VEGF及TNF-α在大腸癌中的表達及臨床意義

李 娜 唐 艷 劉翠蘭 龍 達

（1 邵陽市中心醫院檢驗科，湖南 邵陽 422000；2 邵陽市中心醫院內二科，湖南 邵陽 422000）

大腸癌（colorectal carcinoma，CRC）是常見的消化道惡性腫瘤之一。目前認為其發病機制主要是環境因素與遺傳因素綜合作用的結果。而腫瘤的侵襲、轉移是一個復雜的多步驟過程，目前研究認為血管內皮生長因子、腫瘤壞死因子α等均與大腸癌的發生、發展具有密切的關系[1]。本研究旨在通過免疫組化方法檢測VEGF及TNF-α在早期及進展期大腸癌中的蛋白表達水平及相關性。從而研究其在大腸癌發病過程中的意義，為臨床治療及預后預測提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2008年1月至2010年12月在本院住院治療并經腸鏡檢查及術后病理學檢查證實的大腸癌患者80例。并選取同時期經腸鏡及病理檢查證實結直腸正常的病例30例作為對照組。所有活檢標本置于10%甲醛中固定，石蠟包埋后組織切片，厚度4μm左右用于免疫組化染色。兩組病例一般情況詳見表1。

1.2 免疫組化方法

DAB顯色試劑盒、鼠抗人VEGF多克隆抗體及羊抗人TNF-α均購自北京中山生物技術有限公司。采用SP法進行免疫組化染色。

免疫組化染色陽性結果判斷標準：①陽性細胞率：主要表達于細胞核和（或）細胞漿內呈棕黃色顆粒狀染色為標準，且著色明顯高于背景或背景不著色而細胞著色為陽性細胞。使用裝有目鏡網格測微尺的光學顯微鏡，在200倍視野下，隨機選擇10個視野，計數500～1000個細胞的陽性細胞，計算陽性細胞百分數為陽性細胞率。②表達強度：陰性（-）：細胞核/細胞漿內未見顆粒狀染色；弱陽性（+）：細胞核/細胞漿內出現淺棕黃色顆粒，陽性細胞數少于25%；陽性（++）：細胞核/細胞漿內出現棕黃色顆粒，陽性細胞數25%～50%；強陽性（+++）：細胞核/細胞漿內出現深棕黃色顆粒，陽性細胞數＞50%。實驗中以PBS緩沖液代替一抗作為陰性空白對照。

表1 患者一般情況及腫瘤類型及分布情況

1.3 統計學方法

所有數據采用SPSS13.0進行統計學分析，計數資料采用χ2分析，等級資料采用秩和檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析，P＜0.05為具有統計學意義。

2 結 果

2.1 VEGF在大腸癌的表達情況

VEGF主要表達在細胞漿中，少量表達在細胞核內。陽性細胞主要定位于腸上皮細胞和腸腺之間的間質細胞。進展期患者直腸黏膜中可見大量VEGF的表達，早期患者直腸黏膜可見部分VEGF表達，而對照組直腸黏膜中僅有少量或無VEGF表達。VEGF在早期大腸癌中的表達陽性率為（14/32，43.75%）；在進展期大腸癌中表達陽性率為（41/48，85.42%）；在對照組中表達陽性率為（5/30，16.67%）。進展期陽性率明顯高于早期及對照組（P＜0.01），而早期大腸癌表達也高于對照組（P＜0.05）。

進展期大腸癌VEGF的表達強度高于早期大腸癌組及對照組（P＜0.01），而早期大腸癌表達強度亦高于對照組（P＜0.05），詳見表2。

表2 VEGF在早期及進展期大腸癌及對照組中的表達強度情況

2.2 TNF-α在大腸癌的表達情況

TNF-α主要表達在細胞漿中，少量表達在細胞核內。陽性細胞主要定位于腸上皮細胞和單核-巨噬細胞。進展期及早期患者直腸黏膜中可見大量TNF-α的表達，而對照組直腸黏膜中僅有少量或無TNF-α表達。TNF-α在早期大腸癌中的表達陽性率為（24/32，75%）；在進展期大腸癌中表達陽性率為（40/48，83.33%）；在對照組中表達陽性率為（7/30，23.33%）。進展期及早期陽性率明顯高于對照組（P＜0.01），而早期大腸癌及進展期腸癌間無統計學差異（P＞0.05）。

進展期大腸癌TNF-α的表達強度高于對照組（P＜0.01），而早期大腸癌表達強度亦高于對照組（P＜0.01），但進展期及早期大腸癌間未見統計學差異（P＞0.05），詳見表3。

表3 TNF-α在早期及進展期大腸癌及對照組中的表達強度情況

2.3 VEGF與TNF-α相關性

VEGF與TNF-α呈正相關，Spearman相關系數為0.926，P＜0.01。

3 討 論

由于人們生活水平的提高及飲食習慣的改變，大腸癌的發病率近年來逐漸升高，已經成為發病率最高的惡性腫瘤之一，且大腸癌易發生轉移及擴散，術后復發率一直較高[2-5]。因此近年來研究大腸癌的侵襲轉移機制，試圖降低術后復發率一直是一個熱點。已有研究證明VEGF與TNF-α與腫瘤血管的形成密切相關，因此在腫瘤的侵襲轉移中也起著重要的作用[6-8]，但目前國內有關研究VEGF與TNF-α在大腸癌表達的較少。

VEGF作為一種已知的強促血管形成因子，在多種腫瘤中作為代謝及轉移的標志物。本研究中，VEGF在早期大腸癌及進展期腸癌中均有表達，而在對照組中，呈低表達。且在進展期大腸癌中強烈表達，表達陽性率高達85.42%，且在腸黏膜中多呈強陽性表達，這提示隨著腫瘤惡性程度的增加，VEGF的表達量也逐漸增加。說明VEGF的表達量可以作為腫瘤惡性程度的標志物。同時目前研究認為由于惡性腫瘤在生長過程中，組織增長過快必會造成局部組織缺氧，從而誘導VEGF的表達，從而VEGF的表達也可間接反映腫瘤組織內的缺氧狀態，用于判斷腫瘤對放化療藥物的敏感性[9]。多種腫瘤在放化療后均可表現VEGF的表達水平上調，如果拮抗VEGF的表達，可以增強放化療療效。在今后的研究中，我們希望能夠通過拮抗VEGF的表達，觀察對患者治療的影響。

而TNF-α是一種重要的抑癌基因，在多種腫瘤中廣泛存在，本研究發現在大腸癌患者中，TNF-α表達明顯上升高于對照組，但在早期患者及進展期患者中未見統計學差異。研究結果提示TNF-α在腫瘤的發生發展中，起著重要作用，但我們仍需擴大樣本進一步研究，在早期大腸癌及進展期大腸癌中TNF-α表達的差異。本研究中TNF-α及VEGF表達呈現正相關，有研究報道TNF-α可能通過FAK及NF-κB等作用于VEGF介導的信號通路，調節腫瘤的發生發展，侵襲轉移等生物行為，我們通過調節TNF-α，是否也可以起到抑制腫瘤生長、侵襲的作用也是我們下一步研究的重點。

總之，VEGF及TNF-α在大腸癌黏膜中表達增強，這兩個因子可以作為腫瘤惡性程度的標志物，可能可以作為將來大腸癌新治療方式的靶點。

[1]Hoeben A,Aanduyt B,Highley MS,et al.Vascular endothelial growth factor and angiogenesis[J].Pharmacol Rev,2004,56(4):549-580.

[2]錢圖南.腫瘤放射治療學[M].3版.北京:中國協和醫科大學出版社,2002:772-775.

[3]Sasson AR,Mulcahy MF,Paty PB.Uptate in the management of Rectal[J].ASCO EDCR Cational Book,2006.

[4]Temple WJ,Saettler EB.Locally recurrent rectal cancer:role of composite resection of extensive pelvic tumors with strategies for minimizing risk of excurrence[J].J Surg Oncol,2000,73(1):47-58.

[5]莫善兢,劉瑛,許立功,等.現代腫瘤學[M].2版.上海:上海醫科大學出版社,2000:794-798.

[6]谷依學,李漢賢,王漢群,等.TNF-α及血管內皮生長因子的表達與胃癌生物學行為的關系[J].南華大學學報,2005,33(2):75-79.

[7]劉智紅,康楠.血管內皮生長因子與消化道腫瘤[J].包頭醫學院學報,2004,20(1):145-146.

[8]王倩,陳曉理,劉力華.VEGF及其受體家族與白血病[J].中國廠礦醫學,2005,18(1):96-97.

[9]Marthinsen AB,Wanderas AD,Lundgren S,et al.Effects of growth factors on growth and radiation sensitivity of the human breast cancer cell line T-47D[J].Oncol Rep,2002,9(2):397-403.