消銀膠囊水提工藝研究

寧艷潔，孫 虹，張貴華，符潤娥，楊雙瑞，王利杰，李彬彬，

（1.云南中醫學院，云南 昆明 650011；2.云南省中醫醫院，云南 昆明 650021）

銀屑病（Psoriasis）是一種常見并易復發的慢性炎癥性皮膚病[1]。典型皮損為鱗屑性紅斑，是一種以角質形成細胞過度增生、炎癥細胞浸潤和新生血管形成為主要組織病理改變的慢性炎癥性皮膚病。我國人群發病率達到0.72%[2]，男性多于女性，北方多于南方，城市高于農村[3]，春冬季易發或加重，夏秋季多緩解。銀屑病按臨床表現的不同可分為尋常型、膿皰型、紅皮病型、關節炎型4種，臨床上又以尋常型最多見。消銀膠囊是在孫虹教授多年臨證治療尋常型銀屑病血熱證湯劑的基礎上，根據方中各種藥物的理化性質等進行的膠囊工藝研究，方便患者長期服用，提高療效。

1 處方組成

原方由水牛角、生地、丹皮、紫草、白花蛇舌草、重樓、生地榆、生槐花、小紅參、紅花、丹參組成。

2 儀器與試藥

2.1 儀器 美國Agilent 1100高效液相色譜系統，包括：真空脫氣機，四元梯度泵，自動進樣器，二級管陣列檢測器，色譜工作站；Diamonsil Cl8柱（5μ250×4.6 mm）；KQ－500DV 型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；奧豪斯AR124CN型電子分析天平 Max＝120 g d＝0.1 mg（上海天平儀器技術有限公司）；永光明DZF－3型真空干燥箱（北京永光明醫療儀器廠）。

2.2 試劑 甲醇、蒸餾水；甲醇（Fisher）為色譜純，其余試劑為分析純。丹酚酸B標準品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號111562－200605）。

2.3 水提藥材 生地（批號：25456）、丹皮（批號：25664）、白花蛇舌草（批號：25745）、生地榆（批號：25325）、丹參（批號：25471），均購于昆明市興佳中藥材經營部，并通過云南中醫學院藥劑實驗室鑒定。

3 制劑工藝研究

3.1 水蒸氣蒸餾法提取丹皮揮發油 取5倍處方量丹皮，即75 g。粉碎，過2號篩（850±29μm 24目），制成粗粉。均分為3組，即每組25 g，進行平行實驗。取3只500 mL圓底蒸餾燒瓶，將3組丹皮粗粉放入，分別加入10倍量純凈水，即250 mL，室溫浸泡2 h。2 h后對3份樣品進行水蒸氣蒸餾，觀察餾出液體積，至210 min后，餾出液體積均不再增加。將餾出液放冷，冰箱冷藏靜置過夜，可見白色針狀結晶析出，真空抽濾，濾取結晶，40℃干燥30 min，稱重，算得平均提取率為2.2002%。將丹皮提取后剩余藥渣均分為15份，取其中3份做藥材吸水率實驗，取其中9份做水提正交實驗，另外3份備用。

3.2 水提工藝正交實驗

3.2.1 藥材吸水率考察 按處方1／3量取干燥的藥材：生地10 g，生地榆10 g，白花蛇舌草10 g，丹皮渣5 g（共35 g）、1／2丹參5 g，共稱3份。加10倍水浸泡24 h，藥材全部透心，濾出全部未被吸收的水，濕藥材稱重，按公式計算出藥材吸水率。

吸水率＝（藥材濕重－藥材干重）／藥材干重×100%。

計算出藥材平均吸水率為189.9%，因而考慮在第1次提取時，比第2次多加入2倍水。

3.2.2 正交實驗設計 按處方1／3量取干燥的藥材，生地10 g，生地榆10 g，蛇舌草10 g，丹皮渣10 g，1／2丹參5 g，（共45 g）。共稱9份，按表1設計方案進行提取。選擇提取溶劑用量（A）、提取時間（B）和提取次數（C）3個因素進行考察，每個因素選擇3個水平。根據所制定的因素水平選用L9（34）正交表設計方案進行提取，將各組所得藥液合并，定容至100 m L，精密量取20 m L藥液置于已干燥至恒重的蒸發皿中，100℃水浴揮干，置于75℃真空干燥箱中4h，置干燥箱中冷卻30 min，稱重，按以下公式計算干膏得率。

干膏得率＝（W1×V總）／（W總V1）×100%

公式中：W1為干膏重量；W總為藥材重量；V1為精密吸取體積；V總為定容體積

根據水提工藝自身的特點和方中藥物主要水溶性有效成分，選擇干膏量和丹酚酸B作為指標進行綜合評價，將干膏量和丹酚酸B含量的權重系數分別設為0.4和0.6篩選最佳提取工藝。

3.2.3 丹酚酸B含量測定

3.2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱定丹酚酸B對照品適量，加入75%甲醇制成每1 mL含丹酚酸B 0.14 mg的溶液，即得。

3.2.3.2 樣品溶液的制備 于各樣品干膏中加入適量甲醇，超聲處理至樣品完全溶解，濾過，加入甲醇定容至100 mL容量瓶中，樣品測定前，用0.45μm微孔濾膜，取續濾液1 mL，加入4 mL甲醇，搖勻，即得。按照樣品制備方法制備空白樣品一份。

3.2.3.3 丹酚酸B含量測定方法建立 色譜柱：Diamonsil Cl8柱（5μm 250×4.6 mm）；流動相：甲酸－1%乙酸（40：60）；流速：1 m L／min；檢測波長：261 nm；柱溫：30℃；進樣量10μL。

在該色譜條件下，所用中藥中的其他成分對丹酚酸B的測定幾乎無干擾，分離良好，保留時間t＝16.9 min。分別精密吸取丹酚酸B對照品溶液1、2、5、10、15、20、25μg注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積積分值，以對照品進樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y＝476.47x－55.52（r＝0.99925），結果表明：丹酚酸 B在0.14～3.5μg范圍內具有良好的線性關系。精密度實驗，丹酚酸B的RSD為0.995%；（n＝6）；重復性實驗，丹酚酸B的RSD為1.45%；（n＝6）；穩定性實驗，丹酚酸B的的RSD為1.82%；（n＝7）。按丹酚酸B樣品制備方法，分別制備9組樣品與空白組樣品。分別精密量取10μL進樣測定含量。

3.2.4 數據分析結果 見表1～3。

表1 因素水平表

表2 正交實驗設計及實驗數據

綜合評分＝（干膏得率／最大干膏得率）×40＋（丹酚酸B含量／最大丹酚酸含量）×60

表3 方差分析表

由表2直觀分析，各因素對各因素影響的順序依次為C＞A＞B，最佳工藝為A3B1C3；方差分析結果，A、B、C對綜合評分結果影響均無顯著意義，綜合以方差分析結果，故最佳工藝為A3B1C3。

4 討論

根據實驗結果：在水提工藝考察中選取丹酚酸B含量和干膏出率作為正交實驗考察指標，提取工藝為A3B1C3，即提取3次，水量分別為14倍、12倍、12倍，時間分別為1 h、30 min、30 min，在此條件下進行驗證實驗，綜合評分較高，工藝穩定可靠，便于制成膠囊。

[1]趙辨.臨床皮膚病學[M].3版.南京：江蘇科學技術出版社，2001.4：759.

[2]魏娟.銀屑病的發病機制與臨床診斷進展[J].黑龍江醫學，2005，29（5）：344～346.

[3]王永炎，王沛.今日中醫外科[M].北京：人民衛生出版社，2000：376.