加壓提取9味中藥飲片中的皂苷類物質及其含量測定

趙文英，岳 莉，黃巧燕，戎晉華，宋筱菡

(青島科技大學化工學院，山東 青島 266042)

皂苷類物質廣泛分布于自然界雙子葉植物中，具有抗衰老、增強機體免疫力、抗菌、抗病毒、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等生物活性和藥理作用[1]。由于中藥材成分復雜，活性成分含量相對較低，因而在對含皂苷類物質的中藥材的開發(fā)利用過程中，如何利用現(xiàn)代提取技術提高皂苷類物質的提取得率具有十分重要的現(xiàn)實意義。

加壓提取法[2，3]是在密閉容器內(nèi)，加大壓力使提取溶劑在高于溶劑沸點的溫度下仍保持液體狀態(tài)，再通過升高提取溫度[4]有效地改善溶劑的溶解性和選擇性，從而提高有效成分的提取得率，具有效率高、雜質含量少、有效成分純度高等優(yōu)點，已廣泛應用于天然藥材與中藥材、藥物分析、植物化學、生物[5]等領域。

作者在此分別采用加壓提取法和加熱回流提取法對中藥飲片中的皂苷類物質進行提取，并通過高效液相色譜測定其含量，以期為加壓提取法用于中藥材有效成分的提取提供可靠的實驗依據(jù)。

1 實驗

1.1 試藥、試劑與儀器

地榆、甘草、柴胡、白頭翁、黃芪、麥冬、穿山龍、黃精、知母，安徽海鑫中藥飲片有限公司。

薯蕷皂苷元對照品(純度≥98%)、齊墩果酸對照品(純度≥98%)，四川維克奇生物科技有限公司；95%食用乙醇；色譜純甲醇；超純水；其它試劑均為分析純。

KQ-100型超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司；RE-52型旋轉蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；循環(huán)水多用真空泵，河南鞏義英峪予華儀器廠；GZX-9070 MBE型不銹鋼數(shù)顯電熱鼓風干燥箱，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；U3000型高效液相色譜儀，戴安公司；加壓提取器，自制。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗[5，6]

色譜柱為Hypersil ODS C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為甲醇-水(12∶88，體積比)；檢測波長210 nm；柱溫25 ℃；進樣量20 μL；理論塔板數(shù)按薯蕷皂苷元與齊墩果酸峰計不低于5000。

1.2.2 對照品溶液的制備

精密稱取105 ℃干燥至恒重的薯蕷皂苷元對照品、齊墩果酸對照品各20.0 mg，置50 mL容量瓶中，分別加入甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，得0.4 μg·μL-1的薯蕷皂苷元對照品溶液和齊墩果酸對照品溶液，備用。

1.2.3 供試品溶液的制備

1.2.3.1 加壓提取物

將9味中藥飲片干燥粉碎成粗粉，各精密稱定40.0 g，分別置加壓提取器中，加400 mL蒸餾水，于110 ℃、0.3 MPa下密封加壓浸提30 min，提取液濃縮至135 mL，醇沉濃度至60%，靜置過夜。取上清液，揮干溶劑得浸膏。精密稱取0.1 g各樣品浸膏分別置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，得加壓提取物，待測。

1.2.3.2 加熱回流提取物

將9味中藥飲片干燥粉碎成粗粉，各精密稱定40.0 g，分別加熱回流提取3次(第1次提取2 h，第2次與第3次各提取1 h)，每次溶劑用量200 mL。合并提取液，濃縮后，醇沉濃度至60%，靜置過夜。取上清液，揮干溶劑得浸膏。精密稱取0.1 g各樣品浸膏分別置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，得加熱回流提取物，待測。

2 結果與討論

2.1 標準曲線的繪制

2.1.1 薯蕷皂苷元標準曲線

精密吸取薯蕷皂苷元對照品溶液1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、7.0 mL、9.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇定容。按色譜條件進樣，得標準曲線回歸方程為A=2.3916c-9.1413，R=0.9995，線性范圍為0.80～7.20 μg。

2.1.2 齊墩果酸標準曲線

精密吸取齊墩果酸對照品溶液2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇定容。按色譜條件進樣，得標準曲線回歸方程為A=1.2721c+5.3279，R=0.9996，線性范圍為1.60～8.00 μg。

2.2 精密度

分別取薯蕷皂苷元對照品溶液與齊墩果酸對照品溶液，連續(xù)進樣測定6次，每次進樣20 μL，測定含量，RSD分別為1.09%、1.53%。表明該方法精密度良好。

2.3 重復性

稱取同一批地榆供試品6份，按照樣品處理方法處理，平行測定含量，RSD為0.97%。表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.4 穩(wěn)定性

取地榆樣品溶液10 mL 連續(xù)3 d進樣6次，RSD為1.8%。表明樣品在3 d內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 加樣回收率

采用標準加入法進行回收率實驗，測得地榆、甘草、柴胡、白頭翁、黃芪、麥冬、穿山龍、黃精、知母的加樣回收率分別為99.12%、99.23%、99.54%、99.02%、98.87%、98.69%、99.05%、98.35%、99.34%，RSD分別為0.45%、0.97%、1.02%、0.54%、1.12%、0.73%、0.59%、0.82%、0.92%。表明方法的回收率良好。

2.6 樣品溶液的測定

精密吸取供試品溶液各20 μL，分別進樣，甾體類皂苷樣品按2.1.1方法測定樣品溶液含量(穿山龍樣品HPLC圖譜見圖1，其余略)，三萜類皂苷樣品按2.1.2方法測定樣品溶液含量(地榆樣品HPLC圖譜見圖2，其余略)，據(jù)標準曲線計算皂苷含量。

圖1 薯蕷皂苷元對照品(a)與加壓提取穿山龍樣品(b)的 HPLC圖譜

圖2 齊墩果酸對照品(a)與加壓提取地榆樣品(b)的 HPLC圖譜

9味中藥飲片中皂苷類物質的浸膏量及含量比較結果見表1。

表1 9味中藥飲片中皂苷類物質的浸膏量及含量比較(n=3)

由表1可以看出，加熱回流提取的皂苷類物質浸膏量均比加壓提取的高。這可能是因為，加熱回流提取時間較長，藥材長時間浸泡在溶劑中，皂苷類物質不斷浸出，同時溶于溶劑的其它成分也浸出，其浸膏量明顯增多；而加壓提取是在高于溶劑沸點條件下提取，溶劑的溶解性和選擇性提高，有利于溶劑快速進入藥材細胞中溶解有效成分，不斷與外界溶劑進行溶質交換，有效成分快速浸出，提取效率提高，浸膏量相對較少。雖然加熱回流提取的皂苷類物質浸膏量高，但提取時間長、雜質含量較高，不利于進一步純化；而加壓提取的皂苷類物質浸膏量相對較少、提取效率較高，為快速準確地測定有效成分的含量奠定了基礎。

由表1還可以看出，與加熱回流提取法相比，加壓提取的皂苷類物質含量除穿山龍外均有所提高。這可能是因為，較高的壓力使溶劑可以在高于沸點的條件下進行提取，增大了溶劑的極性，介電常數(shù)增大，使溶劑的溶解性和選擇性提高，溶劑的流動性增強，溶劑溶解有效成分的能力提高，進而使有效成分選擇性快速溶出。同時，提取溫度升高，分子的傳質速度加快，藥材表面的浸潤過程及溶質的擴散過程加快，有效成分的提取效率提高。

3 結論

分別采用加壓提取法與加熱回流提取法對9味中藥飲片中的皂苷類物質進行提取。結果表明，與加熱回流提取法相比，加壓提取中藥飲片中的皂苷類物質浸膏量少、有效成分含量高、提取物純度高、雜質含量少、提取效率高、提取物后處理簡單，是一種理想的提取中藥材有效成分的新型技術。

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[3] Barriada-Pereira M,González-Castro M J,Muniategui-Lorenzo S，et al.Comparison of pressurized liquid extraction and microwave assisted extraction for the determination of organochlorine pesticides in vegetables[J].Talanta，2007，71(3):1345-1351.

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[5] 中國藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：化學工業(yè)出版社，2000:188．

[6] 鄒盛勤，陳武.地榆中烏索酸和齊墩果酸含量的高效液相色譜測定[J].時珍國醫(yī)國藥，2006，17(8)：1373-1374.