǒng)及循環(huán)系統(tǒng)，同時(shí)HA降解產(chǎn)物還能啟動(dòng)血管的發(fā)生，這些都使CD44v6陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞獲得更強(qiáng)的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力。CD44v6蛋白強(qiáng)表達(dá)意味著胃癌有較惡的生物學(xué)行為和病期較晚，患者預(yù)后差，對(duì)CD44v6蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)的胃癌應(yīng)采用更為積極有效的綜合治療措施。

腫瘤細(xì)胞逃逸機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)其破壞是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞下調(diào)了靶抗原的活性，ICAM-1就是其中最重要的輔助性分子之一［5］。ICAM-1在腫瘤細(xì)胞和附近的基質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，憑借其膜外區(qū)的淋巴細(xì)胞功能相關(guān)蛋白-1(LFA-1)結(jié)合部位，與LFA-1組成一對(duì)配/受體，共同參與免疫、炎癥及腫瘤轉(zhuǎn)移等一系列重要生理和病理過(guò)程。本研究結(jié)果顯示，在正常胃組織中無(wú)1例表達(dá)，在胃良性病變中有極少量表達(dá)，在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率明顯提高。提示ICAM-1高表達(dá)可能與胃癌的發(fā)生有關(guān)。有研究證實(shí)ICAM-1的表達(dá)與胃癌的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及TNM分期存在相關(guān)性［6］。本研究結(jié)果顯示，ICAM-1與胃癌的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)。與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果一致，提示ICAM-1可能是反映胃癌侵襲轉(zhuǎn)移潛能的一個(gè)有效生物學(xué)指標(biāo)。其機(jī)制可能為胃癌細(xì)胞ICAM-1過(guò)度活化可促使過(guò)多可溶性ICAM-1進(jìn)入血液，競(jìng)爭(zhēng)性抑制了血液循環(huán)中ICAM-1依賴的主要組織相容性復(fù)合物-1(MHC-1類抗原)對(duì)游離癌細(xì)胞的免疫識(shí)別作用，從而使癌細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視，更容易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。但具體作用機(jī)制尚不十分清楚，進(jìn)一步研究ICAM-1在胃癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制，將會(huì)對(duì)胃癌的發(fā)生發(fā)展有新的認(rèn)知，從而開辟胃癌診斷治療的新思路。

本研究結(jié)果還顯示:胃癌組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1并聯(lián)檢測(cè)對(duì)檢測(cè)胃癌轉(zhuǎn)移的敏感度為97.78%，較之測(cè)定單項(xiàng)指標(biāo)明顯提高;串聯(lián)檢測(cè)對(duì)檢測(cè)胃癌轉(zhuǎn)移的特異度提高到90.91%，與測(cè)定單項(xiàng)指標(biāo)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。因此綜合分析上述兩指標(biāo)，能夠更準(zhǔn)確的判斷胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況，可為胃癌的隨訪、輔助治療、判斷預(yù)后等提供有價(jià)值的參考資料。

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