生物黏附單向釋藥愈潰膜對金黃倉鼠的口腔黏膜刺激性實驗研究*

王小曉，平佳宜，吳彩麗，段曉穎

(河南中醫學院第一附屬醫院，河南鄭州450000)

復發性口腔潰瘍是臨床常見病、多發病，是口腔科疑難雜癥之一。目前局部治療仍是其主要的治療方法。愈潰膜是以生物黏附單向釋藥系統為載體制成的現代中藥復方制劑，由具生物黏附性的載藥層和不具生物黏附性的背襯層復合而成，屬于生物黏附單向釋藥膜劑。該膜劑可延長藥物對潰瘍面的覆蓋和黏附時間，具有阻斷外界因素對潰瘍面的刺激、保護創面的作用［1］。為考察該制劑的毒性反應，本研究觀察了其對金黃倉鼠口腔黏膜的刺激性作用。

1 材料與方法

1.1 動 物

SPF級金黃倉鼠10只，雌雄各半，出生60～70 d，購自武漢生物制品研究所，動物質量許可證號:SCXK(鄂)2008－0003。

1.2 藥品與儀器

愈潰膜(每片1 cm×1 cm，含生藥144 mg/片)及不含藥空白膜，由河南中醫學院第一附屬醫院中藥制劑實驗室制備。TB－718E型生物組織自動包埋機，湖北泰維醫療科技有限責任公司產品;RM2245型旋轉切片機，德國LEICA公司產品;日本Olympus DP71顯微圖像采集系統。

1.3 動物分組與給藥

［2－3］。取10只SPF級金黃倉鼠，雌雄各半，翻轉左、右側中央頰囊并用生理鹽水沖洗，分別設為愈潰膜組和空白膜對照組，將愈潰膜和不含藥空白膜分別貼敷于左、右側頰囊黏膜極低處，保持貼敷至少4 h。

1.4 檢測指標

參考文獻［2－3］。觀察給藥后金黃倉鼠的一般情況、局部黏膜肉眼表現及組織病理學顯微表現，并根據評分標準進行評分。

1.4.1 一般情況與局部黏膜表現

觀測給藥后24 h時動物全身狀況及用藥局部口腔黏膜有無色澤異常、充血、腫脹、糜爛和滲出等異常現象，并按以下標準評分:無紅斑(0分)，輕度充血、腫脹(1分)，明顯充血、腫脹(2分)，糜爛、滲出、潰瘍形成 (3分)。

1.4.2 組織病理學觀察

給藥后24 h，處死金黃倉鼠5只，觀察頰黏膜有無充血、腫脹、糜爛及潰瘍反應;同時取與試樣接觸部位的頰黏膜及其周圍組織，用40 g/L甲醛固定液固定，常規石蠟包埋、切片，HE染色。其余存留的5只金黃倉鼠，觀察至第7天再處死觀察，方法同上。顯微觀察并記錄給藥處頰囊上皮組織是否有潰瘍、過度角化、上皮異常增生、角化不良、空泡形成、色素沉積、基底細胞變化、化生、增生或其他異常變化，結締組織是否有充血、血管擴張、炎癥細胞浸潤、基質疤痕形成、出血、異物反應或其他異常變化。按以下標準評分。①上皮變化:正常計0分，細胞增生計1分，過度角化或角化不良計2分，局部糜爛計3分，廣泛糜爛計4分。②白細胞浸潤程度:未見白細胞計0分，白細胞計數＜25個計1分，白細胞計數26～50個計2分，白細胞計數51～100個計3分，白細胞計數＞100個計4分。③血管充血程度:未見血管充血計0分，極少血管充血計1分，輕度血管充血計2分，中度血管充血計3分，重度血管充血且伴有血管破裂計4分。④水腫程度:未見水腫計0分，極少見水腫計1分，輕度水腫計2分，中度水腫計3分，重度水腫計4分。評分之后綜合各項計分，進行病理反應分級，病理反應分級標準如下:0～4分(無黏膜刺激性)，5～8分(輕度黏膜刺激性)，9～11分(中度黏膜刺激性)，12～16(重度黏膜刺激性)。

2 結果

2.1 各組動物一般狀況與局部黏膜表現

給藥24 h后，受試動物全身狀況未見異常，局部口腔黏膜未見充血、腫脹、糜爛、滲出、潰瘍形成等異常現象;其余存留動物，連續觀察7 d，亦未見上述異常表現。按照評分標準計分，愈潰膜組和空白膜對照組評分均計為0。

2.2 各組動物頰黏膜組織病理學觀察

與空白膜對照組對比，愈潰膜組上皮細胞排列整齊，形態未見異常、無過度角化/角化不良，基底細胞未見增生或其他異常變化，未見潰瘍形成;結締組織未見炎癥細胞浸潤、血管擴張、充血、出血、異物反應或其他異常變化。見圖1。按照評分標準計分，愈潰膜實驗組和空白膜對照組評分均計為0。

3 討論

金黃倉鼠具有一個特殊的結構——頰囊。將受試物置于頰囊中，能夠保證受試物崩解或溶化前與口腔黏膜一直處于充分接觸狀態，這與受試物的臨床應用情況基本一致，可最大程度模擬臨床上的給藥方式。此外，將藥物放入金黃倉鼠一側頰囊中，還可以以另一側頰囊作為對照來判斷試驗結果［4］。愈潰膜處方源于民間驗方，由胡黃連、青黛、冰片等組成，臨床使用效果顯著。傳統的使用方法是將其制為散劑，將藥物直接噴灑于患處。但由于口腔特殊的生理環境，藥物不能長時間在局部保持有效治療濃度，從而影響了療效。為提高藥效，方便臨床使用，本課題組采用具有生物黏附性的載藥膜和不具生物黏附性的空白膜復合而成的單向釋藥膜系統作為載體，將其制成現代中藥復方制劑。為考察該制劑的毒性反應，本研究結果顯示:與對照組相比，愈潰膜組在給藥24 h及1周時，局部口腔黏膜未見充血、腫脹、糜爛、滲出、潰瘍形成等異常現象，組織切片顯微觀察用藥組上皮細胞排列整齊、形態未見異常、無過度角化/角化不良、基底細胞未見增生或其他異常變化、未見潰瘍形成，結締組織未見炎癥細胞浸潤、血管擴張、充血、出血、異物反應或其他異常變化。根據評分標準計分，愈潰膜組和空白膜對照組評分均計為0。可見該制劑無黏膜刺激性，未顯示毒性反應，提示該膜劑的研發具有良好的臨床應用前景。

參考文獻:

［1］李丁，王健，侯惠民.口腔黏膜給藥系統研究進展［J］.中國醫藥工業雜志，2009，40(4):303－307.

［2］楊柳，張義生，周才新，等.辛及涂劑對口腔黏膜刺激性實驗研究［J］.湖北中醫雜志，2011，33(10):19－20.

［3］李良，鄭國安，郭晟，等.西地碘含片口腔黏膜刺激性試驗［J］.內蒙古中醫藥，2009，28(23):62 －63.

［4］國家食品藥品監督管理局藥品審評中心.藥品技術評價文集:第二輯［M］.北京:中國醫藥科技出版社，2007:36.