氣相色譜－質譜聯用定性檢測保健食品和中成藥中非法添加的鎮靜催眠類藥物＊

朱小紅，馬鵬飛，徐 翔

(陜西省食品藥品檢驗所，陜西 西安 710061)

隨著現代社會生活壓力的逐漸加大，越來越多的人面臨失眠的困擾，安神類保健食品及中成藥的市場需求日益增長。某些不法廠商為了增強改善睡眠功效、牟取暴利，在安神類保健食品及中成藥中非法添加鎮靜催眠藥，但長期服用含有鎮靜催眠類藥物的保健食品及中成藥，會嚴重影響身體健康[1]。鎮靜催眠類藥物最常用的檢測方法主要有薄層色譜法[2]、高效液相色譜(HPLC)法[3]、高效液相色譜 － 質譜 /質譜(HPLC －MS/MS)法[4]、氣相色譜氮磷檢測法[5]和氣相色譜－質譜(GC－MS)法[6]，但多見于某一類藥物在尿樣或血樣中的分析，未見有系統的研究方法，尤其是保健食品和中成藥中的檢測方法報道。GC－MS聯用技術以其特有的優勢在非法添加藥物檢測中發揮著重要的作用。它同時具有氣相色譜高分離性能及質譜準確鑒定化合物結構的特點，利用計算機譜庫檢索技術，可以不用標準品對照就可推測最大可能的藥物結構，此時如再用標準化合物進行比較，既快速又準確。為此，筆者建立了定性檢測保健食品及中成藥中非法添加的鎮靜催眠類藥物的GC－MS法，現報道如下。

1 儀器與試藥

島津GCMS－QP2010型氣相色譜－質譜聯用儀;NIST05，NIST05s，WILEY7標準質譜庫;DB－5 ms毛細管色譜柱;低溫冷凍高速離心機(Anke－GL－20G，上海安亭科學儀器廠);氮氣吹干裝置(MTN－1800W，Auto Science)。巴比妥(批號為 171220－200602)、異戊巴比妥(批號為 171221 －200402)、奧沙西泮(批號為 171229－200603)、勞拉西泮(批號為 171253 －200401)、地西泮(批號為 171225 －200903)、氯氮(批號為 171248－200301)、咪噠唑侖(批號為 171250－201002)、硝西泮(批號為 171217－200402)、氯硝西泮(批號為171227－200302)、艾司唑侖(批號為1219 －0102)、阿普唑侖 (批號為 1218－9702)、三唑侖 (批號為17230－200602)12種對照品，均購于中國藥品生物制品檢定所;司可巴比妥(批號為9201)、苯巴比妥(批號為171222－200504)2種對照品，購自國家麻醉實驗室;氯仿、丙酮、無水乙醇均為分析純;20批樣品均為市售品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:采用DB－5 ms彈性石英鍵合毛細管色譜柱(30 m×0.25 mm × 0.25 μm);程序升溫條件:初始溫度 120 ℃ ，保持1 min，以10℃ /min升溫至230℃，以15℃ /min升溫至270℃，保持 20 min;分流比 5 ∶1;載氣(He，純度大于 99.99%)流速1.7 mL/min;進樣口溫度280℃;接口溫度300℃;采用恒壓模式，柱壓135 kPa;進樣量1 μL。質譜條件:電子轟擊電離源(EI，70 ev)溫度為250℃;Scan模式采集，掃描的質量范圍40～350 amu，溶劑延遲時間2.5 min。在此條件下，14種對照品溶液的色譜圖見圖1，質譜圖見圖2。

圖1 序號1－14的對照品全掃描色譜圖

2.2 溶液配制

對照品溶液:各取14種對照品適量，根據表1分別選擇無水乙醇、氯仿作為溶劑，制成每1 mL中含1 mg的對照品貯備液，臨用時加氯仿稀釋至50 μg/mL。供試品溶液:取樣品(膠囊取2粒內容物，片劑取4片，顆粒劑取1袋，均研細;軟膠囊取2粒內容物)，分別加無水乙醇、氯仿各10 mL超聲處理20 min，3 000 r/min離心5 min，取5 mL上清液，置另一干燥試管中，氮氣流吹干，再各自用1 mL無水乙醇、氯仿溶解，經0.45 μm針頭濾器過濾后，待進樣分析;取樣品[口服液取10 mL，糖漿取5 mL，酒劑取10 mL(蒸去乙醇)]，加水10 mL，加氯仿振搖提取3次，每次10 mL，合并氯仿提取液，離心5 min，取上清液經氮氣流吹干，再各自用1 mL無水乙醇、氯仿溶解，經0.45 μm針頭濾器過濾后，待進樣分析。

2.3 方法學考察

方法靈敏度:取2.2項下各對照品溶液適量，加氯仿分別稀釋制成 20.0，10.0，5.0，2.0，1.0，0.5 μg/mL 的檢測限試驗溶液，按2.1項下條件進樣分析。結果各對照品定量限均在0.5～5 ng之間(見表1，S/N=10∶1)，可滿足定性篩查的需要。

專屬性:選用固體樣品(膠囊劑、片劑、顆粒劑、軟膠囊)和口服液等中成藥或保健食品制劑各1批，并另取以上樣品各1份，分別添加14種對照品混合溶液(各0.1 g/L)1 mL，按擬訂的方法處理和測定，比較色譜及質譜圖。結果只在個別樣品色譜圖中出現與部分對照品保留時間接近的色譜峰，經與對照品質譜碎片離子比對和譜庫檢索后，即排除其干擾;擬檢的14種鎮靜催眠類藥物能與普通制劑中共存物質區分。

適用性試驗:試驗中另選擇了HP－5 ms毛細管色譜柱以及不同批號的DB－5 ms和Rtx－5 ms色譜柱，并對程序升溫方式和離子源溫度等進行了改變，各測試結果能夠通過設計的系統適用性試驗，說明該檢測方法對可變試驗因素的抗干擾能力較強。

方法重復性:取各對照品溶液，依法進樣6次。結果保留時間的 RSD為0.25%，質譜碎片離子一致。

2.4 樣品檢測

本研究共收集安神類保健食品及中成藥20批(樣品來源于企業或由患者提供和從市場購買)。采用Scan模式得到全質譜圖后，進行質譜定性，初步確定可疑樣品，進而根據各目標物的保留時間和表1中的特征離子，采用SIM模式在不同時間段選擇不同的特征離子進行掃描、定量。

表1 標準譜庫信息

3 討論

文中所選的14種鎮靜催眠類藥物極性較弱，熔點低，加熱易揮發，一般選用弱極性或中等極性毛細管色譜柱，程序升溫分離。從GC－MS總離子流圖可以看出，對照品混合溶液中的14種化合物具有良好的分離度，滿足色譜分離要求。14種化合物的質譜采集后首先進行保留時間比對，再與標準質譜庫NIST05，NIST05s，WILEY7數據檢索結果相對照，確認結構，初步判斷出所含化學藥物種類，必要時利用對照品確證。

巴比妥類藥物為丙二酰脲的衍生物，其結構通式中R1和R2多為烷基取代基，取代基不同，藥物的藥理性質有所不同。根據作用時間分為3類:長效(6～8 h)，如巴比妥、苯巴比妥;中效(3～6 h)，如戊巴比妥;短效(1～3 h)，如司可巴比妥。根據4種巴比妥類藥物化合物的質譜圖，其質譜裂解行為推斷如下:首先，化合物在電子的轟擊下失去1個電子，產生分子離子峰(M+)，由于分子具有酰脲類結構，使化合物更易發生裂解而脫掉相應的碎片。如巴比妥和異戊巴比妥由于含有碳鏈，容易發生碳－碳鍵的α裂解和γ－H重排后，再發生β斷裂脫去中性分子，產生2個豐度較高的離子，其中1個為基峰(m/z 156)，然后發生開環裂解，但作用較弱，產生較弱的離子峰(m/z 141)。苯巴比妥由于具有苯環和酰脲環，2個六元環具有共軛作用，從而更容易在碳鏈處發生碳－碳鍵的α裂解和γ－H重排后，再發生β斷裂脫去中性分子，產生較強的離子峰(m/z 204)。

根據各化合物總離子流圖上的色譜保留時間及提取相應的質譜圖，對非法添加的化合物進行鑒定，同時將其質譜圖存入自建的數據庫，為以后非法添加化合物的檢測和鑒定打下了基礎。

本試驗嘗試建立安神類保健食品及中成藥中添加鎮靜催眠類化學藥品的檢測方法，該方法簡單、靈敏度高、穩定性好，完全可以滿足對非法添加化學藥品的檢測要求，為建立此類標準和監控方法提供了依據。

[1]張 莉，董建杰，郭芳華.合理使用鎮靜催眠藥以防產生藥物依賴性[J].河北醫學，2006，12(11):12.

[2]肖麗和，劉吉金，關瀟瀅.鎮靜安神類中成藥及保健食品中非法添加化學成分的快速篩查方法研究[J].中國當代醫藥，2009，16(14):15.

[3]熊建華，毛偉芹，李金龍.常用精神藥物的H PLC的定性定量分析[J].中國臨床藥學雜志，2007，16(2):118.

[4]羅疆南，譚 力，曹 玲.LC－MS/MS法同時測定中藥制劑中非法添加的15種抗癲癇藥及鎮靜催眠類藥物[J].中國生化藥物雜志，2010，31(3):162.

[5]姜兆林，譚家鎰，姚麗娟.尿和血漿中苯并二氮雜類藥物及其代謝產物的氣相色譜氮磷檢測分析法[J].分析科學學報，2005，21(6):639.

[6]Staerk U，Külpmann WR.High－temperature solid－phase microextraction procedure for the detection of drugs by gas chromatography－mass spectrometry[J].Journal of chromatorgraphy B:biomedical science and applications，2000，(745):399 － 411.