JWA基因＋723G／T基因型單核苷酸多態性對表淺性膀胱癌患者預后的影響

關云哲

（長春市中心醫院，吉林 長春130051）

在我國膀胱癌位于泌尿系統腫瘤首位，且有上升趨勢。90%的膀胱腫瘤為尿路上皮癌，其中70%的初發患者為表淺性膀胱癌［1］。手術是治療的關鍵，術后灌注化療可以有效降低術后復發率，提高生存率［2］。膀胱癌患者的復發與膀胱癌治療過程中出現的耐藥性有關［3］。

本文通過測序檢測惡性表淺性膀胱癌患者JWA基因中＋723T／G的單核苷酸多態；應用Kaplan－Meier來確認JWA基因中＋723T／G的單核苷酸多態性對患者生存率的影響及JWA基因中＋723T／G對順鉑治療的淺表性膀胱癌患者預后的影響。

1 對象與方法

1．1 對象

長春市中心醫院泌尿外科2007－2010年經病理證實的膀胱癌標本52例，進行分組研究。單純手術治療組16例，中位年齡52（31－76）歲，手術加術后順鉑化療治療組36例，中位年齡57（29－84）歲。

1．2 實驗方法

從組織樣本中提取全基因組DNA，通過PCR檢測JWA基因外顯子3序列。PCR引物：

Forward： 5′－CTTCGGAACCTCAAGAACAAACT－3′23bp

Reverse： 5′－TCTGAGGTCTTCTCTCTGAAACATC－3′25bp

產物大小為：328bp［4］。PCR擴增循環參數：95℃預變性5min，接著進入循環，首先95℃變性30 s；然后按53℃復性40s；接著72℃延伸45s，循環33次后72℃延伸10min。產物通過軟件Chromas處理。經測序公司測序在＋723位點發現T／G單核苷酸基因多態性。

1．3 統計學分析

本實驗數據采用SPSS17．0軟件包進行統計學處理，組間樣本均數比較采用方差分析，以P＜0．05作為有無顯著性差異的判斷標準。通過Kaplan–Meier方法以存活時間為非獨立變量，來檢驗當控制某一層因素后對其他研究因素不同水平的生存時間比較的影響分別進行分析，存活率的組間比較應用差異顯著性log－rank檢驗（生存期為患者第一次手術為起始）。

2 結果

2．1 JWA基因序列分析

近年來有關腫瘤進展機制的分子生物學研究提示：人群中不同個體之間的基因存在差異性或多態性，這種多態性可能與多種疾病的發生發展有密切的關系。在52例膀胱癌患者中，檢測JWA基因第3號外顯子 ＋723位點的多態性，25例患者（48．1%）為 ＋723T／G 基因型，氨基酸改變為L62M，比一些文獻報道的要更高一些；27例患者（51．9%）為 ＋723G／G型。并未檢測出＋723T／T基因型。（各組測序結果詳見表1）

表1 T／G單核甘酸多態性測序結果

2．2 JWA＋723T／G基因狀態對表淺性膀胱癌患者生存期的影響

52例膀胱癌患者的平均生存期為20．6月。接受手術治療的患者（n＝16）的平均生存期為11．7月，接受順鉑和手術聯合治療的患者（n＝36）的平均生存期為22．5月（P＜0．05）。手術聯合順鉑治療的患者預后效果較好，這與文獻結果一致［5］。檢測JWA＋723T／G基因型患者的平均生存期為23．6月，JWA＋723G／G基因型患者的平均生存期為15．7月（P＝0．057）。JWA＋723位點T／G基因型似乎對表淺性膀胱癌患者的生存期影響更大。

2．3 JWA＋723T／G基因狀態對經順鉑治療的表淺性膀胱癌患者生存期的影響

在36例經順鉑治療的患者的樣本中，有18例為JWA＋723T／G基因型，18例是JWA＋723G／G基因型，其平均生存期分別為26．2月和19．3月（P＝0．036）。數據顯示JWA＋723位點TG基因型對順鉑用藥患者的生存期有顯著的影響。

3 討論

膀胱癌是成人最常見的惡性腫瘤，是具侵襲性的腫瘤，診斷為淺表性膀胱癌者，病人的平均生存期少于五年［6］。

膀胱癌的發生和發展是一個多因素的結果，具體發病機制不完全清楚［7］，膀胱細胞向瘤細胞的轉變也是一個復雜的過程。實驗表明有很多基因和蛋白參與了這一過程，導致細胞周期發生變化、信號傳導通路異常，從而導致細胞增殖和血管增生的異常，在膀胱癌的發生和發展中起到一定作用［8］。

手術治療是膀胱腫瘤最有效方法，化療是重要的輔助治療手段對放療敏感的患者，化療也是很好的聯合方法［9］。順鉑雖然臨床應用后反應良好［10］，同其他化療藥物一樣，表淺性膀胱細胞瘤對順鉑也易產生耐藥性。目前研究認為XRCC1基因和JWA基因功能在對抗順鉑耐藥有一定作用［11］。本研究提示JWA＋723位點T／G基因型似乎對表淺性膀胱癌患者的生存期影響更大。在36例接受順鉑治療的患者樣本中，JWA＋723位點T／G基因型患者（n＝18）與JWA ＋723位點G／G基因型患者（n＝18）兩組樣本量相對平衡，發現兩組生存期統計學有顯著差異（P＝0．036）。在52例表淺性膀胱癌患者的研究中，JWA＋723位點T／G基因型患者占48．1%，高于之前的研究［12］，不能排除這種高頻性的表型由樣本數量較少或種族差異所引起的。

在少量樣本中，JWA＋723T／G基因型的作用效果可能不能充分顯示，然而相對平衡的數據卻有利于對患者生存期的分析。在小樣本研究中，JWA＋723位點T／G基因型的影響并沒有完全體現在患者的存活上。

由于膀胱癌具有侵襲性生長特性，任何單一的手段都難以達到真正的治愈。因此，提高膀胱癌的治療效果寄希望于綜合治療。

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