莫吉司坦中有關物質檢測方法研究

黃 艷，胡廣林

(1.海南醫學院藥學院，海南 ?？?571101; 2.海南大學材料與化工學院，海南 海口 570228)

莫吉司坦(moguisteine)于2004年在意大利獲準上市，是Roche公司開發的呼吸系統用藥，用于治療由感染、刺激、炎癥、腫瘤引起的急慢性呼吸系統疾病所致的咳嗽，鎮咳作用顯著，且不具有成癮性[1]。目前，莫吉司坦的有關物質測定方法國內未見文獻報道。筆者建立了高效液相色譜法，用于檢測莫吉司坦的有關物質，方法簡便、準確、靈敏，現報道如下。

1 儀器與試藥

LC－6AD型高效液相色譜泵(日本島津)，SPD－10Avp型紫外檢測器(日本島津)，2000型色譜工作站(浙大智能信息工程研究所);JASCOV－650型紫外－可見分光光度計(日本);Sartotius NE215S型電子天平(賽多利斯科學儀器有限公司)。甲醇為色譜純，水為高純水;莫吉司坦(批號為 20100801，20100802，20100803，自制);莫吉司坦對照品(自制，經檢測純度為99.80%)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Luna C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 － 水(58 ∶42);檢測波長:230 nm;流速:1.0 mL/min。精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μL注入液相色譜儀，結果見圖1。理論板數按莫吉司坦主峰計算為2 343，莫吉司坦與相鄰雜質峰的分離度為2.0。

2.2 溶液配制

取莫吉司坦對照品約25 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加流動相約15 mL，超聲使溶解，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品約25 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加流動相約15 mL，超聲使溶解，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液2 mL，置100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為自身對照溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

檢測限確定:取上述對照品溶液，逐級稀釋，分別取20 μL注入液相色譜儀，經分析，莫吉司坦的檢測限為2.0 ng。

專屬性試驗:取莫吉司坦約25 mg，共6份，精密稱定，分別置25 mL量瓶中，加流動相約15 mL，超聲使溶解，按下列條件試驗。放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻(未破壞);放冷，加1 mol/L氫氧化鈉溶液5 mL，室溫下放置2 h，用1 mol/L鹽酸溶液調節pH至中性，用流動相稀釋至刻度，搖勻(強堿破壞);放冷，加1 mol/L鹽酸溶液5 mL，室溫下放置2 h，用1 mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至中性，用流動相稀釋至刻度，搖勻(強酸破壞);于沸水浴中放置1 h，取出，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻(高溫破壞);在日光下放置2 h，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻(光破壞);放冷，加30%過氧化氫溶液3 mL，室溫下放置2 h，用流動相稀釋至刻度，搖勻(氧化破壞)。分別精密量取上述6種溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見圖2。

圖2 專屬性試驗色譜圖

精密度試驗:精密吸取自身對照溶液，連續進樣6次測定。結果峰面積的 RSD為1.62%(n=6)，表明本法的精密度良好。

重復性試驗:取批號為20100802的樣品6份，依法制備供試品溶液。精密量取供試品溶液和自身對照溶液各20 μL，注入液相色譜儀測定有關物質。結果最大雜質含量的 RSD為1.40%，總雜質的 RSD為1.98%，表明方法的重復性較好。

穩定性試驗:取同一供試品(批號為20100802)溶液，分別在放置 0，2，4，6，8 h 后測定。結果主峰峰面積的 RSD 為 0.92%，總雜質峰面積的 RSD為1.54%，表明供試品溶液8 h內穩定性良好。

2.4 樣品有關物質檢測

取3個批次的供試品，照2.2項下方法制備溶液并照2.1項下色譜條件檢測有關物質。結果見表1。

表1 樣品有關物質測定結果

3 討論

用流動相溶解制成每1 mL中含莫吉司坦約20 μg的對照品溶液，照分光光度法[2]，于200～400 nm波長范圍內掃描，結果莫吉司坦在275 nm波長處有最大吸收峰，但吸收較弱;約在228 nm波長處還有一肩峰，故參考文獻[3]選擇230 nm的波長作為本品有關物質的檢測波長。

在進行色譜條件優化試驗中，發現甲醇－水(60∶40)為流動相時，主峰保留時間較適中且分離效果較好，但主峰稍有拖尾;曾考慮加入0.1%三乙胺改善主峰峰形，結果主成分嚴重被破壞，產生大量的有關物質;最終以甲醇－水(58∶42)為流動相時，主峰峰形得以改善。

專屬性試驗結果表明，在中性條件下高溫或光照時莫吉司坦的有關物質稍有增加;在強堿、強酸或氧化劑存在的條件下莫吉司坦發生明顯的降解，產生大量的有關物質;所產生的降解產物的峰與主峰均能達到完全分離，分離度符合規定。欲知其降解產物具體是什么物質，還有待進一步研究。

專屬性試驗結果還表明，本品的主要雜質峰均在主峰2倍保留時間內出峰，且在進行破壞性試驗考察時，各破壞條件下的色譜圖中主峰2倍保留時間后均無雜質峰出現，因此確定本品有關物質檢查的保留時間為主峰保留時間的2倍。

本法專屬性強、靈敏度高、重復性好，可用于莫吉司坦有關物質的檢測。

[1]Angelis L.Moguisteine[J].Drugs of the Future，1991，16(7):618 － 619.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄23.

[3]D.Castoldi，A.Oggioni，M.I.Renoldi，et al.Assay of moguisteine metabolites in human plasma and urine conventional an chiral high－performance liquid chromatographic methods[J].Journal chromatoGraphy B，1994，655:243－252.