反應曲線在速率法檢測AST底物耗盡現象中的應用

任崢 鄒翠美 夏春燕

酶活性檢測是臨床生化常規一個重要組成部分，全自動生化分析儀由于其高精密度和光柵的應用，為用速率法準確檢測各種酶的活性提供了很好的保證。當標本中酶含量過高，此時就容易出現在檢測過程中酶的底物短時間內消耗殆盡，即從開始讀點之前至反應終點的吸光度反應曲線的一段或整段為一平坦曲線，使得反應吸光度變化近乎為零，其斜率不符合實際情況，所得反應結果也與真實值不符，這種現象稱為底物耗盡［1］。此種情況下，檢驗者若只從檢驗結果分析往往會發出錯誤的報告，從而影響臨床診斷和治療。本文通過對16例AST高值標本進行原倍和稀釋5倍、10倍進行測定，再通過對反應曲線的觀察分析，發現和解決底物耗盡現象問題。

資料與方法

1.檢測對象:16例AST高值標本。

2.檢測方法:將16例AST高值標本分為對照組和問題組，分別檢測其原倍及去離子水稀釋5倍、10倍標本的AST值，結果乘以稀釋倍數。所有標本均測三次，取平均值。

3.統計學方法:將對照組及問題組各高值標本5倍稀釋結果與未稀釋結果，10倍稀釋結果分別與未稀釋結果和5倍稀釋結果進行多樣本比較的秩和檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

對照組及問題組原倍和去離子水稀釋5倍及10倍檢測結果見表1，對照組1－8號標本原倍分別與5倍、10倍稀釋結果比較，5倍稀釋與10倍稀釋結果比較，差異均無統計學意義(P＞0.05);問題組1－8號標本原倍分別與5倍、10倍稀釋結果進行比較，5倍稀釋與10倍稀釋結果比較，差異均有統計學意義(P＜0.01)，問題組樣本兩兩比較結果見表2。

表1 AST高值標本原倍及稀釋檢測結果(kruskal－wallis H檢驗)(單位U/L)

表2 問題組樣本兩兩比較秩和檢驗(Nemenyi檢驗)結果

討 論

在酶促反應過程中，不是任何時期的反應速率都和酶濃度成正比。當酶促反應剛一開始，底物處于過量狀態，酶與底物開始結合，生成復合物(ES)，底物濃度開始下降，此時產物尚未形成。當復合物(ES)分解生成產物(P)，酶促反應速度急聚上升，經過很短的作用時間后，產物的生成量或底物的減少量與反應時間成線性關系，反應速度保持恒定不變，這一時期稱為零級反應期。由于只有在零級反應期，單位時間內吸光度的變化值才與酶的活性成正比，當樣本中AST的活性超過檢測線性范圍時，底物在短時間內被耗盡，零級反應期很短，速率法檢測所設定的吸光度讀點完全不在零級反應期，以致零級反應期內檢測不到吸光度的變化而出現低值甚至負值結果。

通過觀察1－16號標本反應曲線發現，對照組1－8號標本不存在底物耗盡現象，其反應曲線在加入試劑2后，所有反應曲線為一下降直線，說明這一期間反應速度保持恒定，吸光度變化值與酶濃度成正比，即△A/點(吸光度變化率)是一定值。問題組1－8號標本存在底物耗盡現象，其反應曲線在加入試劑2后，其下降曲線都會出現長短不一的一段平坦曲線，這是由于在反應過程中酶底物耗盡使得多個反應點吸光度趨于一致，曲線產生一段平臺期，△A/點≈0，甚至可能是一負值，則計算出的結果不是真實值。

綜上所述，底物耗盡現象在速率法檢測酶活性時都有可能存在，每天通過觀察其反應曲線，可以及時發現檢測中是否存在此現象，如有底物耗盡現象，可通過稀釋樣本重新檢測得以解決，這樣可以避免因錯誤結果而延誤對患者的診斷治療。

1 黃志偉.AST動力學法測定時底物耗盡現象淺析［J］.現代醫學儀器與應用，2005，17(2):30 －32.