卡馬西平聯合嗎啡對慢性坐骨神經縮窄損傷模型大鼠的鎮痛作用研究

周祥，張強，惠紅巖，劉新民（1.新鄉醫學院第一附屬醫院神經外科，河南衛輝453100；.新鄉醫學院第一附屬醫院藥劑科，河南衛輝 453100）

神經病理性疼痛（Neuropathic pain）是由神經系統原發性損害和功能障礙所激發或引起的疼痛綜合征[1]。隨著人口的老齡化，癌癥、糖尿病和其他引發神經病理性疼痛的患者存活期越來越長，神經病理性疼痛的發病率大幅增加，嚴重影響著人類的健康[2]。然而，神經病理性疼痛發病的機制尚不完全清楚，且疼痛劇烈，臨床上的治療手段仍然有限，目前尚無一種特定的藥物能夠治療多種甚至同一種神經病理性疼痛[3]。因此對神經病理性疼痛治療方法的研究具有重要意義。卡馬西平是用于神經病理性疼痛治療的一線藥物，可治療多種神經病理性疼痛，但對于重度疼痛效果甚微，且存在大劑量容易產生認知功能障礙、停藥后易復發的缺點[4]。同時，由于任何一種用藥都不能完全緩解神經病理性疼痛，因此常選擇聯合用藥。已知嗎啡等阿片類藥物是治療其他治療（局部麻醉藥利多卡因神經阻滯、理療和康復治療等）無效的重度神經病理性疼痛的主要藥物，但容易產生成癮性、耐受性和嚴重的毒副作用[3]。針對二者合用是否可減少單藥應用的劑量又能達到目標療效，筆者擬研究卡馬西平聯合嗎啡對慢性坐骨神經縮窄損傷（CCI）模型大鼠的鎮痛作用，以期找到適合于臨床的有效、安全的聯合用藥方案。

1 儀器與材料

1.1 儀器

ME-410A型輻射熱痛覺測試儀（中國醫學科學院生物醫學工程研究所）；Von-Frey纖毛細絲機械刺激器（美國Stoelting公司）。

1.2 試藥

卡馬西平片（上海三維制藥有限公司，批號：20100416，規格：每片0.1 g）；鹽酸嗎啡注射液（沈陽第一制藥廠生產，批號：000315，規格：5 mg∶0.5 mL）；水合氯醛（中國醫藥集團上海化學試劑有限公司，批號：990511）；生理鹽水（河南華利制藥股份有限公司，批號：C11042309）。

1.3 動物

SD大鼠，♂，體重200～250 g，由新鄉醫學院實驗動物中心提供，合格證號：SCXK（豫）2009-0001。大鼠自由飲水和飲食，12 h明暗交替光照，相對濕度為50%～60%。

2 方法

2.1 建模

大鼠適應性喂養1周后，參照Bennett和Xie于1988年創建方法建立CCI模型[5]。腹腔注射10%水合氯醛400 mg·kg－1進行麻醉，消毒大鼠雙后肢，于股骨后暴露右側坐骨神經，在接近分叉之前游離出約7 mm的神經，用鉻制羊腸線間隔1 mm結扎4處（以不影響神經外膜的血運為度，即以引起小腿肌肉輕度顫動反應為宜），然后逐層縫合切口。假手術僅暴露分離坐骨神經干，不予結扎。CCI模型成功的指標是術后第7天時右下肢對Von-Frey纖毛細絲機械刺激器表現為痛覺過敏。本實驗建模成功率為80%左右。

2.2 分組與給藥

大鼠建模成功后，隨機分為模型組（生理鹽水）、卡馬西平組（5 mg·kg－1）、嗎啡組（3 mg·kg－1）和聯用組（卡馬西平5 mg·kg－1+嗎啡3 mg·kg－1），每組16只，另設16只為假手術組（生理鹽水）。建模術后第8天開始，每日早上9：00分別腹腔注射相應藥物，連續5 d。其中卡馬西平給藥劑量按照人臨床常用量0.1 g換算，嗎啡給藥劑量按照人臨床極量30 mg換算。

2.3 一般情況觀察

建模手術后和給藥過程中，觀察各組大鼠有無感染、自殘等現象以及模型大鼠神經病理性疼痛的一般行為學特點。

2.4 機械縮足反射閾值（PWMT）的檢測

各組取8只大鼠在給藥前和給藥第1、3、5天，以及停藥2 d后檢測PWMT。具體方法：將一有機玻璃箱（22 cm×12 cm×22 cm）置于金屬篩網上，待大鼠在箱中適應15 min后，用Von-Frey纖毛機械刺激器垂直刺激大鼠后肢足底中部，持續時間≤4 s，大鼠出現抬足或舔足行為視為陽性反應，否則為陰性反應。刺激由小到大，每個強度反復刺激10次（每次間隔3～5 s），將出現縮足反射5次左右的強度定為PWMT。

2.5 熱輻射縮足反射潛伏期（PWL）的檢測

各組剩余8只大鼠在給藥前和給藥后第1、3、5天，以及停藥2 d后檢測PWL。具體方法：用輻射熱痛覺測試儀聚光光源照射大鼠足底部，設定刺激強度為光強度刺激，記錄由照射開始到大鼠縮腳時間（單位：s）。以30 s為最大閾值，為防止燙傷，每次照射足底不同部位，每次實驗測量3次，平均值代表閾值。

2.6 統計學方法

計量資料以均數±標準差（±s）表示，使用SPSS 11.0統計軟件，組間采用單因素方差分析。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 一般情況

本實驗所有大鼠建模術后和給藥期間均無感染和自殘等現象。模型大鼠出現坐骨神經結扎側的足趾并攏、后足輕度外翻和跛行、休息時避免將全身重量放至結扎側的特點。假手術組大鼠建模術后未出現術側爪內收和運動障礙。

3.2 PMWT的變化

與給藥前比較，卡馬西平組、嗎啡組和聯用組大鼠給藥第1、3、5天的PMWT均明顯增強（P＜0.05或P＜0.01），聯用組停藥2 d后的PMWT仍明顯增強（P＜0.05）。與假手術組比較，模型組大鼠給藥前和給藥后各時間點的PMWT均明顯減弱（P＜0.01）。與嗎啡組比較，聯用組大鼠給藥后各時間點的PMWT均明顯增強（P＜0.05或P＜0.01）。各組大鼠給藥前、后各時間點的PMWT變化見表1。

表1 各組大鼠給藥前、后各時間點的PMWT變化（g，±s，n＝8）Tab 1 Changes of PMWT of CCI rats in each group before and after medicatioc（g，±s，n＝8）

表1 各組大鼠給藥前、后各時間點的PMWT變化（g，±s，n＝8）Tab 1 Changes of PMWT of CCI rats in each group before and after medicatioc（g，±s，n＝8）

與給藥前比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與假手術組比較：#P＜0.01；與嗎啡組比較：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01vs.before medication：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.sham operation group：#P＜0.01；vs.morphine group：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

組別假手術組模型組卡馬西平組嗎啡組聯用組停藥2 d 15.2±1.3 4.5±0.9#5.1±0.7 4.9±1.3 7.3±1.8＊＊Δ用藥前15.4±1.8 4.2±1.3#4.9±2.0 4.2±1.3 4.8±1.7用藥后1 d 14.8±1.2 4.8±2.1#6.5±1.3＊8.3±3.4＊＊12.3±3.1＊＊ΔΔ 3 d 15.3±1.9 4.0±1.4#6.9±2.1＊8.4±2.1＊＊13.2±2.8＊＊ΔΔ 5 d 14.3±1.4 4.3±1.1#6.3±1.9＊6.2±3.1＊13.1±2.4＊＊ΔΔ

3.3 PWL的變化

與給藥前比較，嗎啡組和聯用組大鼠給藥第1、3天的PWL均明顯延長（P＜0.05或P＜0.01），聯用組給藥第5天和停藥2 d后的PWL仍明顯延長（P＜0.01）。與假手術組比較，模型組大鼠給藥前和給藥后各時間點的PWL均明顯縮短（P＜0.01）。與嗎啡組比較，聯用組大鼠給藥后各時間點的PWL均明顯延長（P＜0.05或P＜0.01）。各組大鼠給藥前、后各時間點的PWL變化見表2。

表2 各組大鼠給藥前、后各時間點的PWL變化（s，±s，n＝8）Tab 2 Changes of PWL of CCI rats in each group before and after medication（s，±s，n＝8）

表2 各組大鼠給藥前、后各時間點的PWL變化（s，±s，n＝8）Tab 2 Changes of PWL of CCI rats in each group before and after medication（s，±s，n＝8）

與給藥前比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；假手術組比較：#P＜0.01；與嗎啡組比較：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01vs.before medication：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.sham operation group：#P＜0.01；vs.morphine group：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

組別假手術組模型組卡馬西平組嗎啡組聯用組停藥2 d 20.5±1.4 9.8±2.9#11.2±1.7 9.9±1.5 14.3±1.7＊＊Δ用藥前20.3±1.9 9.1±1.9#10.1±3.1 9.8±2.1 9.9±1.4用藥后1 d 21.7±1.3 9.4±2.3#11.7±1.8 14.3±3.8＊17.3±2.8＊＊ΔΔ 3 d 22.3±1.4 9.3±2.4#11.9±2.3 13.4±2.9＊17.2±3.1＊＊ΔΔ 5 d 20.8±1.3 9.9±1.8#11.8±1.7 11.9±3.3 17.1±2.4＊＊ΔΔ

4 討論

神經病理性疼痛是由于外周或中樞神經系統損傷或疾病引起的疼痛綜合征，主要表現為自發疼痛、痛覺過敏和痛覺超敏[1]。對神經病理性疼痛的研究多采用經典的CCI模型，研究發現，使用羊腸線結扎大鼠坐骨神經主干，數日后，術側后趾對熱和機械刺激可產生明顯的疼痛反應，造成典型的CCI模型[6]。本實驗中所用的CCI模型大鼠在術后第7天表現為對熱刺激和機械刺激產生疼痛反應，該作用持續至術后第14天。

本研究結果發現，5 mg·kg－1卡馬西平對CCI模型大鼠的熱痛無顯著的改善作用，但可改善機械痛，該作用可能與CCI模型大鼠本身對熱痛敏感性強于機械痛有關[7]，導致5 mg·kg－1卡馬西平劑量不足以在熱刺激模型中產生藥效。單獨給予嗎啡可顯著增強PWMT和延長PWL，但給藥第5天，嗎啡的作用減弱，提示長期給予嗎啡在CCI模型大鼠體內產生了耐受。而卡馬西平和嗎啡聯用組，給藥期間顯著減弱PWMT和縮短PWL，作用強于單獨給予嗎啡組，且長期給藥（5 d）無耐受現象發生。同時，停藥2 d后，聯用組仍發揮抗神經病理性疼痛的作用，增強PWMT和延長PWL。

卡馬西平是治療神經病理性疼痛的抗癲癇藥物，主要通過阻滯各種細胞膜鈉離子通道的興奮，抑制異常高頻放電的發生和擴散[8]。在本實驗中，卡馬西平組對模型大鼠的機械痛有較好的治療作用。有研究[9]表明，卡馬西平具有增強阿片類物質的鎮痛作用，而該作用可能與卡馬西平為N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受體拮抗藥有關，因為拮抗NMDA可增強嗎啡的鎮痛作用。此外，在嗎啡耐受模型中，環磷酸腺苷（cAMP）水平增加，從而激活電壓門控鈉離子通道，而卡馬西平作為鈉離子通道阻滯藥可拮抗該作用[10]。因此，在本研究中，當卡馬西平和嗎啡聯用后，嗎啡可更好地控制神經病理性疼痛。

綜上所述，卡馬西平聯合嗎啡能明顯減弱CCI模型大鼠的機械痛和熱痛反應，延長嗎啡作用時間，改善嗎啡耐受，可為臨床治療神經病理性疼痛聯合用藥提供參考。

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