三種高脂乳劑誘導實驗性大鼠高脂血癥模型的比較

石鶴坤，張 宏，杜青云，陳錦珊

(1.解放軍第175醫院/廈門大學附屬東南醫院藥劑科，漳州 363000;2.遼寧省中醫藥研究院，沈陽 110034)

三種高脂乳劑誘導實驗性大鼠高脂血癥模型的比較

石鶴坤1，張 宏2，杜青云1，陳錦珊1

(1.解放軍第175醫院/廈門大學附屬東南醫院藥劑科，漳州 363000;2.遼寧省中醫藥研究院，沈陽 110034)

目的 探索理想的大鼠高脂血癥動物模型造模方法。方法 參考文獻改進3種大鼠高脂配方，并制成高脂乳劑給大鼠灌胃，14 d后眥內靜脈取血測定血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)的含量。結果 三種高脂配方均不同程度的使大鼠血清中脂代謝紊亂。結論 高脂配方3可在短時間內形成高脂血癥大鼠模型。

高脂血癥;大鼠;模型

高脂血癥是以血清中TC、TG、LDL增高及 HDL降低為主要表現的脂代謝紊亂，是多種疾病的始發因素，如動脈粥樣硬化、脂肪肝、冠心病和腦卒中等［1，2］。高血脂癥雖已進行了廣泛的研究，但至今尚未明顯突破，除了其他原因外，理想的動物模型制備也可能是制約其發展的一個重要因素。本文在參考相關文獻［3］基礎上，改進了 3種高脂乳配方，觀察不同高脂配方對實驗大鼠血液中 TC、TG、LDL、HDL的影響，為尋找和建立短時間內形成穩定的高脂血癥大鼠模型提供參考。

1 材料和方法

1.1 主要儀器與試劑

TD5A－WS低速臺式離心機，長沙湘儀離心機儀器有限公司;Rx daytona全自動生化分析儀，英國Randox Laboratories。

膽固醇，天津博迪化工股份有限公司，批號:20100624;蛋黃粉，北京奧博星生物技術有限責任公司，批號:20090815;吐溫－80，天津市博迪化工有限公司，批號:20090709;丙二醇，國藥化學試劑有限公司，批號:T20090724;膽酸鈉，北京奧博星生物技術有限責任公司，批號:20090415;丙硫氧嘧啶，上海朝暉藥業有限公司，批號:090603;乙醚，國藥化學試劑有限公司，批號:20090607;TC測定試劑盒，批號:10－0802P、TG 測定試劑盒，批號:10－0712P、LDL測定試劑盒，批號:10－0407P、HDL測定試劑盒，批號:10－0428P，均由北京九強生物技術有限公司提供。

1.2 實驗動物與飼料

SPF級Wistar雄性大鼠，由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供，許可證號［SCXK－(軍)2007－004］。受試動物在遼寧省中醫藥研究院動物室飼養，許可證號［SYXK(遼)2007－0010］，本動物觀察室溫度 20℃～23℃，相對濕度50%～60%;實驗在遼寧省中醫藥研究院中藥藥理實驗室進行，國家中醫藥管理局三級實驗室，證書編號［TCM－2009－056］，并按實驗動物使用的3R原則給予人道的關懷。鼠顆粒飼料，由北京科澳飼料有限公司提供，許可證［SCXK(京)2009－0012］。

1.3 高脂乳劑制備

將自制豬油在70℃水浴中融化，加入研細的膽固醇不斷攪拌至完全溶解，再加吐溫－80、丙二醇，豬膽酸鈉加入蒸餾水也放于70℃水浴中，攪拌均勻加入油相中，最后加丙硫氧嘧啶與蛋黃粉攪拌成穩定的脂肪乳劑，置于4℃冰箱中備用，灌胃前置40℃水浴加熱，高脂配方見表1。

表1 表1 高脂乳劑的配方組成Tab.1 Tab.1 The prescription of lipid emulsion

1.4 試驗方法

取180～200g健康 SPF級雄性 Wistar大鼠40只，適應性飼養5 d，禁食不禁水16 h，根據體重隨機分4組，即空白對照組、高脂模型1組、高脂模型2組、高脂模型3組，每組10只。每天各高脂模型組灌胃給予各高脂乳劑，空白對照組給等容積蒸餾水，容積為10mL/kg。連續給予高脂乳14 d，末次給高脂乳16 h，乙醚麻醉大鼠后，用玻璃毛細管進行眥內靜脈采血2mL，分離血清，嚴格按照試劑盒使用說明對 TC、TG、HDL、LDL進行測定，結果見表2。

表2 各組血清中的 TC、TG、HDL、LDL結果Tab.2 Groups of TC、TG、HDL、LDL in the serum

2 結果

由表2可見，用以上配方造大鼠高脂血癥模型，高脂乳配方1組的TC、TG、HDL及LDL的變化不明顯;高脂乳配方2、3組的 TC、LDL顯著高于空白對照組，差異具有統計學意義(P＜0.01，P＜0.05);高脂乳配方3的TG與空白對照組比較，差異具有統計學意義(P＜0.05)，而高脂乳配方1、2組的TG雖有升高趨勢，但差別無統計學意義，而各組HDL的變化不明顯。

3 討論

在實驗過程中，為確保高脂乳劑順利灌胃，制備過程中充分研勻、乳化是高脂乳劑制備的關鍵。特別是膽固醇一定要充分研細，并且先與豬油混合，充分溶解后再加入水相，以免造成灌胃針的堵塞。同時由于加入了一定量的蛋黃粉，增加了高脂乳的粘性，可使大鼠灌胃難度提高。而未加蛋黃粉的配方3高脂乳的粘性小，流動性好，明顯縮短了灌胃時間，且取樣量更加準確，有利于大鼠造模進行。

通過查閱文獻可知，由于大鼠的脂質代謝與人相似［4］，同時，報道大鼠高脂血癥模型的方法很多，但多數文獻所報道大鼠高脂血癥模型造模周期長。如王瓊［3］等人報道的脂肪乳(含20%植物油、1%膽固醇、2%脫氧膽酸鈉、0.2%丙基硫氧密啶、1%蔗糖、20%丙二醇、15%吐溫－80、30%水)造模時間一個月，與之相比，本試驗具有時間短，且 TG的升高明顯的優勢。通過改進高脂乳配方發現，將1%膽鹽和0.5%丙硫氧嘧啶聯合運用到高脂血癥模型配方中可促進高脂血癥模型的形成。從實驗結果可以看出，在未加入膽固醇的高脂乳配方1中，試圖造成內源性的高脂血癥模型，但未能成功，TC、TG與LDL雖有升高的趨勢，但差異無統計學意義;高脂乳配方2加入膽固醇(3%)就可使TC和LDL顯著升高;高脂乳配方3在豬油和膽固醇的基礎上加入膽鹽、丙基硫氧嘧啶等，可以使大鼠血清中的TC、LDL和TG指標顯著升高。

在選擇高脂血癥動物模型時，除了應關注TC、TG與LDL等指標外，還需要考慮以下幾個重要問題，首先是動物對膳食脂質的血脂變化模式是否接近于人類脂質代謝途徑、反映人類高脂血癥病理生理過程，其次是模型的可操作性。本實驗研究結果基本符合高脂血癥診斷標準，采用脂肪乳劑灌胃的方法，脂肪乳從消化道吸收，與人類因膳食結構改變而形成的高脂血癥相似，對于研究環境因素對高血脂癥形成的影響以及調血脂藥物的開發應用具有很高的價值。此外，由于根椐大鼠體重給予高脂乳劑，消除了自然喂養高脂飼料大鼠食量的不均、高脂飼料變質等問題，且造模時間短，是一種省時、省力且經濟穩定的高脂動物造模方法。

［1］Philippe O.The triglyceride－high－density lipoprotein axis:An importanttargetoftherapy［J］.American HeartJournal Volume，2004，148(2):211－221.

［2］Shal’nev VI.The effects of early application of simvastatin on C－reactive protein level，blood lipids，and the clinical course of acute coronary syndrome［J］.Klin Med(Mosk)，2007，85(11):46－50.

［3］王瓊，樂薇，覃鵬飛，等.三種高脂血癥實驗性大鼠模型的比較［J］.中國康復，2010，25(5):330－331.

［4］劉小如，鄧澤元，李靜，等.從人和動物血漿及紅細胞膜脂肪酸譜探討脂質代謝實驗模型動物選取［J］.中國實驗動物學報，2009，17(2):97－102.

Comparison of Experimental Hyperlipidemia Rat Model Induced by Three Kinds of Lipid Emulsion

SHI He－kun1，ZHANG Hong2，DU Qing－yun1，CHEN Jin－shan1
(1.Department of pharmacy，The 175th Hospital of PLA/Affiliated Southeast Hospital of Xiamen University，Zhangzhou 363000，China;2.Liaoning Institute of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110034，China)

Objective To explore the ideal experimental rats model for research on hyperlipidemia.Methods

Three prescriptions on experimental hyperlipidemia－rats were modified and emulsion was made by references.At 14 day blood samples were taken from ocular orbit and content of TC、TG、LDL、HDL in the serum were measured.Results Three prescriptions could lead to the disorder of lipid metabolism at different levels.Conclusion Hyperlipidemia－rats model can be formed in a short time by prescription 3.

Hyperlipidemia;Rat;Model

R332

A

1671－7856(2012)09－0055－03

10.3969.j.issn.1671.7856.2012.009.012

2012－07－02

石鶴坤(1980－)，男，藥師，碩士，研究方向:臨床藥學。E－mail:zzphshk@163.com。

陳錦珊，主管藥師。E－mail:cjs1223@sohu.com。