結直腸腺癌中Tiam1、血管內皮生長因子－C和血管內皮生長因子受體－3的表達及其臨床意義

呂 錚 張志勇 閻繼東 張 林 (唐山工人醫院胸外科，河北 唐山 063000)

T淋巴瘤侵襲轉移誘導基因1(Tiam1)可特異地激活與Rac相關的通路，改變腫瘤細胞形態和功能，對腫瘤的分化、侵襲及轉移有重要作用。近來研究認為Tiam l與腫瘤脈管生成有關〔1，2〕。血管內皮生長因子-C(VEGF-C)通過血管內皮生長因子受體-3(VEGFR-3)有效調節腫瘤中淋巴管的生成。但是，Tiam1與VEGF-C的作用尚未見報道。本研究應用免疫組化技術檢測結直腸腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表達，分析其在不同臨床特征中的表達差別，探討Tiam1對淋巴管生成的作用，以期為研究腫瘤的淋巴管生成提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 臨床材料 收集2005年1月至2006年12月唐山工人醫院病理科確診的結直腸腺癌標本作為觀察組，均符合WHO關于結直腸腺癌的診斷標準。患者術前均未進行任何放、化療，共87例;其中男47例，女40例，年齡35～69歲，中位年齡56歲。選取距癌超過10 cm的正常腸黏膜組織作為對照組，共80例;其中男50例，女30例;年齡36～68歲，中位年齡55歲。兩組相關臨床資料比較無明顯差別，具有可比性。

1.2 免疫組化檢測Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表達Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白表達檢測試劑均購自北京中杉金橋生物技術有限責任公司，均進行預實驗。免疫組化采用二步法完成。

1.3 Tiam1、VEGF-C和 VEGFR-3染色結果的判讀 Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白陽性染色部位為細胞質中，切片中顯示為均勻的棕黃色細顆粒，選取有代表性的10個400倍顯微鏡視野，計算每個視野中陽性細胞的百分率后取平均值。陽性細胞≥25%為陽性，＜25%為陰性。

1.4 統計學處理 采用SAS6.12進行分析，組間比較采用χ2檢驗，并進行線性相關分析和生存分析。

2 結果

2.1 Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3在觀察組與對照組中的表達比較 觀察組中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表達的陽性率明顯高于對照組(均P＜0.001)。見表1。

表1 Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3在觀察組與對照組中的表達比較〔n(%)〕

2.2 Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3在觀察組不同臨床病理特征中的表達差別 觀察組中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3陽性率均與腫瘤淋巴結轉移、淋巴結轉移個數、Dukes分期及Ki-67的表達密切相關。見表2。

2.3 觀察組中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表達的相關性線性相關分析結果顯示，Tiam1和 VEGF-C(r=0.44，P=0.023 1)、VEGF-C 和 VEGFR-3(r=0.49，P=0.003 5)、Tiam1和VEGFR-3(r=0.40，P=0.036 9)的表達均呈正相關。

2.4 觀察組中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表達的生存分析本組患者隨訪時間為6～60個月，平均34.5個月。Tiam1(χ2=32.172 4，P ＜0.001)、VEGF-C(χ2=10.906 0，P=0.001)和 VEGFR-3(χ2=4.344 5，P=0.037 1)的陽性率均與預后相關，即Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3高表達患者的預后差。見圖1。

表2 Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3在觀察組不同臨床病理特征中的表達〔n(%)〕

圖1 Tiam1、VEGF-G、VEGFR-3蛋白表達與結直腸癌預后的關系

3 討論

結直腸腺癌臨床常見，作為實體腫瘤，浸潤、生長及轉移是其重要的生物學行為，臨床發現影響結直腸腺癌預后最關鍵的是淋巴道轉移，至今人們尚未確定淋巴道轉移的機制〔3〕。近來人們發現了以VEGF-C為代表的淋巴生成促進因子。VEGF-C基因定位于染色體4q34，其長度為40 kb，含有7個外顯子，其中外顯子3和4編碼VEGF的同源區，外顯子5和7編碼富含半胱氨酸的C6XC10XCRC型的基序，外顯子6編碼絲蛋白典型的C10XCXC基序。VEGF-C基因表達VEGF-C蛋白，其具有419個氨基酸殘基，在酶的作用下，位于227位的精氨酸和228位的絲氨酸之間發生水解，形成31 000/29 000的異二聚體而發揮生物學作用。VEGF-C在作用過程中，主要通過其受體VEGFR-3協同發揮淋巴管新生的作用，但是有關此通路的影響因素研究較少。Tiam1是新發現的重要的腫瘤轉移促進基因，定位于人染色體21q22.11，表達產物為Tiam1蛋白，在體內外均可以特異性激活Rho GTPase家族中的Rac1，參與腫瘤的侵襲和轉移〔4，5〕。Xu 等〔6，7〕研究認為 Tiam1 還能調節相關蛋白的細胞膜定位，誘導膜皺褶形成，促進腫瘤的運動功能;同時，Tiam1的生物學功能多樣，對腫瘤細胞的增殖、分化及運動也有重要作用〔8，9〕。

本實驗提示Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3在腫瘤進展中重要的促進作用，即三者可以促進腫斬發生，并具有與癌基因類似的作用。觀察組中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3的陽性率均與腫瘤淋巴結轉移、淋巴結轉移個數、Dukes分期、Ki-67的表達密切相關，提示Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3參與腫瘤的淋巴道轉移及細胞增殖等進展。由于淋巴道轉移、Dukes分期及Ki-67的表達均與腫瘤的預后相關，因此Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3的聯合檢測對判斷預后有重要的價值。而且本實驗的生存分析直接證實了Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3對預后的價值，提示結直腸腺癌標本Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3陽性表達時，患者的預后差。由于VEGF-C和VEGFR-3是淋巴管生成的經典通路，而Tiam1與VEGF-C和VEGFR-3均具有相關性，提示Tiam1對VEGF-C和VEGFR-3介導的淋巴管生成具有重要的促進作用，即Tiam1具有淋巴管生成的作用。Tiam1的調節過程可能通過催化Rac1的活性而誘導 VEGF-C的表達而實現〔10〕。Tiam1可能作為上游基因，激活Rac1后再經JNK、P38MAPK等信號分子轉導，調節細胞骨架重組，影響細胞形體極化，促進細胞運動〔11〕;而在此過程中可以間接調節VEGF-C的表達，促進腫瘤中淋巴管新生。結直腸癌組織中過多的淋巴管生成后，腫瘤細胞進入淋巴道更順暢，為淋巴道轉移提供了最便捷的路徑。

綜上所述，結直腸腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3具有協同作用，三者對腫瘤的進展具有促進作用，術后聯合檢測Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白高表達時，提示預后不良。

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3 張志勇，姜 麗，高艷敏，等.大腸癌中VEGF-D、VEGFR-3表達及淋巴管生成關系的研究〔J〕.中國老年學雜志，2006;26(7):867-9.

4 Luo F，Poulogiannis G，Ye H，et al.Synergism between K-rasVal12 and mutant Apc accelerates murine large intestinal tumourigenesis〔J〕.Oncol Rep，2011;26(1):125-33.

5 Hsueh C，Lin JD，Yang CF，et al.Prognostic significance of Tiam1 expression in papillary thyroid carcinoma〔J〕.Virchows Arch，2011;459(6):587-93.

6 Xu K，Rajagopal S，Klebba I，et al.The role of fibroblast Tiam1 in tumor cell invasion and metastasis〔J〕.Oncogene，2010;29(50):6533-42.

7 Liu L，Wang S，Zhang Q，et al.Identification of potential genes/proteins regulated by Tiam1 in colorectal cancer by microarray analysis and proteome analysis〔J〕.Cell Biol Int，2008;32(10):1215-22.

8 Chen JS，Su IJ，Leu YW，et al.Expression of T-cell lymphoma invasion and metastasis 2(TIAM2)promotes proliferation and invasion of liver cancer〔J〕.Int J Cancer，2012;130(6):1302-13.

9 Yang W，Lv S，Liu X，et al.Up-regulation of Tiam1 and Rac1 correlates with poor prognosis in hepatocellular carcinoma〔J〕.Jpn J Clin Oncol，2010;40(11):1053-9.

10 Zhong D，Li Y，Peng Q，et al.Expression of Tiam1 and VEGF-C correlates with lymphangiogenesis in human colorectal carcinoma〔J〕.Cancer Biol Ther，2009;8(8):689-95.

11 朱金明，余佩武，趙永亮.Tiam1和Rac1表達與胃癌病理生物學行為的關系〔J〕.中國普通外科雜志，2005;14(3):168-72.