HPLC法測定腎樂膠囊中橙皮苷的含量

2012-08-01 07:18:30郭興道解放軍總醫院藥品保障中心藥檢室北京00853河北北方學院河北張家口075000

中國藥物應用與監測 2012年3期

白林，郭興道，任韡（.解放軍總醫院藥品保障中心藥檢室，北京 00853；.河北北方學院，河北張家口 075000）

腎樂膠囊為解放軍總醫院非標制劑，由水蛭、陳皮等五味中藥材加工制成，具有活血化瘀、益氣養血、健脾利濕的功效，常用于慢性腎小球腎炎，證屬氣虛血瘀夾水濕者。方中陳皮味辛、苦，性溫，入脾、肺經，其功能為理氣健脾，燥濕化痰[1]。陳皮中含多種揮發油及黃酮類物質[2]，尚未建立其含量測定質量控制標準。本實驗采取HPLC法對腎樂膠囊中陳皮的主要成分橙皮苷進行含量測定，此法簡便、準確、重復性好，為有效控制腎樂膠囊的質量提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司，含四元梯度泵、自動脫氣機、VWD檢測器和化學工作站）；CX-300型超聲波清洗機（北京市天海雙龍醫療器械有限責任公司）；UV-2550型紫外分光光度儀（日本島津）。

橙皮苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110721-200613）；甲醇為色譜純；水：重蒸水。腎樂膠囊（解放軍總醫院，規格：0.45 g/粒，批號100601，101215，110512）。

2 方法

2.1 色譜條件

Diamonsil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm），甲醇-水（40∶60）為流動相，檢測波長283 nm，柱溫為35 ℃，流速1.0 mL·min-1，進樣量為10 μL。理論塔板數按橙皮苷峰計算不低于3000[3]。

2.2 溶液的制備

對照品溶液：取橙皮苷對照品約0.013 35 g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得儲備液（0.534 mg·mL-1）；精密量取上述儲備液2 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（42.72 μg·mL-1）。

供試品溶液：取裝量差異項下的腎樂膠囊內容物適量，研細，取粉末約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理[4]30 min，放冷至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，經0.22 μm微孔濾膜濾過，即得。

陰性空白對照液：按處方比例稱取除陳皮以外的其余藥味，按腎樂膠囊制備工藝制成缺陳皮的陰性空白對照液，按供試品溶液制備方法制成陰性對照液。

2.3 系統適用性實驗

取對照品溶液、供試品溶液、缺陳皮陰性空白對照液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件測定，色譜圖見圖1。

圖1 橙皮苷色譜圖Fig 1 Chromatograms of Hesperidin

2.4 線性關系考察

精密吸取對照品儲備液（0.534 mg·mL-1）0.16，0.32，0.64，1.28，1.6 mL，分別置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度并搖勻，得到濃度分別為8.544，17.09，34.18，68.35，85.44 μg·mL-1的系列對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積值為縱坐標（Y），進樣濃度為橫坐標（X）繪制標準曲線，得到回歸方程：Y= 17.026 4X+ 2.667 3，r= 0.999 9。結果表明，橙皮苷在8.544 ～85.44 μg·mL-1時，與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度實驗

按上述色譜條件，精密吸取對照品溶液10 μL，連續重復進樣5次，記錄峰面積值，平均值為765.2，RSD為0.12%（n= 5）。說明儀器的精密度良好。

2.6 重復性實驗

取本品（批號100601）粉末，按供試品溶液方法制備供試品溶液，按色譜條件檢測，精密吸取供試品溶液10 μL，注入色譜儀，共進樣5次，記錄峰面積，平均值為548.88，RSD為0.19%（n= 5）。表明本方法重復性良好。

2.7 穩定性實驗

取本品（批號100601）粉末，按供試品溶液方法制備供試品溶液，按色譜條件，精密吸取供試品溶液10 μL，分別在0，4，8，12，16，24 h進樣。記錄峰面積值，平均值為514.05，RSD為1.26%。表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

2.8 回收率實驗

取6份已知含量的腎樂膠囊（批號100601）內容物適量，每份約1 g，研細，精密稱定，分別加入編號1～6的具塞錐形瓶中，分別精密加2 mL對照品儲備液（濃度0.534 mg·mL-1）和48 mL甲醇，按供試品溶液制備方法，依色譜條件測定，記錄色譜圖及峰面積，計算回收率。結果平均回收率為101.6%，RSD為0.54%（n= 6），說明本方法的回收率良好，具體見表1。