唐山地區(qū)奶牛隱性乳房炎病原體調(diào)查與防治

王 晨

（河北唐山豐潤(rùn)區(qū)石各莊鎮(zhèn)成人學(xué)校，唐山 064005）

乳房炎是由各種病因引起的乳房的炎癥，其主要特點(diǎn)是乳汁發(fā)生理化性質(zhì)及細(xì)菌學(xué)變化，乳腺組織發(fā)生病理學(xué)變化。奶牛產(chǎn)奶量下降，大量的乳房炎陽(yáng)性奶的廢棄，奶牛過(guò)早淘汰，給奶牛飼養(yǎng)業(yè)造成了嚴(yán)重?fù)p失。隱性乳房炎由于其無(wú)明顯的臨床癥狀，隱蔽性強(qiáng)，引起奶產(chǎn)量降低，奶品質(zhì)下降，是造成經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的類型。目前，仍是危害世界乳業(yè)發(fā)展的重要因素之一[1]。

全球約有2.2億頭奶牛。其中，1/3的奶牛患有各種類型的乳腺炎[2]。國(guó)內(nèi)關(guān)于乳腺炎發(fā)病率的報(bào)道在20%～70%之間，國(guó)外奶牛乳腺炎的發(fā)病率約為25%～60%，奶牛乳腺炎已成為影響奶牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的最嚴(yán)重的疾病之一[3-5]。

乳房炎造成的經(jīng)濟(jì)損失，國(guó)外傳統(tǒng)的估計(jì)是根據(jù)奶產(chǎn)量的損失、替代品費(fèi)用的增加、丟棄奶、藥費(fèi)支出、獸醫(yī)費(fèi)用和勞動(dòng)力費(fèi)用等項(xiàng)的統(tǒng)計(jì)。在世界范圍內(nèi)，每年因乳腺炎造成的損失高達(dá)350億美元，僅美國(guó)的損失就達(dá)20億美元[6-7]。奶牛乳腺炎不僅危害奶牛健康，降低產(chǎn)奶量，影響奶的品質(zhì)，而且降低奶牛繁殖性能。目前，抗生素仍然是奶牛場(chǎng)治療乳腺炎的常規(guī)藥物，但由于長(zhǎng)期大量使用抗生素，不僅使耐藥菌株增加，而且應(yīng)用抗生素出現(xiàn)的“含抗牛奶”已成為嚴(yán)重危害人們食用安全的污染食品[8]。

乳房炎依其表現(xiàn)形式可分為臨床型乳房炎和亞臨床型乳房炎[9]。亞臨床型乳房炎又稱隱性乳房炎，是指乳房和乳汁均無(wú)肉眼可見(jiàn)的變化，但乳汁導(dǎo)電率、體細(xì)胞、pH值等理化性質(zhì)發(fā)生變化，必須用特殊的理化方法才能檢出的乳房炎[10]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，臨床型乳房炎占奶牛總發(fā)病的21%～23%，隱性型乳房炎在泌乳牛中約占50%左右，占乳房炎的絕大多數(shù)，是臨床乳房炎的3～4倍[11]，其發(fā)生與病原微生物的感染有密切關(guān)系。臨床型乳房炎能被肉眼覺(jué)察，可引起人們的重視；而隱性型則不易被肉眼覺(jué)察，容易被忽視[12]。隱性型如未及時(shí)診斷治療，就會(huì)轉(zhuǎn)化為臨床型乳房炎，表現(xiàn)產(chǎn)乳減少或停乳，乳房硬結(jié)、化膿與壞死，最后被迫淘汰，給奶農(nóng)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失[13]。因此，對(duì)患隱性乳房炎的奶牛進(jìn)行早期診斷，對(duì)提高奶牛群體品質(zhì)、增加養(yǎng)殖效益有著極其重要的意義[14]。

奶牛乳腺炎主要是由多種特定的病原微引起。目前，已發(fā)現(xiàn)約有150多種，常見(jiàn)的有23種[15]。依據(jù)其來(lái)源和傳播方式可分為接觸傳染性病原體和環(huán)境性病原體2類。前者主要包括無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、支原體等，通過(guò)擠奶工或擠奶乳區(qū)和牛群中傳播。環(huán)境性病原體主要包括大腸桿菌、乳房鏈球菌、肺炎克雷伯菌、綠膿桿菌、變形肝菌、凝固酶陰性葡萄球菌、環(huán)境鏈球菌、真菌或酵母菌、化膿性放線菌及牛棒狀菌（等[16]。上述病原體中，以金黃色葡萄球、鏈球菌和大腸桿菌為主，約占整個(gè)奶牛乳腺炎病例90%以上[17]。隱性乳房炎的發(fā)生是多因素所致，除加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、搞好擠奶衛(wèi)生外，還要定期進(jìn)行隱性乳腺炎的監(jiān)測(cè)，在干奶期乳房?jī)?nèi)注入抗生素由于耐藥性很難起到作用。

中草藥作為天然藥物，不僅不存在藥物殘留帶來(lái)的公共衛(wèi)生問(wèn)題[18，19]，而且許多中草藥還是很好的免疫調(diào)節(jié)劑。因此，用中草藥治療奶牛乳腺炎的研究成為近年來(lái)的熱門課題。目前，已經(jīng)有多種產(chǎn)品出現(xiàn)，一些中草藥復(fù)方制劑和中草藥提取物制劑，已經(jīng)在奶牛乳腺炎的防治方面發(fā)揮了重要作用[20-22]。

本試驗(yàn)調(diào)查了唐山地區(qū)奶牛隱性乳房炎主要病原菌的流行狀況，分離致病菌，通過(guò)體外藥敏試驗(yàn)，選用有效藥物，防治奶牛隱性乳房炎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

唐山市規(guī)模化荷斯坦奶牛養(yǎng)殖小區(qū)。

1.1.2 診斷試劑盒

SMT診斷液由內(nèi)蒙蒙牛集團(tuán)提供。

1.1.3 藥敏片

藥敏片購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.1.4 培養(yǎng)基

分離培養(yǎng)基：綿羊鮮血瓊脂培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基。

生化鑒定培養(yǎng)基及試劑：三糖鐵、過(guò)氧化氫、血瓊脂、兔血漿凝固酶、葡萄糖、乳糖、蔗糖、菊糖、棉子糖、麥芽糖、山梨醇、甘露醇、七葉苷、水楊苷等。

1.1.5 試驗(yàn)藥物

鹽酸克林霉素注射液：河北遠(yuǎn)征動(dòng)物藥業(yè)有限公司（10ml/瓶），批號(hào)為20080906；

復(fù)方銀黃注射液：陜西圣奧動(dòng)物藥業(yè)有限公司（10ml/瓶），批號(hào)為20081003；

魚(yú)腥草注射液：山東華爾康獸藥有限公司（10ml/瓶），批號(hào)為20080911.

1.2 方法

1.2.1 調(diào)查對(duì)象及內(nèi)容

調(diào)查唐山市荷斯坦奶牛養(yǎng)殖小區(qū)內(nèi)的體溫正常，食欲正常，飲欲正常，乳房無(wú)明顯的紅、腫、熱、痛，奶無(wú)肉眼可見(jiàn)的變化，但在擠奶后出現(xiàn)奶質(zhì)理化性變化的牛。

1.2.2 現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)

先用濕熱毛巾將奶牛的乳房擦洗干凈，再用含消毒藥溫水做好乳房的消毒工作，消毒完成后用消毒紙巾擦干，操作者的手也要清洗和消毒。棄去各個(gè)乳區(qū)的頭2把乳，再將要檢測(cè)的牛4個(gè)乳區(qū)的乳汁分別擠入診斷托盤(pán)的4個(gè)小室內(nèi)，各2ml，再加入2ml的SMT診斷液，呈同心圓搖動(dòng)診斷盤(pán)，反應(yīng)大約10s后根據(jù)凝集反應(yīng)程度判定并予詳細(xì)記錄。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。

1.2.3 奶樣采集

取上述經(jīng)檢驗(yàn)為陽(yáng)性，強(qiáng)陽(yáng)性的牛乳（不同乳區(qū)）5 ml左右于滅菌的試管中，立即蓋好膠塞，并對(duì)試管逐一標(biāo)號(hào)后，立即送微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定。

1.2.4 病原菌分離與鑒定

表1 SMT法的判定標(biāo)準(zhǔn)

表2 葡萄球菌的生化特性

1.2.4 .1 病原菌分離

將5 ml奶樣放入離心管中，2 000～3 000 r/min，離心10 min，棄去管中的上層液體，留取底部沉淀物，無(wú)菌操作吸取沉淀物0.1 ml。經(jīng)無(wú)菌操作分別接種于綿羊鮮血瓊脂培養(yǎng)基和普通瓊脂，37℃培養(yǎng)24 h。觀察菌落形態(tài)和溶血情況。進(jìn)一步觀察其在鑒別培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況，做好記錄，并將可疑菌落作純化培養(yǎng)。對(duì)純培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢并作詳細(xì)記錄。

1.2.4 .2 生化試驗(yàn)

將分離到的主要細(xì)菌增菌24 h后，分別進(jìn)行不同的生化試驗(yàn)，并進(jìn)行鑒定。

1.2.5 藥敏實(shí)驗(yàn)

1.2.5 .1 抗生素

采用紙片擴(kuò)散法[26]，即用吸管滴加純培養(yǎng)菌液1滴（約0.02 ml）于鮮血瓊脂平板上，用L棒將菌液均勻涂布，加蓋后放置10 min左右，待平板面稍干，用鑷子將藥敏紙片平放在瓊脂平板上，并輕壓使其緊貼平板表面，藥敏紙片一旦接觸平板即不再移動(dòng)。采用直徑為90 mm的平皿，可貼紙片7張，2紙片中心距離不少于24 mm，紙片與平皿邊緣不少于15 mm。貼好紙片的平板置37℃培養(yǎng)24 h。

參試藥敏試驗(yàn)藥物：青霉素G、恩諾沙星、慶大霉素、鹽酸克林霉素、利福平、四環(huán)素、新霉素、鏈霉素、紅霉素、氨芐青霉素、林可霉素、諾氟沙星、復(fù)方新諾明。

1.2.5 .2 中草藥

采用牛津杯中加中藥的體外抑菌實(shí)驗(yàn)[27]。無(wú)菌條件下，用12cm培養(yǎng)皿，將其平均分成9個(gè)區(qū)域，分別在固定位置寫(xiě)上編號(hào)，待普通瓊脂在恒溫水浴鍋中冷卻到45℃時(shí)倒平板，待其凝固后分別在每個(gè)培養(yǎng)基內(nèi)加入0.4 ml菌液，用無(wú)菌玻璃棒涂勻，然后用無(wú)菌鑷子將牛津杯按編號(hào)順序放入培養(yǎng)基中，分別加入100 ul的中草藥藥液于牛津杯內(nèi)，36℃培養(yǎng)24 h，觀察其結(jié)果，并測(cè)量抑菌直徑。

供試中藥：復(fù)方銀黃注射液，魚(yú)腥草注射液。

2 結(jié)果

2.1 病原菌分離與鑒定

2.1.1 培養(yǎng)及染色特性

通過(guò)觀察培養(yǎng)特性和革蘭氏染色鏡檢，可知引起奶牛隱性乳房炎的細(xì)菌主要有2大類：葡萄球菌和鏈球菌。

A類：呈葡萄串狀，G+，在普通瓊脂上生長(zhǎng)良好，形成金黃色或白色的圓形、光滑的中等大小菌落。金黃色的菌落呈明顯的β溶血，判定為葡萄球菌；B類：多為圓形或卵圓形，呈鏈狀，G+，在血瓊脂上呈半透明、隆起、粘稠的小菌落。其中，有的有明顯的β溶血，判定為鏈球菌。

2.1.2 菌株培養(yǎng)與生化試驗(yàn)

經(jīng)生化鑒定結(jié)果判定，2大類細(xì)菌是金黃色葡萄球菌和無(wú)乳鏈球菌，反應(yīng)情況詳見(jiàn)表2、表3。

2.2 藥敏實(shí)驗(yàn)

2.2.1 抗生素

選用青霉素、慶大霉素、恩諾沙星等13種常用藥物對(duì)分離菌株作藥敏試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 分離細(xì)菌藥敏試驗(yàn)抑菌圈直徑結(jié)果（mm）

由表4可知，在13種抗菌藥物中新霉素、紅霉素、鹽酸克林霉素、林可霉素、氨芐青霉素、利福平6種抗菌素的抑菌效果較好，而諾氟沙星、鏈霉素、復(fù)方新諾明等藥物的抑菌效果較差。

2.2.2 中草藥

選取一些中草藥做了藥敏試驗(yàn)，結(jié)果詳見(jiàn)表5。

表5 中藥藥敏試驗(yàn)抑菌圈直徑結(jié)果（mm）

由表可知，復(fù)方銀黃注射液的抑菌效果較好，而魚(yú)腥草注射液抑菌效果較差。

2.3 治療效果

根據(jù)藥敏試驗(yàn)的結(jié)果選用鹽酸克林霉素（試驗(yàn)組1）、復(fù)方銀黃注射液（試驗(yàn)組2）、魚(yú)腥草注射液（試驗(yàn)組3）對(duì)奶牛小區(qū)的30頭陽(yáng)性奶牛治療1個(gè)療程（5 d），治療效果詳見(jiàn)表6。每天均用SMT診斷液測(cè)定其乳樣，以得出奶牛的治愈數(shù)。

注：同一行1個(gè)*標(biāo)表示差異顯著，P<0.05；2個(gè)**標(biāo)表示差異極顯著，P<0.01。經(jīng)T檢驗(yàn)試驗(yàn)1組與試驗(yàn)3組差異極顯著，與試驗(yàn)2組差異顯著，所以試驗(yàn)1組為最佳治療藥物。

3 分析與討論

3.1 病原體

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)奶樣進(jìn)行細(xì)菌分離和生化試驗(yàn)鑒定，得出金黃色葡萄球菌和無(wú)乳鏈球菌是引起唐山地區(qū)奶牛隱性乳房炎的主要致病菌。

3.2 敏感藥物選擇

3.2.1 抗生素 抗生素藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，新霉素、紅霉素、鹽酸克林霉素、林可霉素、氨芐青霉素、利福平6種抗生素對(duì)本地區(qū)奶牛隱性乳房炎的主要病原菌的抑菌效果較好，而臨床上常用的諾氟沙星、鏈霉素、復(fù)方新諾明等藥物對(duì)本地區(qū)奶牛隱性乳房炎的主要病原菌的抑菌效果較差。其可能原因：（1）抗生素在乳腺感染部位是否達(dá)到有效的藥物濃度；（2）細(xì)菌的耐藥性問(wèn)題；（3）部分細(xì)菌對(duì)抗生素不敏感；（4）某些抗生素對(duì)吞噬細(xì)胞的功能有損害作用；（5）抗生素的殘留。

3.2.2 中草藥 試驗(yàn)結(jié)果表明，黃芩、金銀花、黃芪、蒲公英等復(fù)方銀黃注射液對(duì)引起奶牛隱性乳房炎的2種主要病原菌有較強(qiáng)的抑制作用；魚(yú)腥草注射液對(duì)2種主要病原菌抑制作用較差。

3.3 治療效果分析

通過(guò)對(duì)30例隱性乳房炎奶牛的治療試驗(yàn)結(jié)果可以看出，鹽酸克林霉素對(duì)隱性型乳房炎具有良好的療效，由于其抗病機(jī)理不同于其他藥物，而且效果優(yōu)于其他同類藥物，現(xiàn)已成為治療本病的主要藥物之一。

復(fù)方銀黃注射液治療奶牛隱性乳房炎效果雖不如鹽酸克林霉素，但休藥期更短能顯著減少棄奶損失。目前，也有大量關(guān)于中草藥治療奶牛隱性乳房炎并取得較好效果的報(bào)道。不過(guò)中草藥的治療速度較慢，如果細(xì)菌毒力較強(qiáng)，用中藥治療往往得不到預(yù)期的效果。鹽酸克林霉素治療奶牛隱性乳房炎藥物殘留相對(duì)較少，停藥時(shí)間較短，是治療頑固性隱性乳房炎的首選藥物。在臨床上如果兩者協(xié)同用藥，可能對(duì)提高治愈率和減少棄奶的損失有更好的效果，但需要進(jìn)一步的試驗(yàn)證實(shí)。

3.4 預(yù)防

由于乳房的解剖、生理和奶的生產(chǎn)等特點(diǎn)，隨時(shí)隨地都受到病原微生物的威脅。所以，必須制定比較合理的防御措施，長(zhǎng)期堅(jiān)持，才能使乳房炎的發(fā)病率控制在最低限度。

保持牛舍通風(fēng)，牛床設(shè)計(jì)合理，及時(shí)清掃牛糞，定期消毒，為牛群提供干燥、清潔、舒適的生活環(huán)境，防止牛群受到微生物感染。Oliver和Gillespie[29]報(bào)道，在奶牛泌乳前期用含酚化合物給乳頭消毒與在泌乳后期消毒相比，奶牛患臨床乳房炎和乳腺內(nèi)感染的機(jī)率降低。

采用分段擠乳，即先擠健康牛，后擠患病牛，并將患病牛的牛奶進(jìn)行隔離分裝。不應(yīng)用同一條毛巾清潔所有奶牛乳房，最好做到一頭牛一條毛巾，防止交叉感染。各種擠奶設(shè)備要保持干凈并定期消毒，定期更換奶杯內(nèi)套。每次擠奶前后要清洗和消毒擠奶設(shè)備。

泌乳期藥浴，配合干奶期用藥是更為有效的奶牛乳房炎防治措施。在每次擠奶前后浸浴乳頭，浸液的量不要多，但要能浸沒(méi)整個(gè)乳頭。泌乳末期，每頭母牛的所有乳區(qū)都要應(yīng)用抗生素。藥液注入前，要清潔乳頭，乳頭末端不能有感染。

保護(hù)牛群的“封閉”狀態(tài)，避免因牛的引進(jìn)或出入帶來(lái)新的感染源。不到樹(shù)林中放牧，控制奶牛相互頂架，杜絕各種致病因素。發(fā)現(xiàn)病牛，及時(shí)隔離治療，加強(qiáng)乳房按摩及藥物治療，淘汰慢性乳房炎病牛。

日糧能量、蛋白質(zhì)、鈣、磷、硒、碘、維生素A、維生素D、維生素E等養(yǎng)分不足或日糧養(yǎng)分不平衡等因素都與乳房炎的發(fā)生有關(guān)。給予奶牛適量的維生素A和β-胡蘿卜素，能夠增強(qiáng)肌體免疫機(jī)能，降低奶牛乳房炎的發(fā)病率。

中藥不僅可以治愈各種疾病，而且能夠特異性或非特異性地增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體的免疫力，降低奶牛隱性乳房炎的發(fā)病率。張敬禮等自擬中草藥配方治療隱性乳房炎，以15 d為1個(gè)療程，可使一般的隱性乳房炎治愈率達(dá)83.3%，且奶產(chǎn)量有所增加。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)調(diào)查了唐山周邊地區(qū)奶牛隱性乳房炎主要病原菌為無(wú)乳鏈球菌和金黃色葡萄球菌，通過(guò)體外藥敏試驗(yàn)和臨床治療得出了治療隱性乳房炎的西藥特效藥物即鹽酸克林霉素和中藥特效藥即復(fù)方銀黃注射液。

[1]馬慶輝，余州，李峰，等.奶牛隱性乳房炎的研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，29（1）：91-95

[2]賈玉萍，萬(wàn)仁忠，寧召峰，等.奶牛乳房炎的病原菌分離鑒定與藥物敏感性試驗(yàn)[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2004，31（10）：46-48

[3]蔣春茂，周新民，周廣生，等.奶牛乳房炎研究進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2004，31（5）：36-38

[4]郭小雅，束婧婷，楊章平，等.奶牛隱性乳房炎發(fā)生規(guī)律的調(diào)查分析[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2005，41（3）：23-25

[5]葉秀娟，杜愛(ài)芳，胡松華.金華地區(qū)奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2004，（8）：41-42

[6]儲(chǔ)明星.奶牛乳房炎的危害及其發(fā)生規(guī)律與防治[J].中國(guó)奶牛，1999，（4）：55-56

[7]溫建新.奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌血清型的分離鑒定[J].中國(guó)奶牛，2000，（2）：39-40

[8]母安雄，胡松華.奶牛乳房炎抗生素防治失敗原因探討[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2002，38（2）：18-20

[9]陳德，魏太亮，石清來(lái).奶牛隱性乳房炎病原菌的分離與耐藥性分析[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2006，23（2）：36

[10]陳家璞.乳牛疾病學(xué)[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1992

[11]李勇，葛秀國(guó)，竇忠英.奶牛隱性乳房炎研究進(jìn)展.黃牛雜志，2003，29（3）：38-41

[12]王 芳，胡松華.體細(xì)胞含量與牛奶質(zhì)量的關(guān)系[J].中國(guó)奶牛，2005，（4）：51-52

[13]孫福先，王恩滿，趙德龍，等.奶牛隱性乳房炎綜合防治技術(shù)的試驗(yàn)[J].中國(guó)奶牛，1996，（1）∶36-37

[14]韓雪原，吳春芳，孫宏偉，等.奶牛隱性乳房炎的預(yù)防措施[J].草食動(dòng)物，2008，（5）：45-46

[15]林鋒強(qiáng)，潘抗君，胡松華.奶牛乳房炎疫苗研究進(jìn)展[J].中國(guó)奶牛，2002，（1）：40-42

[16]儲(chǔ)明星，石萬(wàn)海，鄺霞，等.淺談奶牛乳房炎[J].中國(guó)奶牛，2001，（3）：39-40

[17]火焱，劉佳森，劉曾力.奶牛乳房炎病因分析及防治[J].內(nèi)蒙古科技與經(jīng)濟(jì)，2004，（7）：61-62

[18]林鋒強(qiáng)，胡松華，胡奇林，等.奶牛金黃色葡萄球菌乳房炎菌苗佐劑研究現(xiàn)狀[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2004，25（6）：49-51

[19]翟少欽，付文貴.奶牛乳房炎的防治研究進(jìn)展與前景[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2004，（6）：30-33

[20]易湘蓉，李娜，劉毅，等.中草藥防治奶牛乳腺炎的研究綜述[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2005，（4）：2-4

[21]富艷玲，武瑞.中藥防治奶牛乳房炎的研究進(jìn)展[J].獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2005，（6）：24-25

[22]陳坤永，翁良樹(shù)，吳慕貞，等.深圳地區(qū)奶牛臨床型乳房炎病原菌分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J].中國(guó)獸醫(yī)科技，1999，29（9）：36-38