乙型肝炎和丙型肝炎患者血清抗肝特異性抗體測定

趙明才，陳 瓊，羅光成，王 梓，王 強，陳 悅

(1.川北醫學院附屬醫院檢驗科;2.川北醫學院風濕免疫研究所，四川 南充 637000)

病毒性肝炎是由多種肝炎病毒所引起的，以肝 病變為主的全身性傳染病。其中乙型肝炎病毒(hepantitis B virus，HBV)在我國一般人群中的感染率高達60%左右，丙型肝炎病毒(hepantitis C virus，HCV)感染率為3.2%。機體的免疫系統根據病毒和細胞相互作用的不同過程與結果導致免疫保護和免疫損傷，機體將可能通過分子模擬機制或超抗原等激發免疫反應，導致T細胞過度激活或破壞，產生自身抗體，其程度可能與感染者肝功能損害和病毒復制水平有密切關系［3］。慢性病毒性肝炎患者體內常檢測出多種自身抗體，自身抗體的出現引發機體多種組織器官功能的紊亂和病理損傷，加重肝炎病毒感染患者的肝功能障礙。本文對HBV、HCV患者及健康體檢者的肝細胞膜特異性脂蛋白(liver specific lipoprotein，LSP)和去唾液酸糖蛋白受體(asialoglycoprotin receptor，ASGPR)血清水平進行檢測，觀察肝炎病毒感染患者的肝組織損傷細胞水平表現。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集了川北醫學院附屬醫院2011年1月至2011年10月期間住院患者，HBV感染患者51例，HCV感染患者55例的血清標本，35例健康體檢者為正常對照組，血清標本－80℃保存;全自動生化儀7170檢測血漿丙氨酸氨基轉移酶(alannine aminotransferase，ALT)和總膽紅素(total bilirubin，TB)水平。采用上海源越公司生產的anti-LSP和anti-ASGPR ELISA試劑盒，通過雙抗一步法進行測定。

1.2 分組情況

根據患者ALT＞40 U/mL水平將其分為ALT升高組(H)和ALT正常組(N)。

1.3 統計學分析

對結果采用 SPSS13.0統計軟件分析，使用ANOVA檢驗，Dunnett(2-sided)a與正常對照組比較，HBV與HCV組間采用獨立樣本t檢驗，采用Spearman相關性分析，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05認為有統計學意義。

2 結果

2.1 HBV感染組實驗結果

HBV患者與健康對照組實驗結果和AVONA統計分析結果見表1，通過 Dunnett(2-sided)a比較HBV(H)與健康對照組anti-LSP和anti-ASGPR比較有統計學差異，P 值分別為 0.04、0.01。通過Spearman相關性分析anti-ASGPR與ALT具有相關性(r:0.47，P:0.02)。

表1 HBV實驗組與健康對照組實驗結果

2.2 HCV感染組實驗結果

HCV患者與健康對照組實驗結果和AVONA統計分析結果見表2，通過Dunnett(2-sided)a比較HCV(H)與健康對照組anti-LSP比較有統計學差異，P值分別為0.04。通過Spearman相關性分析anti-LSP與anti-ASGPR 具有相關性(r:0.55，P:0.01)。

表2 HCV實驗組與健康對照組實驗結果

2.3 HBV與HCV組anti-LSP和anti-ASGPR表達水平比較

在ALT＞40時anti-ASGPR在HBV患者表達高于 HCV組(t:6.07，P:0.001)，ALT正常水平時HBV患者 anti-LSP表達高于 HCV組(t:3.68，P:0.001)。

3 討論

LSP是肝細胞膜上的一種大分子的膜脂蛋白與細胞內成分的混合物，含有大量肝細胞漿膜抗原。LSP能誘導并能維持抗肝細胞膜的自身免疫反應。LSP可激活中性粒細胞和庫普弗細胞，產生一系列炎性介質和細胞毒介質，如氧自由基、蛋白水解酶等，致使肝細胞的進一步損傷。LSP抗體介導的肝細胞受損傷是通過抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)。Anti－LSP的產生促使自身B細胞反應活性增高，刺激Th細胞，并對被病毒感染導致自身抗原改變的肝細胞失去耐受性。ASGPR是肝特異性膜蛋白的組分之一，在肝臟實質細胞表面特異性表達，是僅存在于肝細胞肝竇面細胞膜上的一類跨膜糖蛋白，是靶向基因最有效的受體。高效的異源低聚物的內吞受體，亦是病毒的侵入位點，其主要功能是去除去唾液酸糖蛋白和凋亡細胞、清除脂蛋白［1－2］。

HBV侵襲機體在肝細胞內復制，然后從肝細胞中逸出，并不直接引起肝細胞的損害，而是在肝細胞膜表面上形成特異性的病毒抗原。激活細胞免疫產生致敏淋巴細胞，與肝細胞膜表面上的病毒抗原LSP相結合后釋放出各種體液因子，如淋巴毒素、細胞毒因子、趨化因子、移動抑制因子、轉移因子等，在對病毒殺滅同時亦可對肝細胞造成損害，引起壞死和炎癥反應［3］。HCV通過入侵肝細胞，同時通過多種途徑損害免疫系統破壞機體的免疫耐受性，誘發產生自身免疫反應從而加重肝損傷［4］。丙型肝炎患者血清中存在多種自身抗體，HCV患者自身抗體的出現不僅與HCV感染有關，而且與HCV感染的嚴重程度、病程長短有關。

Yang等［5］研究發現纖連蛋白和ASGPR均介導HBsAg結合到肝細胞表面，纖連蛋白作為ASGPR的天然配體，纖連蛋白與ASGPR是HBV包裹蛋白中的組成部分。HBV通過pre-S1與ASGPR連接進入細胞，在ASGPR介導的細胞毒性和降解作用下，HBV的DNA編碼到宿主的基因組中，導致病毒血癥的發生和肝臟炎癥的發生［6］。在門靜脈周圍肝細胞壞死時在外周血能檢測到anti-LSP，急慢性乙肝感染時會有anti-LSP的表達，anti-LSP水平可反應肝細胞壞死的程度并與疾病輕重相關。ASGPR是吸引致敏肝浸潤淋巴細胞可能性最大的靶抗原，ASGPR作為肝炎癥疾病時體液免疫和細胞免疫反應的指標，定量測定anti-ASGPR有助于監測疾病活動性［7］。肝炎病毒感染患者的Anti－ASGPR的存在證實了其與疾病慢性化的高發病率有關［8］。

本實驗結果中HBV和HCV患者anti-LSP和anti-ASGPR水平較健康對照組增高，ALT水平升高時抗肝特異性抗體表達明顯增高，表明LSP、ASGPR可反映肝細胞損傷，且與疾病嚴重程度成正相關，并通過免疫反應參與HBV、HCV對肝細胞損傷。通過對anti-LSP與anti-ASGRP測定能夠對肝細胞損傷程度進行監測，可幫助了解肝臟功能代償情況及機體的免疫表現，為臨床診療與監測提供依據。肝炎病毒感染者中有一部分伴發自身免疫性肝炎，對抗肝特異性抗體的檢測有助于臨床的鑒別診斷，對治療和預后具有重要的幫助。

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