硫磺多菌靈和惡霉靈不同比例混配對蓮藕腐敗病菌的室內毒力測定

王獻慧 ，梁志懷 ，魏 林 ，陳玉榮 ，張 屹

（1.中南大學研究生院隆平分院，湖南 長沙 410125；2.湖南省植物保護研究所，湖南 長沙 410125；3.湖南省西瓜甜瓜研究所，湖南 長沙 410125；4.園藝作物病蟲害治理湖南省重點實驗室，湖南 長沙 410125）

蓮藕是集果、蔬、藥為一體的優質蔬菜，具有很高的營養價值、藥用價值和經濟價值[1]。蓮藕腐敗病是蓮藕生產上的常見病害，主要危害地下莖；感病時，地上部葉片、葉柄、花蕾也會出現相關癥狀，通常會減產20%，嚴重的可達60%～80%，甚至絕收，給蓮藕生產造成較大的損失[2]。由于藕農常習慣于周年和連年的重茬種植，該病的發生呈逐年加重趨勢。目前，蓮藕腐敗病的綜合防治措施有輪作、選用抗病品種、加強田間管理、藥劑防治等。但在市場經濟條件下，輪作難以實施，抗病品種的選育和推廣無配套技術，而田間管理措施對防病效果又不明顯[3]。因此，藥劑防治仍然是防治蓮藕腐敗病的主要手段，但常年使用同種農藥，其作用位點單一，容易使病原菌產生抗藥性[4]。為了延緩或防止蓮藕腐敗病菌對藥劑產生抗藥性，選擇了硫磺多菌靈和惡霉靈進行復配使用，研究其不同的復配比例對蓮藕腐敗病菌的防治效果，以期為生產中蓮藕腐敗病的防治提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試菌株：蓮藕腐敗病菌（F.oxysporum）菌株T1和T2，均從蓮藕腐敗病發病株上分離、純化獲得，培養于PDA固體培養基上待用。

供試藥劑：50%硫磺多菌靈WP和99%惡霉靈WP，均由威海韓孚生化藥業有限公司生產。

1.2 試驗方法

1.2.1 供試病菌培養 將分離純化的病原菌接種于直徑為8.5 cm的PDA固體培養基上，置于28℃恒溫培養箱中培養（約6天），待菌落快長滿培養皿時，用無菌打孔器制備成直徑8 mm的菌餅備用。

1.2.2 含不同復配比例藥劑平板的制備 依據預試驗各藥劑最低有效抑制濃度設置藥劑濃度梯度。用無菌水將各藥劑稀釋成10 mg/mL的母液，再根據試驗設計稀釋成各種所需濃度。硫磺多菌靈的濃度梯度為 1、2、4、8、16 μg/mL，惡霉靈的濃度梯度為 15、30、60、120、240 μg/mL?；旌纤巹┌戳蚧嵌嗑`與惡霉靈設置 1∶50、1∶25、1.5∶25、2∶25、3∶25 五個混配比例，其混合藥劑的濃度梯度設為4、8、16、32、64 μg/mL，每個濃度處理設 3 個重復，混合藥劑用母液配制，其中混劑的濃度=（混劑中硫磺多菌靈的質量+混劑中惡霉靈的質量）/混劑的總體積；以等量無菌水為對照。將各種藥劑按比例移取至盛有50 mL、溫度約為40～50℃的無菌PDA培養基的三角瓶中，充分混勻后倒入培養皿中，制備成試驗所需PDA平板。

1.2.3 兩種殺菌劑及其不同混配比例對蓮藕腐敗病菌的室內毒力測定 在平板中央接種一塊菌餅，置于28℃條件下恒溫培養箱中培養6 d后，用游標卡尺十字交叉法測定各培養皿內菌落的直徑。按公式：I=（D0-Dt）/D0×100%（I為菌絲生長抑制率，D0為對照菌落增長直徑，Dt為處理菌落增長直徑），求抑菌率。其中D=D1-D2（D表示菌落增長直徑，D1表示菌落直徑，D2表示菌餅直徑）。以藥劑濃度的對數為自變量x，以抑制率的幾率值為因變量y，運用Excel軟件進行統計分析，求出供試藥劑對蓮藕腐敗病菌的毒力回歸方程Y＝a+bX及相關系數（r）值，并由方程計算各供試藥劑的抑制中濃度（EC50），并根據Wadley法求出各混配比例的增效系數（SR）。增效系數（SR）＝混劑的 EC（th）50÷混劑的 EC50。混劑的理論 EC（th）50＝（a+b）÷[（a÷A的EC50）＋（b÷B的EC50）]，式中A、B分別指硫磺多菌靈與惡霉靈這兩種藥劑，a、b分別為硫磺多菌靈和惡霉靈的混配比的各自分量。根據SR評價混劑的聯合作用：當SR＞1.5時是增效作用；當0.5≤SR≤1.5時是相加作用；當SR＜0.5時為拮抗作用。根據增效系數（SR），再結合生產成本確定最佳配比。

2 結果和分析

2.1 各處理對蓮藕腐敗病菌菌絲生長的影響

由表1可知，硫磺多菌靈與惡霉靈單劑及5種不同混配比例在設定的濃度范圍之內，對病原菌絲的生長均有一定的抑制作用。在設定的濃度范圍之內，抑制效果隨著藥劑濃度的增加而增加，但是各處理對菌絲生長的抑制效果存在一定的差異。從菌絲凈生長量和抑制率可以看出，硫磺多菌靈單劑的抑制效果最好，硫磺多菌靈與惡霉靈混配比例為2∶25和3∶25時，抑制效果次之。50%硫磺多菌靈的試驗濃度為16 μg/mL時，T1和T2兩個菌株的菌絲凈生長量分別為0.04 cm和0.08 cm，其抑制率分別是99.5%和99.0%。硫磺多菌靈與惡霉靈的混配比例為 2∶25，試驗濃度為 16 μg/mL 時，T1和T2兩個菌株的菌絲凈生長量分別為0.6 cm和0.4 cm，其抑制率分別是92.2%和94.8%。硫磺多菌靈與惡霉靈的混配比例為3∶25，試驗濃度為16 μg/mL時，T1和T2兩個菌株的菌絲凈生長量分別為0.2 cm和0.6cm，其抑制率分別是97.4%和92.2%。試驗結果還表明，同一處理對2個蓮藕腐敗病菌的抑制效果較為一致。

2.2 各處理對蓮藕腐敗病菌的室內毒力比較

各藥劑處理對蓮藕腐敗病菌的毒力回歸方程、抑制中濃度（EC50）、相關系數（r）及增效系數（SR）見表2。從EC50值可知，各處理對蓮藕腐敗病菌均有一定的毒力。其中50%硫磺多菌靈單劑對蓮藕腐敗病菌的抑制效果最好，對兩個菌株的EC50值分別為1.49 μg/mL和1.58 μg/mL；其次混配比例為2∶25的處理對兩個菌株的EC50值分別為4.62 μg/mL和 4.42 μg/mL，混配比例為 3∶25的處理對兩個菌株的 EC50值分別為 1.80 μg/mL 和 5.89 μg/mL。毒力最低的是99%惡霉靈單劑，其對兩個菌株的EC50值分別為 115.60 μg/mL 和 100.20 μg/mL。比較各混劑的增效系數可知，5個混配比例對蓮藕腐敗病菌的抑制效果均表現為增效作用，其中硫磺多菌靈與惡霉靈的混配比例為2∶25和3∶25時，增效作用最明顯。

表1 各處理對蓮藕腐敗病菌菌絲生長的抑制效果

3 小結與討論

通過菌絲體生長速率測定，比較了硫磺多菌靈與惡霉靈以及5種不同比例混劑對蓮藕腐敗病菌的室內毒力。結果表明，硫磺多菌靈與惡霉靈的5種混配比例對蓮藕腐敗病菌的抑制效果均表現為增效作用，即均能提高對腐敗病菌的室內毒力。其中硫磺多菌靈與惡霉靈的混配比例為2∶25和3∶25的處理，增效作用最明顯，抑菌效果最好。此外，這兩種藥劑混配還能有效降低成本，擴大藥劑的防治譜，而且還有利于阻止或延緩蓮藕腐敗病菌抗藥性的產生[5-6]。這可能是這兩種殺菌劑的作用機制不同所致。比較5種混劑的抑制中濃度及增效系數，表明2∶25和3∶25的硫磺多菌靈與惡霉靈混配比例為最佳配比。

表2 各處理對蓮藕腐敗病菌的室內毒力比較

試驗結果還表明，不同發病組織上分離獲得的蓮藕腐敗病菌株對同一種混配供試藥劑敏感性相似，這為同一施用藥劑（單劑或混配）應用于不同種植區防治蓮藕腐敗病提供了理論依據。該試驗只進行了室內毒力測定，供試的兩種藥劑混配對蓮藕腐敗病的田間防治效果還有待于進一步田間應用試驗。

[1]羅海莉，李 潔，嚴守雷，等.蓮藕貯藏期主要致病真菌分離鑒定及其致病相關酶酶學特征研究[J].長江蔬菜，2011，10（16）：68-72.

[2]梁志懷，魏 林，成燕清，等.不同殺菌劑對蓮藕腐敗病菌的室內毒力測定及田間防治效果[J].長江蔬菜，2011，10（16）：60-63.

[3]丁愛云，宋衛國，時呈奎，等.蓮藕腐敗病的發生和藥劑毒力測定[J].農藥，2002，41（6）：32-33.

[4]杜宜新，楊秀娟，阮宏椿，等.幾種殺菌劑及其混配對香蕉枯萎病菌的毒力測定[J].農藥，2008，47（10）：764-766.

[5]成家壯.植物病原真菌的抗藥性與殺菌劑的混配[J].廣州化工，2008，36（4）：1-5.

[6]陳 軍，高國平，張 偉，等.6種殺菌劑及其混配對香栓孔菌的室內毒力測定[J].西北農學院學報，2012，27（1）：129-131.