葛花多糖對X射線照射小鼠抗氧化應(yīng)激能力的影響

陳奕冰，柳鴻敏，馮艷群，李 路，吳巖林，李 靜

（吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，吉林 長春130021）

放射治療是治療惡性腫瘤主要手段之一，但是其在殺傷腫瘤細胞的同時也會對機體造成一定程度的損傷，包括氧化應(yīng)激損傷、造血系統(tǒng)的功能異常、免疫功能障礙等，因此，放射防護劑的應(yīng)用對保護患者正常組織，提高放射劑量，增加治愈率及醫(yī)護人員、其它人群的輻射防護具有重要意義［1］。

目前臨床應(yīng)用的輻射防護劑主要有以下幾類：雌激素類化合物、氨巰基化合物、雌激素類化合物、硫辛酸類化合物、細胞因子和植物多糖及中藥復(fù)方等［2－6］。天然植物毒副作用小、資源豐富，現(xiàn)已成為輻射防護藥物研究的新熱點，葛花為豆科植物葛（Pueraria lobata（Willd．）Ohwi）的干燥未開放的花，主產(chǎn)湖南、河南、廣東等地資源豐富［7］。葛花具有解酒醒脾，治傷酒發(fā)熱煩渴、不思飲食、嘔逆吐酸、吐血、腸風(fēng)下血等功效［8］，是傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中最具代表性的解酒藥物。葛花的乙醇提取物能防治酒精性肝損傷能明顯減少模型動物的肝臟系數(shù)、降低血清中的ALT和AST水平［9］。但有關(guān)葛花多糖的抗輻射作用研究較少。本文以X射線照射損傷小鼠為模型，觀察葛花多糖對照射損傷小鼠抗氧化應(yīng)激能力的影響，探討葛花多糖的抗輻射作用，為研究天然輻射防護劑的奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1．1 試驗藥物制備

葛花購自吉林大藥房，經(jīng)李平亞教授鑒定為豆科植物葛（Pueraria lobata（Willd．）Ohwi）的干燥花蕾。常規(guī)方法提取及純化葛花多糖。

1．2 主要試劑儀器

SOD試劑盒、GSH－px試劑盒、CAT試劑盒（南京建成生物工程研究所）；754紫外可見光分光光度計 （山東高密彩虹分析儀器有限公司）；（LD25－2低速自動平衡離心機（北京醫(yī)用離心機廠）。

1．3 實驗動物及分組處理

健康昆明種雄性小鼠60只，體重（20±2）g，由吉林大學(xué)實驗動物中心提供。

常規(guī)喂養(yǎng)5天后，隨機分為6組，每組10只。除正常對照組和照射對照組外其余4組分別給予不同劑量的葛花多糖。①正常對照組：不照射，以蒸餾水代替藥物；②低劑量組：不照射，每天灌胃給藥（300mg／kg．bw．）；③高劑量組：不照射，每天灌胃給藥（600mg／kg．bw．）；④照射對照組：X 射線照射，以蒸餾水代替藥物；⑤低劑量照射組：X射線照射，每天灌胃給藥（300mg／kg．bw．）；⑥高劑量照射組：X射線照射，每天灌胃給藥（600mg／kg．bw．）。

連續(xù)給藥14d。末次給藥后以X射線對照射對照組、低劑量照射組、高劑量照射組小鼠進行一次全身均勻照射，總劑量為5．0Gy，照射后24h將小鼠處死，取肝臟，用生理鹽水制成10%的組織勻漿，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?0］。

1．4 照射條件

小鼠經(jīng)X射線全身均勻照射，劑量率為1．0Gy／min，電壓180kV，電流18mA，濾板為0．5 mm Cu＋1．0mm Al，照射源距靶中心垂直距離50 cm，總劑量為5．0Gy。

1．5 小鼠肝臟組織中SOD、GSH－Px、CAT的活力的測定

按照試劑盒說明書方法操作，測定小鼠肝臟組織中SOD、GSH－Px、CAT的活力。

1．6 小鼠肝臟組織中MDA含量的測定

采用硫代巴比妥酸（TBA）顯色法測定MDA的含量［11］。取10%的肝組織勻漿400μL于試管中，同時取同樣體積的標準應(yīng)用液（MDA，10nmol／mL）做對照組，分別向上述溶液中加入20%的三氯乙酸2．5mL，混勻，再加入1%的TBA 1．0mL，混勻，沸水浴反應(yīng)40分鐘，用流水冷卻至室溫，2000rpm離心10min，吸取上清，在532nm下波長下，用蒸餾水調(diào)零，1cm比色杯，測定吸光度值。

1．7 小鼠肝臟組織中蛋白含量的測定

采用考馬斯亮藍比色法［21］測定小鼠肝臟組織中蛋白含量。將肝組織勻漿用生理鹽水稀釋成1%的組織勻漿。取樣品30μl，加入0．97ml的生理鹽水，再加入3．0ml的考馬斯亮藍溶液，混勻，靜置10min。用1．0ml生理鹽水和3．0ml的考馬斯亮藍的混合液調(diào)零，在595nm波長下，1cm比色杯測定吸光度值。

1．8 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS16．0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析組間比較采用t檢驗，P＜0．05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 葛花多糖對X射線照射小鼠肝組織中SOD活力的影響

從表1可以看出照射對照組的SOD活力明顯低于正常對照組（P＜0．05），高劑量照射組的SOD活力明顯高于照射對照組（P＜0．05），低劑量照射組的SOD活力也高于照射對照組，但差異無顯著性。

表1 葛花多糖對X射線照射小鼠肝組織中SOD活力的影響 （±s）

表1 葛花多糖對X射線照射小鼠肝組織中SOD活力的影響 （±s）

＊P＜0．05與正常對照組相比 ΔP＜0．05與照射對照組相比

組別 n SOD（U／mgprot）正常對照組10 245．46±53．28低劑量組 10 245．19±53．08高劑量組 10 243．52±46．31照射對照組 10 136．98±30．73＊低劑量照射組 10 169．33±35．01＊高劑量照射組 10 192．13±59．22＊Δ

2．2 葛花多糖對X射線照射小鼠肝組織中GSHPx活力的影響

由表2可見，與正常對照組比較，照射對照組的GSH－Px活力明顯降低（P＜0．05），與照射對照組比較，高劑量照射組的GSH－Px活力明顯升高（P＜0．05），低劑量照射組的GSH－Px活力也高于照射對照組，但差異無顯著性。

表2 葛花多糖對X射線照射小鼠肝組織中GSH－Px活力的影響（x－±s）

2．3 葛花多糖對X射線照射小鼠肝組織中CAT活力的影響

從表3可以看出照射對照組CAT活力明顯低于正常對照組（P＜0．05），高劑量照射組的CAT活力明顯高于照射對照組（P＜0．05），低劑量照射組的CAT活力雖然高于照射對照組，但差異無顯著性。

表3 葛花多糖對X射線照射小鼠肝組織中CAT活力的影響（x－±s）

2．4 葛花多糖對X射線照射小鼠肝組織中MDA含量的影響

表4數(shù)據(jù)顯示照射對照組MDA含量明顯高于正常對照組（P＜0．05），高劑量照射組的 MDA明顯低于照射對照組（P＜0．05），低劑量照射組的MDA也低于照射對照組，但差異無顯著性。

表4 葛花多糖對X射線照射小鼠肝組織中MDA含量的影響（x－±s，n＝10）

3 討論

從本實驗結(jié)果看，與正常對照組比較，照射對照組小鼠肝組織中的SOD、GSH－Px和CAT的活力顯著降低，說明X射線照射后小鼠的抗氧化酶的水平顯著下降，各種自由基對正常組織細胞的損傷隨之增多，而丙二醛含量的升高也證實了這結(jié)論，此結(jié)果也說明X射線損傷小鼠模型的建立是成功的。與正常對照組比較，葛花多糖的高劑量和低劑量給藥組小鼠的各項氧化指標沒有顯著差別，提示本實驗選擇的兩個劑量未對小鼠產(chǎn)生毒性。葛花多糖高劑量照射給藥組小鼠肝組織中的SOD、GSH－Px和CAT活力顯著升高，MDA顯著下降，提示葛花多糖能逆轉(zhuǎn)X射線照射損傷小鼠的SOD、GSH－Px、CAT活性的降低，清除輻射產(chǎn)生的自由基從而降低丙二醛（MDA）的含量提高機體的防御能力，提示葛花多糖可能是通過提高抗氧化酶體系活力、減輕自由基對組織細胞的損傷來發(fā)揮作用的。由于本實驗是在對小鼠給藥14天后才進行照射的，因此實驗結(jié)果提示高劑量葛花多糖增強X射線照射小鼠抗氧化應(yīng)激能力，對小鼠x射線損傷具有一定的預(yù)防保護作用，葛花資源豐富可作為輻射防護劑進一步研究開發(fā)。

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