高效液相色譜法測定丹參益坤口服液中芍藥苷含量

張 穎，王偉麗，朱明偉

(河南省商丘市食品藥品檢驗所，河南 商丘 476000)

丹參益坤口服液為醫院中藥制劑[1]，由赤芍、當歸、香附、丹參、乳香、沒藥等16味藥組方，具有消炎止痛、活血化瘀的功效。經過多年的臨床應用證明，其治療慢性盆腔炎、輸卵管阻塞等癥功效顯著。現行質量標準中只有薄層色譜鑒別，未收載含量測定項目，不能有效地控制藥品質量。赤芍為方中主要藥味之一，芍藥苷是其有效成分之一。為進一步提高標準，保證制劑的穩定可靠，筆者采用高效液相色譜法對制劑中的芍藥苷進行了含量測定，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1260型高效液相色譜儀;AUW220D型電子天平。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110736－201035);丹參益坤口服液(商丘市柘城縣人民醫院提供，批號為110222，110320，110416);乙腈為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱:Agilent－C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－0.1%磷酸溶液(14∶86);檢測波長:230 nm;柱溫:25℃;流速:1.0 mL/min;進樣量:10 μL。

2.2 溶液制備[3]

精密稱取芍藥苷對照品15.41 mg，置50 mL量瓶中，加稀乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取供試品混勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加稀乙醇35 mL，振搖提取，加稀乙醇至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。除赤芍外，其他各藥按供試品處方量投料按丹參益坤口服液的制備工藝制成陰性對照品，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗:取上述陰性對照品溶液、對照品溶液、供試品溶液適量，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1)。結果芍藥苷保留時間為6.88 min，理論板數5 000，陰性對照在芍藥苷峰處未見明顯峰，表明對含量測定無干擾。

線性關系考察:分別吸取對照品溶液(308.2 μg/mL)1.0，5.0，7.5，10.0，15.0，20.0 μL 各進樣兩次，記錄峰面積積分值，以芍藥苷峰面積積分值對進樣量進行回歸，得回歸方程為 Y=94.803 X+2.865，r=0.999 9(n=6)。結果表明，芍藥苷進樣量在3.082 0～61.640 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復進樣6次，按上述色譜條件測定峰面積。結果的 RSD=0.43%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:精密稱取同一批(批號為110320)樣品6份，依法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣，測定。結果平均含量為2.237 mg/mL，RSD=1.26%(n=6)，表明方法重復性良好。

穩定性試驗:取供試品(批號為 110320)溶液，分別于 0，1，2，4，8，12 h 時各精密吸取 10 μL，按上述色譜條件測定峰面積積分值。結果RSD=1.02%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內穩定。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品(批號為 110320)，精密量取1 mL，共6份，置100 mL量瓶中，分別精密加入同一質量濃度(0.113 g/L)的芍藥苷對照品溶液，依法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣10μL，測定，計算回收率。結果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 樣品含量測定

按上述含量測定方法測定樣品中芍藥苷含量。結果批號為110222，110320，110416 的樣品中芍藥苷含量為 2.257 1，2.236 6，2.218 7 g/L，平均 2.24 g/L。

3 討論

在供試品溶液制備的過程中，也曾考慮到其他樣品對赤芍提取以及含量測定的影響，試驗設計了甲醇和稀乙醇提取、振搖、超聲和回流[3－5]的試驗。結果發現用純甲醇提取效果不理想，樣品呈混懸狀，吸附嚴重，提取效果較差，芍藥苷僅為1.045 g/L;以稀乙醇回流和超聲提取對提取結果影響不大，與振搖提取結果接近。因為本制劑為口服液，提取比較容易，綜合考慮以上因素，本試驗采用稀乙醇振搖提取的方法。

表1 加樣回收試驗結果(n=6)

丹參益坤口服液是醫院制劑，臨床療效顯著，但質量標準一直僅有薄層鑒別，沒有定量檢測指標，當歸是丹參益坤口服液的主藥之一，本試驗建立了丹參益坤口服液中芍藥苷含量的高效液相色譜法，對3批樣品進行測定。試驗表明，該方法穩定可靠，操作簡便，專屬性較強，可以作為丹參益坤口服液制劑的質量控制的參考。

[1]豫藥制字Z04140014，河南省醫療機構制劑標準[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:96.

[3]凌 明，馬安宇.HPLC測定胃腸合劑中芍藥苷和黃芩苷的含量[J].中成藥，2008，30(9):1 311 －1 113.

[4]陳曉燕，李順祥.HPLC法測定阿歸養血糖漿中芍藥苷含量[J].中醫藥導報，2009，15(3):81－83.

[5]張建業，馮向東.HPLC法同時測定八珍益母丸中芍藥苷和甘草酸銨的含量[J].中國藥師，2011，14(7):992.