苦蕎麥總黃酮含量測定方法研究

施明毅，李建利,2，張繼斌，毛瓊麗

苦蕎麥Fagopyrum tataricum（L.）Gaertn為蓼科蕎麥屬植物，作為一種重要的小宗雜糧作物和藥食同源植物，在我國東北、西北、西南地區均有分布；其根及根莖為中藥苦蕎頭的來源，收錄于《中華本草》[1]?，F代研究表明[2~6]，苦蕎麥中主要有效成分為黃酮類化合物，其籽粒、根、莖、葉及花中均含有較多主要糧食作物所缺乏或不具有的黃酮等藥用成分，具有降血糖、降血脂，抗氧化和清除自由基等多種生理活性，對糖尿病、高血壓、高血脂、冠心病、中風等有一定的預防和輔助治療效果。勁牌有限公司技術中心旨在苦蕎酒降血糖、降血脂、降血壓方面的保健功能開發，因此，探索苦蕎麥提取工藝條件并制定準確的含量測定方法是很有必要的。本研究采用紫外-可見分光光度法，建立總黃酮含量測定方法，為苦蕎酒的開發提供參考依據。

1 儀器與材料

TU-1901型紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；DJ600-2型電子天平（成都倍塞克儀器表研究所）；DZKW-4電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業儀器有限公司）；KQ5200型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100080-200707)；苦蕎麥(勁牌有限公司技術中心提供，經考證為蓼科植物苦蕎麥 Fagopyrum tataricum（L.）Gaertn的果實部分)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 正交試驗法優選苦蕎麥提取工藝條件

根據有關文獻[2,6~8]及預實驗，以苦蕎麥總黃酮提取率為評價指標，選取溶媒用量、溶媒種類、提取次數和提取時間等主要影響因素為考察因素，進行L9(34)正交試驗優化提取工藝。因素、水平及試驗結果見表1～表3。

表1 總黃酮提取工藝因素水平表

表2 總黃酮提取的L9(34)正交試驗結果

表3 總黃酮提取方差分析表

結果表明，影響總黃酮提取率的各因素作用的大小是B＞D＞C＞A，且B和D因素有極顯著性差異，C因素有顯著性差異，A因素沒有顯著性差異，且水平A1和A2差異不大。綜合考慮提高總黃酮提取率和降低工業生產成本的要求，確定最佳提取工藝條件為A1B3C2D3，即100倍量甲醇，提取2次，每次2 h。3批驗證試驗結果表明，該工藝穩定可行。

2.2 苦蕎麥總黃酮含量測定方法研究

2.2.1 對照品溶液的制備 取蘆丁對照品適量(4.99 mg)，精密稱定，置于50 mL容量瓶中，加適量30%乙醇超聲使其溶解，放冷后用30%乙醇定容至刻度，搖勻，即得0.0998 mg﹒mL-1的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取本品粗粉0.5 g，置于燒瓶中，按正交試驗優選所得工藝條件進行制備，即加甲醇50 mL，加熱回流提取2次，每次2 h，過濾，合并濾液，用甲醇定容至100 mL，搖勻，即得。

2.2.3 測定波長的選擇 將蘆丁對照品溶液在200 nm～800 nm波長進行掃描，結果顯示在510 nm處有最大吸收，故選擇該波長作為測定波長。

2.2.4 測定方法 取1 mL供試品溶液置于10 mL容量瓶中，加入0.3 mL 5% NaNO2溶液，搖勻，放置6 min后加入0.3 mL l0% Al(NO3)3溶液，搖勻，放置6 min后加入2 mL 1 mol﹒L-1NaOH溶液，搖勻，放置15 min后用30%乙醇定容，搖勻。用紫外-可見分光光度計在510 nm處分別測定吸光度，試劑為空白。

2.2.5 標準曲線的繪制 精確吸取0.5，1，2，3，4，5 mL的蘆丁標準品溶液分別置于10 mL容量瓶中，照“2.2.4”項下方法測定吸光度A。以濃度c為橫坐標，吸光度A為縱坐標，得回歸方程為：A=0.01154c-0.00431，r=0.9998。結果表明，蘆丁對照品在0.0499 mg～0.4990 mg范圍內線性關系良好。

2.2.6 精密度試驗 取對照品溶液2 mL，照“2.2.4”項下方法測定吸光度A，并連續測定5次。結果吸光度平均值為0.2349，RSD為0.14%，見表4。結果表明，該方法精密度良好。

表4 精密度試驗結果（n=5）

2.2.7 穩定性試驗 取同一對照品溶液(0.0998 mg﹒mL-1)2 mL和苦蕎麥供試品溶液1 mL，分別置于10 mL容量瓶中，照“2.2.4”項下方法測定吸光度A，于0、15、30、45、60、90 min后各測1次。結果RSD分別為0.35% 和0.91%，見表5。結果表明，對照品和供試品在90 min內基本穩定。

表5 穩定性試驗結果

2.2.8 重復性試驗 取苦蕎麥粗粉0.5g，共5份，分別按“2.2.2”項下制備，并照“2.2.4”項下方法測定吸收度A，并計算含量。結果平均含量為4.03%，RSD為0.98%，見表6。結果表明，采用該方法提取與檢測，重復性良好。

表6 重復性實驗結果（n=5）

2.2.9 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量(4.03%)的苦蕎麥粗粉0.1 g，共5份，各加入46 mL甲醇，再準確加入4 mL的蘆丁標準品溶液(濃度為0.9196 mg﹒mL-1)加熱回流提取，其作法同“2.2.2”項下，照“2.2.4”項下方法測定吸收度A，并計算含量。結果平均回收率為100.98%，RSD為2.15%，見表7。結果表明，供試品溶液的制備及測定方法合理可行。

表7 加樣回收率試驗結果（n=5）

3 小結與討論

3.1 苦蕎麥是我國一種傳統的農作物，其種植歷史悠久，具有一定的藥用和保健作用，是我國藥食同源文化的典型體現，亦是國際糧農組織公認的優秀糧藥兼用之良種。近年來，苦蕎麥作為保健食品原料進行開發，已開發出苦蕎麥掛面、苦蕎麥快餐粥、苦蕎維夫餅干、苦蕎麥麥片、苦蕎麥沖劑、苦蕎茶等多種產品。目前市場上以苦蕎作為原料開發的白酒亦不在少數，具有良好的接受基礎和市場基礎?？嗍w的相關產品開發與運用，前景看好。

3.2 實驗結果發現，按優選工藝條件提取的苦蕎麥總黃酮含量高達4.03%，高于文獻報道的1.97%~3.03%[6]。紫外-可見分光光度法具操作簡單、準確度高、重現性好等優點。本研究優選所得提取工藝條件穩定可行；建立的含量測定方法穩定性好，合理、可行，可為苦蕎酒的開發提供參考依據。

[1] 國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海:上海科學技術出版社,1999,1279.

[2] 孫博航,吳雅清,高慧媛,等.苦蕎麥的化學成分[J].沈陽藥科大學學報,2008,25(9):541.

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