河南地區食管鱗癌與HPV16、18關系的研究

劉新勝 郭文濤 趙國強

(1.鄭州大學基礎醫學院 鄭州 450001; 2.漯河醫學高等?？凭€學校 河南漯河 462002)

人乳頭瘤病毒(HPV)目前已分離鑒定出118型。2003年的一項流行病學分類研究定義了15種高危型HPV(如HPV16、HPVl8)和12種低危型(如HPV6、HPV11)。大量研究已經明確它是引起宮頸乳頭瘤樣病變、宮頸癌的一個獨立危險因素。1982年Syrjanen[1]首次提出HPV感染與食管癌可能具有密切關系,之后多有報道,但因研究結果不盡一致,如崔金環等[2]在140例食管癌組織中未檢出任何基因型別的HPV,丁廣成等發現HPV16在食管鱗癌中有較高檢出率(84%);董忠生等在30例食管癌新鮮組織和對應石蠟固定組織HPV檢出率為84%和53%,曹邦偉等使用Meta分析1982年至2009年關于HPV感染與食管癌關聯的病例對照研究發現,HPV高危型別(16與18型)的感染與食管癌的發生依然顯示出明顯的易感關聯。河南地區為食管癌的高發區,本研究應用導流雜交技術,對57例河南地區食管鱗癌組織及癌旁組織標本進行了高危型HPV檢測,進一步了解HPV感染與食管癌的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

57例食管癌手術切除標本取自漯河醫學高等?？茖W校第三附屬醫院、鄭州大學醫學院第一附屬醫院、第二附屬醫院(2009年6月至2010年7月),其中男35例,女22例;年齡42～79歲,平均(58.41±7.63)歲。病理組織學證實57例食管癌均為鱗狀細胞癌,其中Ⅰ級15例,Ⅱ級20例,Ⅲ級22例;合并有淋巴結轉移27例,手術清掃的食管周圍淋巴結中發現癌轉移;無淋巴結轉移30例,食管周圍淋巴結中未發現癌轉移。浸潤深度分2組,淺層組9例,腫瘤浸潤深度在黏膜層、黏膜下層或淺肌層;深層組48例,腫瘤浸潤深度在深肌層或纖維膜層。所有病例術前均無化療、放療及免疫治療史。所有標本均在手術切除后2h內收集。

1.2 方法

快速導流雜交法檢測HPV基因型試劑盒為中國凱普生物化學有限公司產品,采用快速導流雜交法檢測16、18兩種HPV基因型,將上述樣本按常規方法DNA提取,PCR擴增,快速導流雜交,顯色后,對樣本進行結果判斷,具體操作按照試劑盒說明書進行。

1.3 數據處理

采用配對χ2檢驗(chi-square test),檢驗水準取α=0.05,數據處理采用SPSS 13.0統計軟件處理。

2 結果

2.1 高危型HPV(HPV16、18)在食管磷癌組織中擴增結果

高危型HPV(HPV16、18)在食管鱗癌組織中的陽性率為56.14%(32/57)。男女患者高危型HPV陽性率為57.14%(20/35)和54.55%(12/22),差異無統計學意義,χ2＝0.04,P>0.05;淋巴結轉移組感染率77.78%(21/27)明顯高于無淋巴結轉移組36.67%(11/30),差異顯著,χ2=9.75,P<0.01(表1);總體上,HPV16陽性率(36.84%,21/57)明顯高于HPV18(19.30%,11/57),差異有統計學意義,χ2＝4.34,P<0.05;同樣,淋巴結轉移組,HPV16陽性率(55.56%,15/27)明顯高于HPV18(22.22%,6/27),差異有統計學意義,χ2＝6.31,P<0.05;相反,無淋巴結轉移組,HPV16陽性率(20.00%,6/30)和HPV18陽性率(16.67%,5/30)之間差異無統計學意義,χ2＝0.11,P>0.05;HPV在I、II、III級分化程度中的陽性率為60%(9/15)、50%(10/20)、59.09%(13/22),差異無統計學意義,χ2＝0.47,P>0.05(表2);同樣,HPV表達與患者年齡、性別及浸潤程度均無相關性,P均>0.05。

表1 HPV及16、18型感染率分布

表2 食管鱗癌分化程度與HPV及16、18型的感染率

2.1 高危型HPV(HPV16、18)在癌旁組織中擴增結果

57例癌旁組織中,高危型HPV的陽性率為24.56%(14/57)。男女患者高危型HPV陽性率為22.86%(8/35)和27.27%(6/22),差異無統計學意義,χ2＝0.14,P>0.05;HPV16和HPV18陽性率為57.14%(8/57)和54.55%(6/57),差異無統計學意義,χ2＝0.33,P>0.05;同樣,HPV表達與患者性別、年齡及浸潤程度均無相關性,P均>0.05。

2.2 高危型HPV(HPV16、18)在食管磷癌和癌旁組織中擴增結果比較

高危型HPV在食管鱗癌組織中的檢出率為56.14%(32/57),明顯高于癌旁組織檢出率24.56%(14/57),差異有統計學意義,χ2＝11.81,P<0.05。

3 討論

食管鱗癌組織HPV感染率在不同地區或者同一地區研究結果差別較大(0%～84%),綜合已有文獻分析導致上述結果的原因除取材方法以及取材地區、種族的差異外,研究方法不一也是一個重要影響因素。主要的HPV檢測方法有傳統雜交法、型特異PCR、通用引物PCR、實時熒光PCR、雜交捕獲法、導流雜交基因微陣列分型檢測等。這些方法存在著或操作繁瑣,或費時耗力,或只能進行分組鑒定而不能進行基因分型等缺點。本研究采用導流雜交方法檢測HPV分型,具有其它檢測方法不具備的優點:(1)快速,即在PCR擴增后產物只需30min就可得到雜交結果;(2)可分型,可一次性檢測21種HPV亞型感染,既可以顯示具體某種亞型HPV感染,也可以顯示混合型多重感染;(3)有質控對照,可在同一張低密度基因芯片薄膜上同時完成擴增對照和雜交對照,對整個實驗過程實行全面質量控制。因而本實驗結果更加真實可信,有現實意義。

利用導流雜交方法對河南地區食管癌及癌旁組織樣本進行HPV16、18檢測,結果顯示食管鱗癌高危型HPV陽性率明顯高于癌旁組織(56.14%vs24.56%),提示高危型HPV16、18與該地區食管鱗癌的發生存在明顯關聯。與有文獻所報道的安陽地區34例HPV18陽性的食管鱗癌組織檢出24例HPV16陽性不同,本次研究的標本中均未檢測出HPV16、18雙重感染。但由于本次研究存在樣本量較小,取材和檢測方法單一等不足,HPV16、18雙重感染與食管鱗癌的關系尚有待進一步討論。

研究表明HPV16、18感染與食管鱗癌組織分化程度、腫瘤浸潤程度、患者性別及年齡無明顯相關性,提示HPV感染可能僅作為食管鱗癌發生的危險因素。

有文獻[3]報道HPV16表達與淋巴結轉移無相關性,與之不同,本次研究中(表1)HPV16、18在淋巴結轉移組感染率明顯高于無淋巴結轉移組(77.78%vs36.67%),提示樣本中HPV16、18可能參與了食管鱗癌的進化步驟和淋巴結轉移的過程,HPV與癌細胞的轉移關系有待進一步的研究。

與Li et al和劉紅彥等報道相似,本研究發現河南地區食管鱗癌中HPV16總體表達率明顯高于HPV18(36.84%vs19.30%),同樣的情況也出現在淋巴結轉移組(55.56%vs22.22%),提示HPV16與食管鱗癌發生與發展的關聯程度高于HPV18。

食管鱗癌的發生受到多重因素影響,如遺傳、飲食習慣、地理位置等,HPV作為環境中的生物致癌因素越來越受到人們的關注,本研究檢測了河南食管鱗癌及癌旁組織高危型HPV的感染情況,這為進一步開展預防HPV感染,減低食管癌的發病率有著重要的意義,同時在治療過程中檢測HPV病毒的感染,進行干預治療,對降低食管癌復發有著積極的臨床意義。

[1]崔金環,楊光,蘇錫康,等.宮頸癌和食管癌組織中人乳頭狀瘤病毒基因型的檢測[J].腫瘤學雜志,2009,15(3):182～184.

[2]曹邦偉,于晶琳,荷歡.中國人群中HPV感染與食管癌發生關聯的Meta分析[J].首都醫科大學學報,2010,31(2):258～263.

[3]許春雷,千新來,周小山,等.HPV16型-E6、E7在食管鱗癌組織與非癌組織中的表達[J].癌癥,2004,23(2):165～168.