維生素E對胃黏膜損傷模型小鼠的保護作用研究

王彩冰，晉 玲，黃俊杰，黃彥峰，黃永毅（右江民族醫學院應用生理學研究室，廣西百色 533000）

維生素E（VitaminE，VE）又稱生育酚，是一種很強的脂溶性抗氧化劑，其可通過清除氧自由基、抑制脂質過氧化來保護細胞免受自由基誘導發生氧化損傷，維持細胞膜的正常結構[1]。近年來研究[2～4]發現，VE對心、肝、腎等器官都有保護作用，但對胃黏膜損傷是否具有保護作用尚未見有文獻報道。本研究通過吲哚美辛誘發小鼠胃黏膜損傷模型，探討VE對其胃黏膜損傷的保護作用，為VE的進一步開發利用提供實驗資料。

1 儀器與材料

1.1 儀器

722型分光光度計（上海精密科學儀器有限公司）；Canon PowershotA2000 IS數碼照相機（佳能（中國）有限公司）。

1.2 試藥

VE注射液（上海第九制藥廠，批號：20070801，規格：5 mg·mL－1）；吲哚美辛片（商品名：消炎痛，山西省大同云崗制藥廠，批號：20070513，規格：每片25 mg）；西咪替丁注射液（山東東明制藥廠，批號：20070402，規格：0.2 g·2 mL－1）；碳酸氫鈉（批號：20070121，分析純）、甲醛（批號：20070604）均購自成都市科龍化工試劑廠；超氧化物歧化酶（SOD）檢測試劑盒、丙二醛（MDA）檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20080422、20080119）。

1.3 動物

昆明種小鼠，♀♂兼用，體重20～25 g，由右江民族醫學院實驗動物中心提供，動物生產合格證號：SCXK（桂）2007-0003。

2 方法

2.1 分組與給藥

取小鼠隨機分為正常對照組（生理鹽水10 mL·kg－1）、模型組（生理鹽水10 mL·kg－1）、西咪替丁（25 mg·kg－1）組和VE低、高劑量（25、50 mg·kg－1）組，每組10只，后3組為藥物組，全部小鼠禁食24 h后，自由飲水至實驗前2 h，灌胃給予相應藥物。

2.2 建模

將吲哚美辛片溶于5%碳酸氫鈉溶液中，用蒸餾水稀釋成濃度2.5 mg·mL－1的混懸液。各組小鼠按“2.1”項下給藥30 min后，除正常對照組再灌胃給予生理鹽水10 mL·kg－1外，其余各組小鼠均灌胃給予吲哚美辛25 mg·kg－1[5]，建立胃黏膜損傷模型。

2.3 胃黏膜損傷程度檢測

建模4 h后，采用頸椎脫臼法處死所有小鼠，剖腹，結扎賁門及幽門，取出胃，向胃腔注入4 g·L－1甲醛溶液2 mL并將胃浸泡于該甲醛溶液中10 min以固定。將胃沿大彎剪開，把胃黏膜洗凈后展平于平板上，檢測胃黏膜損傷程度并用照相機微距拍片。損傷程度用損傷指數即參照Kitagawa等[6]方法表示，按黏膜損傷的面積評分并計算損傷指數：≤1.0 mm2為1分，＞1.0 mm2且≤2.0 mm2為2分，依此類推；測量、評分、記錄均由同一人進行。全胃評分的總和為該小鼠的胃黏膜損傷指數，并按下式計算除正常對照組外各組胃黏膜損傷抑制率。損傷抑制率＝（模型組損傷指數－各藥物組損傷指數）/模型組損傷指數×100%。

2.4 血清中SOD活性、MDA含量檢測

在各組小鼠處死前采用摘除眼球法取血，分離血清，用SOD檢測試劑盒和MDA檢測試劑盒檢測各組小鼠血清中SOD活性和MDA含量，按說明書要求進行操作。

2.5 統計學處理

數據用SPSS 13.0統計軟件進行統計分析，兩組間均數比較用t檢驗，統計結果以±s表示。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 小鼠胃黏膜損傷外觀結果

正常對照組小鼠胃黏膜光滑，皺襞完整規律，附有較多的黏液，未見糜爛、潰瘍、出血點。模型組小鼠胃黏膜光滑、皺襞范圍減少，胃黏膜伴有糜爛、潰瘍、出血等損傷，呈點狀、條索狀、片狀或出血壞死斑，損傷部位多見于胃體和胃竇部。西咪替丁組和VE低劑量組小鼠胃黏膜糜爛、潰瘍的程度比模型組明顯降低，胃黏膜損傷表現以點狀的糜爛為主，可見少許出血點。與西咪替丁組和VE低劑量組比較，VE高劑量組小鼠胃黏膜糜爛、潰瘍的程度明顯降低，胃黏膜損傷表現以點狀的糜爛為主，未見出血現象。各組小鼠胃黏膜損傷外觀圖見圖1。

圖1 各組小鼠胃黏膜損傷外觀圖A.正常對照組；B.模型組；C.西咪替丁組；D.VE低劑量組；E.VE高劑量組Fig 1 Appearance of gastric mucosal injury of mice in each groupA.normal control group；B.model group；C.cimetidine group；D.VE low-dose group；E.VE high-dose group

3.2 小鼠胃黏膜損傷指數檢測結果

與正常對照組比較，其余4組小鼠胃黏膜損傷指數均明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，西咪替丁組和VE低、高劑量組小鼠胃黏膜損傷指數均明顯降低（P＜0.01）；與西咪替丁組和VE低劑量組比較，VE高劑量組小鼠胃黏膜損傷指數明顯降低（P＜0.01）。各組小鼠胃黏膜損傷指數比較見表1。

表1 各組小鼠胃黏膜損傷指數比較（±s，n＝10）Tab 1 Comparison of gastric mucosal injury index of mice in each group（±s，n＝10）

表1 各組小鼠胃黏膜損傷指數比較（±s，n＝10）Tab 1 Comparison of gastric mucosal injury index of mice in each group（±s，n＝10）

與正常對照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01；與西咪替丁組比較：ΔP＜0.01；與VE低劑量組比較：★P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01；vs.cimetidine group：ΔP＜0.01；vs.VE low-dose group：★P＜0.01

組別正常對照組模型組西咪替丁組VE低劑量組VE高劑量組損傷抑制率/%胃黏膜損傷指數0 70.10±9.08＊18.10±3.38＊#16.60±2.63＊#10.70±2.67＊#Δ★－0 74.18 76.32 84.74

3.3 小鼠血清中SOD活性、MDA含量檢測結果

與正常對照組比較，模型組小鼠血清中SOD活性、MDA含量均明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，西咪替丁組和VE低、高劑量組小鼠血清中SOD活性、MDA含量均明顯降低（P＜0.01）；與西咪替丁組比較，VE高劑量組小鼠血清中SOD活性明顯降低（P＜0.01）。各組小鼠血清中SOD活性、MDA含量比較見表2。

表2 各組小鼠血清中SOD活性、MDA含量比較（±s，n＝10）Tab 2 Comparison of SOD activity and MDA content in serum of mice in each group（±s，n＝10）

表2 各組小鼠血清中SOD活性、MDA含量比較（±s，n＝10）Tab 2 Comparison of SOD activity and MDA content in serum of mice in each group（±s，n＝10）

與正常對照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01；與西咪替丁組比較：ΔP＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01；vs.cimetidine group：ΔP＜0.01

MDA含量/nmol·mL－1 3.25±0.38 3.95±0.47＊3.25±0.31#3.29±0.41#3.27±0.24#組別正常對照組模型組西咪替丁組VE低劑量組VE高劑量組SOD活性/nU·mL－1 223.74±28.44 295.64±31.26＊257.53±29.66＊#234.87±25.32#224.26±24.19#Δ

4 討論

為了使胃黏膜損傷模型效果更明顯，本實驗的吲哚美辛用量為25 mg·kg－1，比人臨床正常用量經換算后的值稍大（臨床用量換算為20 mg·kg－1）；西咪替丁用量按臨床正常用量換算；VE用量由于目前沒有其使用在胃黏膜損傷時的明確用量，所以筆者選用其臨床用量范圍內的最高值為高劑量，中間值為低劑量[7]。

SOD是有氧代謝細胞生存所必需的一種酶，其能有效地清除代謝過程中產生的超氧陰離子自由基（O2－）。O2－是一種活潑的氧化劑，其能使細胞膜發生脂質過氧化反應生成脂質過氧化物（LPO），造成組織細胞損傷。在正常情況下，體內自由基生成與清除能力處于動態平衡狀態，一旦自由基生成過多或清除能力下降，都會打破這一平衡，致使組織細胞損傷。一般在疾病急性期，SOD被緊急動員而活性往往高于正常水平。通過SOD活性的測定能反映氧自由基含量，LPO的中間代謝產物MDA含量的測定能反映脂質過氧化物濃度[8，9]。

本實驗結果顯示，模型組小鼠胃黏膜損傷指數和血清中SOD活性、MDA含量均明顯高于正常對照組，表明吲哚美辛誘發胃黏膜損傷后，機體內氧自由基和LPO生成增多，而機體在急性胃黏膜損傷期緊急動員體內的SOD來清除氧自由基，這與鄒雄[9]報道結果一致，但仍誘發了胃黏膜損傷，說明LPO生成過多，體內氧自由基生成大于清除能力，引起強烈的胃黏膜脂質過氧化反應，造成明顯的胃黏膜損傷。這些都提示氧自由基參與了吲哚美辛誘發的胃黏膜損傷過程。此外，吲哚美辛還能通過抑制前列腺素合成酶使前列腺素生成減少，從而引起胃黏膜屏障低下，使胃黏膜易受損傷因子攻擊，導致胃黏膜損傷[1，5]。

本實驗結果顯示，VE低、高劑量組小鼠血清中SOD活性、MDA含量均明顯低于模型組，而與正常對照組比較無顯著性差異，說明VE參與抗氧化、清除氧自由基和抑制脂質過氧化過程，提高胃黏膜的抗氧化和防御保護功能，從而維持胃黏膜的穩定性，起到保護胃黏膜的作用。隨著VE用量的增大，吲哚美辛誘發的胃黏膜損傷指數明顯降低，提示VE預防吲哚美辛誘發胃黏膜損傷的保護作用可能存在一定量效正相關關系；但VE能否通過促進前列腺素合成參與對胃黏膜損傷保護，有待進一步研究。

本實驗結果表明，西咪替丁抑制胃黏膜損傷可能與清除氧自由基相關。西咪替丁是臨床上常用治療消化道潰瘍病的藥物，其通過抑制胃泌素及胃蛋白酶等的分泌，從而減少胃酸生成，減輕氫離子逆向彌散及胃蛋白酶對胃黏膜的破壞[1]。本實驗結果表明，VE低劑量（25 mg·kg－1）組對胃黏膜損傷的保護作用與西咪替丁（25 mg·kg－1）組比較無顯著性差異，而VE高劑量（50 mg·kg－1）組對胃黏膜損傷的保護作用強于西咪替丁（25 mg·kg－1）組，從而為VE預防胃黏膜損傷的臨床開發應用提供實驗依據。

[1]楊寶峰，蘇定馮，周 宏，等.藥理學[M].第7版.北京：人民衛生出版社，2008：183、271、323.

[2]郭文萃，許立新，謝 偉.維生素E對大劑量維生素D3所致心肌損傷保護作用的實驗性研究[J].內科急危重癥雜志，2009，15（3）：146.

[3]徐 明，孫 申，張 洋.維生素C和維生素E單用及聯用對慢性酒精性肝損傷模型大鼠的預防性保護作用[J].中國藥房，2010，21（45）：4 240.

[4]毛曉明，王愛萍.維生素E對糖尿病患者腎臟的保護作用[J].中華內分泌代謝雜志，2000，16（5）：315.

[5]李國平，鄧長生，杜意平，等.TNF-α參與消炎痛誘導大鼠胃粘膜損傷機制的探討[J].中國病理生理雜志，1999，15（9）：814.

[6]Kitagawa H，Fujiwara M，Qsumi Y.Effects of water-immersion stress on gastric secretion and mucosal blood flow in rats[J].Gastroenterology，1979，77（2）：298.

[7]陳新謙，金有豫，湯 光.新編藥物學[M].第16版.北京：人民衛生出版社，2007：193、462、691.

[8]顧鳳英，季健平，童正本，等.非何杰金淋巴瘤患者紅細胞超氧化物歧化酶、血清脂質過氧化物、維生素E的變化及其臨床意義的探討[J].腫瘤防治研究，1994，21（6）：346.

[9]鄒 雄.自由基的實驗室檢查[J].山東醫藥，1994，34（2）：42.