uPA和FAK在髓母細胞瘤中的表達及臨床意義

王勇 梁慶華 史錫文

uPA和FAK在髓母細胞瘤中的表達及臨床意義

王勇 梁慶華 史錫文

目的研究尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase-type plasminogen，uPA)和粘著斑激酶(Focal Adhesion Kinase，FAK)在髓母細胞瘤中的表達及臨床意義。方法應用免疫組化法檢測80例髓母細胞瘤中uPA和FAK的表達，結合臨床隨訪，使用Cox回歸統計分析和Spearman相關分析。結果uPA和FAK的染色定位于腫瘤細胞。Cox回歸分析顯示uPA和FAK是影響生存時間的獨立的預后因子，它與預后存在高度負相關關系。Spearman相關分析顯示uPA和FAK存在正相關關系。結論uPA和FAK可能是預測髓母細胞瘤預后的獨立的預后因子。uPA和FAK兩者存在正相關關系。

髓母細胞瘤;uPA FAK;預后

髓母細胞瘤是中樞神經系統一種高度惡性的神經上皮性腫瘤。腫瘤細胞的侵襲性生長是一個多步驟的復雜過程，有多種生物化學因子參與其中。我們通過免疫組織化學方法研究髓母細胞瘤中uPA和FAK的表達情況，同時結合隨訪資料，以評估兩者與預后的關系及兩者之間的相關性。

1 材料與方法

1.1 一般資料 1999～2010年河南省人民醫院神經外科收治的髓母細胞瘤患者98例，其中隨訪、病理和病歷資料完整者80例。男47例;女33例。年齡3～47歲(平均12.6歲)。病程0.5～12個月(平均2.8個月)。切除范圍:全切除63例;次全切除15例;部分切除2例。75例行術后常規放療。外傷或深部手術中必須切除的淺部正常小腦組織10例。

1.2 試劑與方法 本實驗采用LSAB法。單克隆抗體為Oncogene science公司產品，工作濃度為10 μg/ml。FAK多克隆抗體購自武漢博士德公司，工作濃度為1∶100。結果評定標準:由有經驗的病理科醫師對染色結果進行評定。記錄觀察結果(包括陽性細胞種類、陽性染色程度)。在光鏡下，以腫瘤細胞胞漿出現棕黃色顆粒為陽性。每張切片在相同放大倍數下，各選取陽性細胞最集中的10個視野，每個視野數100個細胞，計算出每張切片上陽性細胞的百分率。據此百分率分為高表達組和低表達組。

1.3 統計學方法 Cox比例風險模型用于預后單因素和多因素分析，Spearman相關分析，SPSS13.0軟件做統計處理。

2 結果

2.1 染色結果 在全部切片中，uPA和FAK免疫組化染色從完全不染色到廣泛深染均可見。兩者的陽性細胞是腫瘤細胞。正常小腦組織未見uPA和FAK染色。

2.2 隨訪結果 本組5年生存率為52.4%。uPA高、低表達組的例數分別為47和33例;其平均生存期分別為12.6和61.3個月。FAK高、低表達組的例數分別為52和28例;其平均生存期分別為11.8和60.6個月。

2.3 統計分析結果 Spearman相關分析:通過對年齡、病程、腫瘤體積、切除范圍、放療、uPA、FAK、生存時間運用Spearman相關分析，發現切除范圍、放療、uPA、FAK與生存時間相關(P＜0.05)，而且uPA與FAK也存在相關性(P＜0.05)。Cox分析結果:單因素分析結果表明，對于生存時間來說，切除范圍、放療、uPA、FAK與預后相關(P＜0.05)。年齡、性別、病程、腫瘤體積與預后無明顯相關(P＞0.05)。但多因素分析結果表明，對于生存時間來說，只有uPA、FAK是獨立的預后因子(P＜0.05)，其參數為正值，說明它是一個危險因子。它們呈高表達，則患者的生存期短。

3 討論

腫瘤發生侵襲轉移是一個復雜的多步驟的腫瘤細胞與宿主細胞相互作用的連續過程。首先腫瘤細胞與細胞外基質成分發生粘附，之后腫瘤細胞分泌多種蛋白降解酶，以降解細胞外基質和基底膜成分。FAK在腫瘤細胞與細胞外基質成分粘附及信號傳導中起關鍵作用;而uPA在降解細胞外基質中發揮重要作用。

關于FAK與髓母細胞瘤的關系中，Guessous等［1］通過研究髓母細胞瘤的細胞系發現:FAK在腫瘤細胞的增殖、侵襲、轉移中起重要作用。在我們［2］的前期工作中，發現uPA在髓母細胞瘤中高表達。而本次研究中發現，髓母細胞瘤中的腫瘤細胞都可表達uPA和FAK。結合隨訪資料顯示，uPA或FAK高表達的患者，其平均生存時間均較低表達者短。隨后又發現，uPA、FAK兩者都為高表達的平均生存時間小于兩者之一為高表達者，后者的平均生存時間又小于兩者均為低表達者。通過Spearman相關分析，發現切除范圍、放療、uPA、FAK與生存時間相關(P＜0.05)。但在Cox比例風險回歸分析中，未發現患者的年齡、性別、病程、腫瘤體積、切除范圍、放療與生存時間有關(P＞0.05)。上述結果亦表明切除范圍、放療不是敏感的預后指標。因此，若術中全切除可能有很大風險時，應殘留部分瘤組織。同樣，若術后情況不允許立即放療，可適當延緩進行放療的時間。多因素Cox模型分析顯示，uPA和FAK分別作為獨立指標最終進入模型(P＜0.05)，結合單因素分析結果，表明uPA和FAK可作為預測髓母細胞瘤預后的指標。兩者的表達水平與患者的生存時間呈高度負相關關系。

關于uPA和FAK的關系，我們通過相關分析發現兩者具有相關性(P＜0.05)。兩者之間可能通過 uPA的受體(uPAR)起作用。Nalla等［3］發現在髓母細胞瘤的細胞系中，uPAR超表達可啟動FAK信號系統;而下調uPAR，可通過抑制FAK的磷酸化而減少腫瘤細胞的侵襲活動。

綜上所述，uPA和FAK表達水平同髓母細胞瘤患者的預后密切相關，提示uPA和FAK在腫瘤浸潤轉移過程中起著重要作用。

［1］ Guessous F，Yang Y，Johnson E，et al.Cooperation between c-Met and focal adhesion kinase family members in medulloblastoma and implications for therapy．Mol Cancer Ther，2012，11(2):288-297．

［2］ 王勇，毛伯鏞，程宏偉，等.uPA和KDR在髓母細胞瘤中的表達及意義.中華神經外科雜志，2003，19(2):106-108．

［3］ Nalla AK，Asuthkar S，Bhoopathi P，et al.Suppression of uPAR retards radiation-induced invasion and migration mediated by integrin β1/FAK signaling in medulloblastoma．PLoS One，2010，24(9):13006．

Expression and significance of urokinase-type plasminogen activator and FAK inmedulloblastoma

WANG Yong，LIANG Qing-hua，SHI Xi-wen.Department of Neurosurgery，Henan Provincial People's Hospital，Zhenzhou 450003，China

ObjectiveTo detect the expression and evaluate the clinical significance of urokinase-type plasminogen activator(uPA)and FAK inmedulloblastoma.MethodsLSAB(labelled streptavidin biotin method)immunohistochemical technique was applied for detecting the expression ofuPAand FAK in 80 patients withmedulloblastoma.The results were summarized by follow-up survey with Cox regression analysis and Spearman correlation analysis.ResultsThe staining for uPAand FAK was localized on tumor cells.Cox regression analysis showed that uPAand FAK were independent prognostic factor affecting survival，and they had a negative correlation with the prognosis.Moreover，UPA had a positive correlation with FAK.ConclusionuPA and FAK appears to be an independent marker for predicting the prognosis ofmedulloblastom.UPA had a positive correlation with FAK．

Medulloblastom;uPA;FAK;Prognosis

河南省醫學科技攻關項目(項目編號:201003116)

450003河南省人民醫院神經外科