麥貞花顆粒有效成分的含量測定

田立元 常星潔 嚴(yán) 冬 劉志輝

1.江蘇省中醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210046；3.南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210046

麥貞花顆粒由麥冬、靈芝、女貞子、紅花、槐米五味藥組成，具有補(bǔ)益心腎、化瘀通絡(luò)之功效，用于冠心病、心絞痛的治療，療效顯著。麥冬作為方中君藥，其皂苷類成分具有較好的抗心肌缺血和心肌梗死作用；女貞子為臣藥，其環(huán)烯醚萜類成分具有降血脂、降血糖、降低血液黏度等多種藥理活性[1-3]，故選擇麥冬皂苷D和女貞子環(huán)烯醚萜類成分之一特女貞苷作為含量測定指標(biāo)成分，與本制劑治療冠心病、心絞痛目的一致。

1 儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀：G1322A脫氣機(jī)，G1311A四元泵，G1316A柱溫箱，G1314A VWD檢測器；Waters2695高效液相色譜儀；Alltech 2000ES ELSD檢測器；電子分析天平（BP-211D型，德國賽多利斯公司）等。

麥冬皂苷D、特女貞苷對照品（購自南京澤郎醫(yī)藥科技有限公司，含量測定用，批號分別為ZL20110312MDZG和ZL20100928TNZG）。測定用甲醇和乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 麥冬皂苷D含量測定[4-8]

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 Hedera C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：以水為流動相A，乙腈為流動相B，按下列洗脫程序進(jìn)行梯度洗脫：0～28 min，28%B；28～38 min，50%B；38～42 min，28%B。 柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；蒸發(fā)溫度：103℃；氣體流速：2.7 L/min。HPLC圖譜見圖1。

圖1 麥冬皂苷D對照品、供試品、陰性樣品溶液色譜

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1毫升含400 μg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 麥冬水提液適當(dāng)濃縮，等體積水飽和正丁醇萃取4次后，萃取液用氨水洗滌2次，正丁醇液減壓回收至干，殘渣加甲醇溶解并定容至5 mL，微孔濾膜濾過，即得。

2.1.4 陰性溶液的制備 按照供試品溶液的制備方法，取缺少麥冬的陰性對照樣品，制備成陰性對照溶液。

2.1.5 線性關(guān)系考察 分別吸取麥冬皂苷對照品溶液（411.2μg/mL）3、5、10、15、20、25、30 μL，依次進(jìn)樣，測定，以進(jìn)樣量對數(shù)值為橫坐標(biāo)（X），峰面積對數(shù)值為縱坐標(biāo)（Y），將測得的實(shí)驗數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，得方程Y=1.6964X+5.4144，r=0.9996，結(jié)果表明麥冬皂苷D在進(jìn)樣量1.234～12.336 μg與峰面積的線性關(guān)系良好。

2.1.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀中，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果以麥冬皂苷D峰面積計RSD為1.26%。

2.1.7 重復(fù)性試驗 取麥貞花顆粒約15 g，共6份，精密稱定，依法制備供試品溶液，測定，計算，結(jié)果平均含量為：麥冬皂苷D 0.0138 mg/g，RSD以麥冬皂苷峰面積計為2.59%。

2.1.8 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，按上述色譜條件，分別于 0、2、4、8、12 h 進(jìn)樣，測定，麥冬皂苷 D 以峰面積計 RSD為1.17%，說明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.9 加樣回收率試驗 取麥貞花顆粒（麥冬皂苷含量為0.0138mg/g）約15 g，共6份，精密稱定，加入麥冬皂苷D對照品適量，依法制備供試品溶液。按含量測定方法進(jìn)行測定，計算。見表1。

表1 麥冬皂苷D加樣回收率結(jié)果

2.1.10 樣品含量測定 取麥貞花顆粒的三批中試產(chǎn)品，依法制備供試品溶液，測定，計算。結(jié)果三批中試產(chǎn)品麥冬皂苷D含量分別為 0.0138、0.0149、0.0130 mg/g。

2.2 特女貞苷含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 色譜柱：Hedera C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（40∶60）；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；檢測波長：224 nm；進(jìn)樣量：5 μL。 HPLC 圖譜見圖2。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取特女貞苷對照品適量，加甲醇制成每1毫升含400 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取麥貞花顆粒約3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，稱定重量，超聲30 min，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

圖2 特女貞苷對照品、供試品、陰性樣品溶液色譜

2.2.4 陰性溶液的制備 按照供試品溶液的制備方法，取缺少女貞子的陰性對照樣品，制備成陰性對照溶液。

2.2.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取特女貞苷對照品溶液（406.4 μg/mL）一定量，加甲醇稀釋成濃度為 40.64、81.28、121.92、203.20、243.84、325.12 μg/mL 的一系列對照品溶液， 按上述色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y）樣品濃度為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y=6.2924X+3.5859（r=0.9995），結(jié)果表明特女貞苷在 40.64～325.12 μg/mL與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液5 μL，注入高效液相色譜儀中，重復(fù)進(jìn)樣6次，以特女貞苷峰面積計RSD為1.12%。

2.2.7 重復(fù)性試驗 取麥貞花顆粒約3 g，共6份，精密稱定，依法制備供試品溶液，測定，計算，特女貞苷平均含量為3.72 mg/g，以特女貞苷峰面積計RSD為3.87%。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，按上述色譜條件，分別于 0、2、4、8、12 h 進(jìn)樣，測定，以特女貞苷峰面積計 RSD 為2.21%，說明本品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9 加樣回收率試驗 取麥貞花顆粒（特女貞苷含量為3.73mg/g）約1 g，共6份，精密稱定，加入特女貞苷對照品適量，依法制備供試品溶液，按樣品測定方法進(jìn)行測定，計算。見表2。

2.2.10 樣品含量測定 取麥貞花顆粒的三批中試產(chǎn)品，依法制備供試品溶液，測定，計算。結(jié)果三批中試產(chǎn)品特女貞苷含量分別為 3.69、3.73、3.85 mg/g。

3 討論

3.1 特女貞苷供試品的制備

比較了不同提取方法（加熱回流和超聲提取）以及不同提取溶劑（30%、50%、70%濃度乙醇）對特女貞苷含量測定的影響，結(jié)果表明50%乙醇超聲提取特女貞苷含量最高。繼而考察不同提取時間（30、60、90 min）對其含量影響，結(jié)果 30 min后特女貞苷含量沒有增高，故供試品溶液制備方法為：50 mL稀乙醇超聲提取30 min，濾過，即可。

表2 特女貞苷加樣回收率結(jié)果

3.2 指標(biāo)成分的選擇

麥冬皂苷類成分具有抗心肌缺血和心肌梗死作用，文獻(xiàn)報道[4]川麥冬藥材中麥冬皂苷D含量較高，采用HPLC-ELSD法對其進(jìn)行含量測定，方法成熟、穩(wěn)定，且處方中麥冬作為君藥，故選擇麥冬皂苷D作為含量測定指標(biāo)之一。近年來關(guān)于女貞子環(huán)烯醚萜類成分的研究日益增多，它具有保肝利膽、降血脂、降血糖、降低血液黏度、增強(qiáng)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)等多種藥理活性，鑒于制劑中麥冬皂苷D含量較低，故將麥冬皂苷D和特女貞苷共同作為制劑含量測定指標(biāo)，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好。

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