可同時測定蛇膽川貝液中貝母素甲與貝母素乙含量的方法

范 蕾，王偉影

(浙江省麗水市食品藥品檢驗所，浙江 麗水 323000)

蛇膽川貝液是由蛇膽汁、平貝母、杏仁水組成的復方制劑，具有祛風止咳、除痰散結的功效。方中的平貝母為百合科多年生草本植物平貝母 Fritiliariae ussuriensis Maxim.的干燥鱗莖，性味苦、甘，微寒，歸肺、心經，具有清熱潤肺、化痰止咳功效。甾體生物堿是平貝母功效的物質基礎，對其含量測定的方法有比色法、滴定法等，但存在終點不易辨認、靈敏度低等不足;而薄層色譜法、柱前衍生化法[1]等也有干擾因素多、樣品處理煩瑣的局限;又因甾體生物堿沒有紫外吸收，無法使用紫外檢測器測量[2]。本試驗采用高效液相色譜－蒸發光散射檢測器法，選取平貝母中貝母素甲和貝母素乙兩個指標，同時進行含量測定，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀，自動進樣器，蒸發光散射檢測器，Agilent色譜工作站。貝母素甲(批號為110750－200305)、貝母素乙(批號為110751－200303)均來自中國藥品生物制品檢定所;蛇膽川貝液(武漢鑫瑞藥業有限公司，批號分別為20100501，20100302，20101003);乙腈、甲醇為色譜純(Merck公司)，二乙胺為分析純(杭州高精精細化工有限公司)，水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent SB C18柱(150 mm ×4.6 mm， 5 μm);流動相:乙腈－水－ 二乙胺(70∶30∶0.03);流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;漂移管溫度:85℃;載氣(氮氣)流速:2.5 L/min。蒸發光散射檢測器。

2.2 溶液制備

取貝母素甲、貝母素乙對照品適量，加甲醇制成質量濃度分別為0.75，0.89 g/L的混合溶液，作為貯備液。精密量取貯備液制成每1 mL含貝母素甲60μg、含貝母素乙70μg的混合溶液，作為對照品溶液。精密取樣品25 mL，置分液漏斗中，加氨水2 mL，用氯仿提取4次，20 mL/次，提取液蒸干，殘渣用甲醇溶解稀釋至10 mL，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。取處方中除平貝母外中藥飲片自制空白樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:取 2.2項下 3種溶液，按 2.1項下色譜條件進行分析，運行時間12 min。在此條件下，樣品中貝母素甲、貝母素乙均分離良好，空白對照無干擾。見圖1。

線性關系考察:取2.2項下對照品溶液，依次進樣 1，2，5，10，15，30，40 μL，按2.1項下色譜條件進行測定，以lgA為縱坐標、lgC為橫坐標繪制曲線，回歸方程貝母素甲為 Y=0.7541 X－19.7760(r=0.9997)，貝母素乙為 Y=0.6875 X－19.3512(r=0.9996)。結果表明，貝母素甲進樣量在 0.06～2.406μg 、貝母素乙進樣量在 0.071 ～2.812μg 范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗:取對照品貯備液，制成質量濃度分別為貝母素甲187μg/mL，貝母素乙89μg/mL的混合溶液。按2.1項下色譜條件連續進樣5次。結果貝母素甲與貝母素乙的 RSD分別為0.38%和0.71%。

重復性試驗:取同一批(批號為20100501)樣品，平行取樣5份，依法測定。結果貝母素甲及貝母素乙的含量平均值分別為0.053 g/L 和 0.061 g/L，RSD 分別為 0.55%和 0.83%。

穩定性試驗:取同一供試品溶液(批號為20100501)，分別在0，5，10，20，24 h時進樣。結果貝母素甲與貝母素乙峰面積的 RSD分別為0.55%和0.29%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

加樣回收試驗:取樣品(批號為20100501，含貝母素甲為0.053 g/L、貝母素乙為0.061 g/L)6份，分別精密加入對照品溶液3 mL(相當于貝母素甲對照品561μg、貝母素乙對照品267μg)、4mL(相當于貝母素甲對照品748μg、貝母素乙對照品356μg)、5 mL(相當于貝母素甲對照品 935μg、貝母素乙對照品445μg)，再按2.2項下供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定。結果見表1。

表1 貝母素甲與貝母素乙加樣回收試驗結果(n=6)

2.5 樣品含量測定

根據上述方法，測定了3批樣品中貝母素甲與貝母素乙的含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

試驗中，參照2005年版《中國藥典(一部)》中浙貝母含量測定項的流動相乙腈－水－二乙胺(70∶30∶0.3)[3]進行試驗，貝母素甲和貝母素乙兩峰分離完全，供試品溶液中兩峰均分離、無干擾，故選擇此流動相。

貝母素甲與貝母素乙均為生物堿類物質，根據生物堿在堿性條件下易溶于有機溶劑的特點，在樣品提取時選用氨水將樣品調至堿性，使生物堿游離出來，再用氯仿提取，制得供試品溶液。

蒸發光散射檢測器是一種新型質量型檢測器，對于不易揮發的化合物，有無紫外吸收均可檢測。該檢測器的這一特點完全適用于貝母類生物堿的檢測，而且還克服了其他檢測方法靈敏度低、操作煩瑣、干擾因素多等缺點。2005年版《中國藥典(一部)》中沒有規定平貝母的含量測定項[3]。本試驗將高效液相色譜－蒸發光散射檢測器法應用于蛇膽川貝液中平貝母所含貝母素甲與貝母素乙的測定，為產品質量控制提供了試驗依據，也為平貝母及含有平貝母的制劑中貝母素甲與貝母素乙的同時測定與研究提供了一種便捷、有效的手段。

[1]王振月，侯素云，王志林，等.不同產地不同物候期平貝母的貝母素乙含量測定研究[J].中藥材，2006，29(11):1135.

[2]李 萍，曾令杰，李松林.無紫外吸收的貝母總生物堿定量分析方法研究[J].中國藥學雜志，2002，37(8):614.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:人民衛生出版社，2005:65，205.