原料藥丹酚酸B粉末及其水溶液穩(wěn)定性研究*

李珊珊，趙紫偉，何 蕊，侯安國(guó)

(云南中醫(yī)學(xué)院，云南昆明 650500)

丹參為常用中藥材，最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有活血化瘀，安神去煩，涼血消痛的功效。現(xiàn)代藥理對(duì)其化學(xué)成分做了大量研究，其中水溶性成分之一丹酚酸B，據(jù)報(bào)道具有較強(qiáng)的抗氧化活性和清除自由基的作用，具有潛在的藥用開(kāi)發(fā)價(jià)值［1－2］;另報(bào)道表示丹酚酸B在水溶液中不穩(wěn)定，易受溫度、pH的影響。為了對(duì)其進(jìn)一步了解，本文就以自制純度為91.33%的丹酚酸B粉末為原料藥，考察溫度、光照、濕度對(duì)其穩(wěn)定性的影響及在不同溫度下丹酚酸B的降解速率常數(shù)，推導(dǎo)在常溫條件下丹酚酸B的速率常數(shù)及有效期，為丹酚酸B水溶液制劑提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)儀器和試藥

1.1 儀器

戴安U－3000高效液相色譜儀 (美國(guó)戴安公司);SHH－SDT綜合藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱 (重慶市永生實(shí)驗(yàn)儀器廠);Auw2200分析天平 (島津國(guó)際貿(mào)易有限公司);電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 (上海一恒科技有限公司)

1.2 試藥

丹酚酸B對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):11562－200302);丹酚酸B原料藥 (自制，純度 91.33%);色譜級(jí)甲醇、乙腈 (Fisher公司);水為去離子水;其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測(cè)定方法

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取丹酚酸B對(duì)照品適量，加水溶解，配制成0.12mg/mL的對(duì)照品溶液，備用。

2.1.2 色譜條件

Eclipse XPB－C18(4.6×150mm)色譜柱;流動(dòng)相:甲醇－乙腈－甲酸－水 (30∶10∶1∶59);流速:1.0ml· min－1;柱溫:30℃;檢測(cè)波長(zhǎng):286nm;理論塔板數(shù)以丹酚酸B色譜峰計(jì)大于3000。

2.1.3 線性關(guān)系考察

取上述丹酚酸B對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1μL，4μL，7μL，10μL，14μL，18μL，以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，以丹酚酸B質(zhì)量為橫坐標(biāo)，計(jì)算得回歸方程為:y=20.378x+0.0082(r=1)，其在0.12～2.16μg線性范圍內(nèi)良好。

2.1.4 精密度考察

取上述丹酚酸B對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL。結(jié)果，RSD=0.80% ，表明儀器精密度良好。

2.1.5 穩(wěn)定性考察

取上述丹酚酸B對(duì)照品溶液，于0，2，4，6，8，12h進(jìn)樣，每次10μL。結(jié)果，RSD=0.76% ，表明丹酚酸B對(duì)照品在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.1.6 加樣回收率考察

取6份已測(cè)定含量的供試品溶液2mL，分別精密加入上述丹酚酸B對(duì)照品溶液2 mL于5mL的容量瓶中，分別進(jìn)樣10μL，計(jì)算回收率。結(jié)果，實(shí)驗(yàn)平均回收率為99.78%，RSD=1.74%(n=6)。

2.2 強(qiáng)光照對(duì)原料藥丹酚酸B粉末的影響［3］

取適量供試品于稱(chēng)量瓶中，攤成≤5mm厚的薄層，置于裝有日光燈的藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱光照箱中，于照度為4500lx±500lx的條件下放置10d，于第5天和第10天取樣，平行測(cè)定3組，觀察其外觀及測(cè)定其含量變化，結(jié)果，原料藥丹酚酸B粉末在10d內(nèi)的強(qiáng)光照條件下，外觀顏色、含量基本無(wú)明顯的變化。

2.3 高溫條件對(duì)原料藥丹酚酸B粉末的影響

取適量供試品于稱(chēng)量瓶中，攤成≤5mm厚的薄層，置于藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱60℃的恒溫箱中10d，于第5天和第10天取樣，平行測(cè)定3組，觀察其外觀及測(cè)定其含量變化，結(jié)果，原料藥丹酚酸B粉末在10d內(nèi)的高溫條件下，外觀顏色、含量也基本無(wú)明顯的變化。

2.4 高濕條件對(duì)原料藥丹酚酸B粉末的影響

2.4.1 吸濕平衡時(shí)間的測(cè)定［4］

取適量供試品于稱(chēng)量瓶中，攤成≤5mm厚的薄層，精密稱(chēng)重，置于底部盛有飽和NaCl的干燥器中 (相對(duì)濕度為75%)，每隔24h稱(chēng)重1次，平行測(cè)定3組，計(jì)算不同時(shí)間的吸濕率，結(jié)果丹酚酸B粉末在48h后吸濕基本達(dá)到平衡，其吸濕率達(dá)到16.52%.

2.4.2 樣品臨界相對(duì)濕度的測(cè)定［4］

取恒重過(guò)的原料藥丹酚酸B分別置于盛有不同濃度的濃H2SO4中，于48h后取出，精密稱(chēng)定，計(jì)算常溫下樣品的水分含量。以吸濕率為縱坐標(biāo)，相對(duì)濕度為橫坐標(biāo)作臨界相對(duì)濕度曲線圖，結(jié)果見(jiàn)圖1:

圖1 丹酚酸B臨界相對(duì)吸濕曲線圖

由圖1可知，相對(duì)濕度在60%以下丹酚酸B粉末的吸濕率較小，而在60%以上吸濕率逐漸增大。因此，可確定丹酚酸B粉末臨界相對(duì)濕度為60%.

2.5 原料藥丹酚酸B水溶液降解動(dòng)力學(xué)的測(cè)定［5］

取適量原料藥丹酚酸B粉末于500mL的容量瓶中，配制成0.9969mg/mL的丹酚酸B水溶液，平均分為5組，每組3份，于適宜容器中，分別置于50℃，60℃，70℃，80℃，90℃的恒溫水浴鍋中，每隔一段時(shí)間取樣，測(cè)定其含量，作各溫度下的IgC－t圖，并分別求得Arrhenius方程、常溫下(25℃)的速率常數(shù)及有效期，結(jié)果見(jiàn)圖2及表1。

圖2 各溫度條件下丹酚酸B降解動(dòng)力學(xué)方程擬合曲線

表1 丹酚酸B水溶液在不同溫度下的回歸方程及動(dòng)力學(xué)常數(shù)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明隨著溫度升高，丹酚酸B濃度下降越快，在50℃時(shí)含量降解最慢，90℃時(shí)降解最快。丹酚酸B水溶液降解趨勢(shì)成直線分布，符合降解一級(jí)動(dòng)力學(xué)特征，原料藥丹酚酸B水溶液在室溫時(shí)速率常數(shù)為K25℃=1.132×104h－1，降解10%的時(shí)間為t0.9=38.80d。

3 小結(jié)與討論

原料藥丹酚酸B粉末10d內(nèi)在強(qiáng)光照、高溫條件下比較穩(wěn)定，外觀、含量幾乎無(wú)變化，但粉末易吸潮，且吸濕較快，因此，丹酚酸B粉末應(yīng)置于相對(duì)濕度為60%以下的環(huán)境中儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)證明，丹酚酸B水溶液降解符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，在不同溫度下降解速率不同，隨著溫度的升高，降解速率逐步升高。經(jīng)推導(dǎo)丹酚酸B的Arrenius方程為Igk=－3.4529/T+7.6408(r=0.9816)，在常溫下的降解常數(shù)為1.132×104h－1，有效期38.80d，說(shuō)明水溶液在常溫下不穩(wěn)定，水液配置的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，水溶液制劑有效期短。另者，文獻(xiàn)報(bào)道［6－7］，調(diào)節(jié)適宜的pH值、添加合理的抗氧劑可以增加水溶液的穩(wěn)定性。丹酚酸B具潛在的新藥研發(fā)價(jià)值，可以結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道的條件進(jìn)行進(jìn)一步研究，為水溶液制劑的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

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