自家苗治療連城白鴨漿膜炎的效果研究

羅小華

（福建省連城縣畜牧獸醫水產局，福建 連成 366200）

本文用當地鴨場分離的鴨疫里默氏菌株制備自家苗，對防治鴨傳染性漿膜炎的效果進行了探討和研究，旨在為實際生產作指導。

1 細菌分離與鑒定

1.1 分離培養 選擇剛死亡且具有典型鴨傳染性漿膜炎病變的病死鴨，無菌采集肝組織，將采集的病料剁碎，除去結締組織和筋膜后稱重，加適量生理鹽水，用消毒好的組織勻漿機絞3～5min至勻漿狀。由于搗碎機高速運轉，溫度上升很快，尤其是夏天溫度高時，容器中的病料很容易變質而破壞病原的免疫原性，故夏天制苗時，在搗碎機中加入病料和生理鹽水時要用冷卻水冷卻。對于新采取的病料需反復凍融三次，將解凍的病料與生理鹽水按1kg：3500～4000mL的比例進行稀釋，再用雙層無菌醫用紗布過濾，然后將濾液先后過一次八層和十二層的紗布。再取樣分別接種于普通培養基、馬丁肉湯、麥康凱瓊脂平板、巧克力瓊脂平板，分別作純培養。

1.2 形態觀察 將分離的10株細菌在馬丁肉湯中（37℃）作、24h純培養，再分別用革蘭氏染色和瑞氏染色進行鑒定。

1.3 生化試驗 分離菌經純化后，用其48h馬丁肉湯培養物進行生化反應測定，置37℃燭缸中觀察15 d。

1.4 血清學鑒定 將分離細菌接種在葡萄糖淀粉瓊脂平皿上培養24h，然后將每個平皿上的細菌懸浮于8.5%氯化鈉（質量百分比）、0.02mol/L磷酸鹽、0.3%福爾馬林（體積百分比）溶液中（pH=7.0，1mL），再在100℃水浴鍋上加熱1 h，然后1 500 r/min離心30min，取上清液，與1型鴨疫里默氏桿菌標準陽性血清進行平板凝集試驗和瓊脂擴散試驗。

1.5 藥敏試驗 在巧克力瓊脂平板上采用藥敏片擴散法進行。在含5%～10%CO2的環境中37℃下培養24 h觀察，然后對照標準判斷結果。

1.6 動物發病實驗 取10只健康雛鴨作動物實驗，皮下注射培養菌液后觀察雛鴨有無發病癥狀。

2 分離鑒定結果

2.1 分離培養 將病料接種于巧克力瓊脂平板上，經37℃厭氧培養48h后，長出了灰白色、半透明、微凸起的圓形菌落；在馬丁肉湯中呈現均勻混濁狀態；置于燭缸中的麥康凱瓊脂平板上未見有細菌生長；在37℃恒溫培養的麥康凱平板上培養3d后，亦無細菌生長；普通瓊脂平板上同樣無細菌生長。

2.2 形態觀察 分離的10株細菌經革蘭氏染色鏡檢，均為革蘭氏陰性小桿菌；經瑞氏染色法染色鏡檢，可見7株細菌呈兩極濃染，符合鴨疫里默氏桿菌的染色特性。

2.3 生化試驗 糖發酵試驗：對甘露醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、乳糖均不發酵；不還原硝酸鹽，MR試驗、VP試驗均為陰性；過氧化氫酶試驗呈陽性。以上反應均符合鴨疫里默氏桿菌的生化特性。

2.4 血清學鑒定 凝集試驗和瓊脂擴散試驗證實，與1型鴨疫里默氏桿菌標準陽性血清發生陽性反應，說明7株瑞氏染色陽性細菌株均為鴨疫里默氏桿菌血清1型。

2.5 藥敏試驗 分離菌對氟甲砜霉素、甲哌利福霉素、氨芐青霉素、先鋒霉素、林可霉素高度敏感；對青霉素、呋喃唑酮和氯霉素中高度敏感；對慶大霉素、新霉素、鏈霉素、卡那霉素、紅霉素不敏感。

2.6 動物發病實驗 試驗鴨接種病料后48h，雛鴨相繼發病，眼、鼻流出漿液性分泌物。糞便稀薄呈綠色，嗜眠、縮頸或嘴抵地面，腿軟弱，不愿走動；瀕死前出現神經癥狀，如痙攣、搖頭、點頭，背脖和兩腿伸張呈角弓反張。剖檢病死鴨，最明顯的病變是心包腔內及肝表面有一層纖維素性滲出物；心外膜、氣囊壁混濁增厚，腹腔積水，有的脾臟腫大，表面有灰白色斑點。取典型病死鴨病料用瑞氏法染色，發現菌體兩端濃染，呈兩極染色特性。

通過以上分離鑒定，確定從可疑鴨疫里默氏桿菌病鴨中分離的菌株為鴨疫里默氏桿菌。

3 自家苗的制備與檢測

3.1 增菌培養 將純培養物接種于馬丁肉湯培養液，37℃振搖培養24h，取少量菌液作細菌計數，使濃度達1010個/mL。

3.2 甲醛滅活 加入體積百分比為0.4%的甲醛溶液，置37℃下滅活48h，滅活期間，每4～6h搖動一次，搖動時間約為半小時。滅活完畢后，按1500 IU/mL比例加入雙抗（青霉素和鏈霉素），還要加一定量的黃芪多糖，以增加抗體的生成。搖勻后進行無菌分裝，置4℃下保存待用。

3.3 無菌檢驗 取滅活后的菌液接種于普通營養瓊脂平板上，37℃培養24h，如果無任何細菌生長說明甲醛滅活完全，無菌檢驗合格；反之則自家苗制備失敗。

3.4 安全性檢驗 取10只健康雛鴨，頸部皮下注射1mL菌液，連續觀察14 d，如果雛鴨無外觀癥狀，也無病理變化，則表示自家苗安全。

3.5 效力檢驗 取20只健康雛鴨，其中只對10只雛鴨注射疫苗：將疫苗回溫且徹底搖勻后于頸部皮下或肌肉注射（0.2mL/只），另外10只作為對照組。注射前要對注射針具徹底消毒，注射時要勤換針頭。注射完疫苗后，有的鴨群略顯安靜，采食飲水略有下降，這均屬正常的機體反應，一般1～2d即可完全恢復。14d后對兩組雛鴨分別注射未滅活的鴨疫里默氏桿菌，然后進行細致觀察。分開飼養，以免交叉感染。共分4個批次進行效力檢驗試驗，每次均分為試驗組和對照組兩組，免疫程序和劑量均相同。

4 自家苗的制備與檢測結果

4.1 純培養物作增菌培養 在馬丁肉湯培養液中經37℃振搖培養24 h后，取少量菌液作細菌計數，結果細菌濃度達了3.2×1010個/mL。

4.2 無菌檢驗 經普通營養瓊脂平板37℃培養24 h后，無任何細菌生長，說明甲醛滅活完全，無菌檢驗合格。

4.3 安全性檢驗 連續觀察14d后，雛鴨無外觀癥狀，剖檢也未發現病理變化，說明粗制疫苗菌液是安全的。

4.4 效力檢驗 經觀察，對照組雛鴨過夜后即有發病者出現，病初表現為眼流漿液性或黏性分泌物，常使眼周圍羽毛粘連或脫落；鼻孔流出漿液或黏液性分泌物，有時分泌物干涸，堵塞鼻孔；有輕度咳嗽和打噴嚏；糞便稀薄呈綠色或黃綠色；嗜睡，縮頸或嘴抵地面，腿軟，不愿走動、步態蹣跚；瀕死前出現神經系統癥狀，如痙攣、背脖和兩腿伸直呈角弓反張狀，尾部搖擺等，不久抽搐而死，病程一般2～3d。經剖檢證實為注射的鴨疫里默氏桿菌所引起，而試驗組（接種疫苗組）連續觀察14 d后，無病例出現。說明所制自家疫苗對鴨疫里默氏桿菌病有保護作用。

經過對4批共計80只雛鴨的防治試驗表明：使用以上方法制備的自家苗對鴨傳染性漿膜炎有明顯的防治效果。在鴨群發病時，使用疫苗1周后發病明顯減少，10～15 d病癥狀完全消除，未見復發情況。同時，用自家苗對未發病鴨群免疫接種也能起到良好的預防效果，未見該病發生。

5 結論

筆者用自制的疫苗對發生鴨漿膜炎的鴨群進行緊急注射能很快控制疫情；對未發病的鴨群提前注射又 起到了有效預防控制的作用。因此該自家苗是防治鴨傳染性漿膜炎的一種有效疫苗。

雖然自家苗具有免疫防治作用，但由于它屬于生物性產品，所以要絕對注意其生物安全性。首先，目前沒有什么辦法去測定自定苗中具體的病原含量，這是一種運用實踐來檢驗效果與質量的治療方法。其次，自家苗本身就是滅活苗，無論細菌還是病毒等大多已經被殺死，而且采集的有可能是幾種病混合感染的病料，所以病料成分及結構更加復雜，產生抗原的蛋白質種類也多。最后，雖然自家苗可以用，但是前提是發病比較厲害的情況下采用，不要動輒就用自家苗，那樣風險會很大。

[1]張國紅，王澤民.鴨傳染性漿膜炎的診斷及其控制[J].當代畜牧，2000，（4）：15-16.

[2]趙文翰.鴨疫巴氏桿菌病[J].吉林畜牧獸醫，2005，（8）：46-47.

[3]王艷明.鴨傳染性漿膜炎的診斷與防治[J].畜牧與飼料科學，2009.

[4]陳寬維，江宵兵，章雙杰，等.連城白鴨資源特性[J].保護及開發方向，2003，25（9）.

[5]徐友文，張福潮.我國養鴨業現狀和實施鴨無公害養殖的宏觀措施[J].湖南畜牧獸醫，2007.

[6]蔡秀磊，韋 強，崔言順，等.浙江省22株鴨疫里默氏桿菌的血清型鑒定及耐藥性研究 [J].浙江農業學報，2007，19（1）：46-49.

[7]汪銘書，程安春，陳孝躍，等.血清8型鴨疫里默氏桿菌在我國的發現及其病原特性研究[J].中國預防獸醫學報，2003，25（1）：47-52.

[8]康昭風，肖海紅，劉林秀，等.鴨疫巴氏桿菌防制研究[J].江西農業學報，2004，16（3）：31-34.

[9]程安春，汪銘書.鴨疫巴氏桿菌的分離和鑒定[J].四川畜牧獸醫，1996，（2）：7-9.