不同填飼量對北京鴨生長性能、血清生化指標和肝臟組織學的影響

聞治國 侯水生謝 明 黃 葦 喻俊英

(中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所，動物營養學國家重點實驗室，北京 100193)

在填鴨生產中，為了達到快速沉積脂肪的目的，鴨子在短期內被人工強制填飼大量以玉米為主的高能飼料。其主要原因是碳水化合物進入動物機體后，通過磷酸戊糖和糖酵解等途徑轉化為甘油三酯(triglycerides，TG)，最終形成脂肪組織內的脂肪沉積［1］。北京鴨在填飼大量富含碳水化合物飼糧的刺激下，胰臟發育加速，胰淀粉酶活性也增加，但填飼后胰淀粉酶的活性增加與填飼量的增加不成比例，有部分淀粉未能充分消化而排出體外［2］。同時，玉米細胞壁中大量抗營養因子的存在也影響了蛋白質和淀粉等營養物質的消化和吸收［3］，而生產中過量或過少填飼必然會造成飼料消化率低、脂肪沉積差和飼養周期長等問題。因此，本試驗通過研究最適填飼量、血清脂肪代謝相關指標與填飼量的關系以及填飼鴨肝臟組織學特點，來探究不同填飼量對北京鴨生長性能、血清生化指標以及肝臟組織學的影響，以期為填鴨生產提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及飼糧

試驗選用96只35日齡健康、體重相近的雄性北京鴨(中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所選育)，1～34日齡飼喂基礎飼糧，試驗期填飼試驗飼糧(玉米-豆粕型飼糧)，試驗飼糧組成及營養水平見表1，試鴨自由飲水，填飼期為7 d。

表1 試驗飼糧組成及營養水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of the experimental diet(air-dry basis) %

1.2 試驗設計及飼養管理

試驗設8個組(對照組、Ⅰ～Ⅶ組)，每組6個重復，每個重復2只鴨。對照組試鴨自由采食，平均日采食量為(259.55±18.59)g;整個試驗期填飼組填飼量不同，第1天和第2天為預填飼期，第3天到第7天為正式填飼期，每只北京鴨每天填飼量見表2。飼糧與水按1∶1.2混合均勻，每天分4次(06:00、12:00、18:00和 23:00)用機械填飼。

試鴨采用網上平養，每個重復單圈飼養，自由飲水。填飼期鴨舍溫度為22～25℃，濕度為60% ～72%，采用人工補光制度，24 h光照，其他按常規飼養管理進行。

1.3 測定指標及方法

1.3.1 生長性能

試驗開始和結束時，以重復為單位記錄空腹鴨體重，計算各組平均日增重和料重比。

1.3.2 血清生化指標

當試驗結束時，對所有試鴨整夜禁食，期間自由飲水。第2天早上對所有試鴨翅靜脈采血10 mL，放置于經抗凝處理的采血管中，4℃3 000 r/min離心10 min制備血漿，-20℃冷凍保存備用。然后用半自動生化分析儀(TECHBICON RA-1000型)測定血清生化指標:葡萄糖(glucose，Glu)用 Glu Assay Kit的 GOD-PAP酶學分析法測定;TG用TG Kit的酶比色法(GPO-PAP法)測定;總膽固醇(cholesterol，CHO)用 CHO Kit的酶比色法(COD-PAP法)測定;谷丙轉氨酶(glutamate pyruvate transaminase，GPT)用 GPT Kit的速率法測定;谷草轉氨酶(glutamate oxaloacetate transaminase，GOT)用 GOT Kit的速率法測定;γ -谷氨酰基轉移酶(γ-glutamyltransferase，GGT)用GGT Kit的連續監測法測定。試劑盒由北京中生北控生物科技股份有限公司提供。

1.3.3 肝臟組織學檢測

從各組中隨機選取2只北京鴨，取肝后迅速于肝最大葉距邊緣8 mm處切取小塊肝組織，于10%的福爾馬林固定24 h，經浸洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色等步驟制作組織切片，切片厚度為6 μm，顯微鏡下觀察組織學特點并拍照。

1.4 數據處理

試驗數據采用SAS 8.0中One-way ANOVA進行統計分析，各組間平均值的比較采用Duncan氏多重比較進行差異顯著性檢驗，結果以平均值±標準差(mean±SD)表示，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標準。

采用直線折線模型對填鴨的最佳填飼量進行估算，直線折線模型［4］如下:

其中，Y為生長性能(平均日增重、料重比)，X為試驗飼糧中對應的填飼量(g/d)，R為最佳填飼量(g/d)，L為當達到最佳填飼量時對動物的生長效應，U為模型的斜率。

表2 每只北京鴨每天填飼量Table 2 Daily force-feeding amount for each Pekin duck g

2 結果與分析

2.1 不同填飼量對北京鴨生長性能的影響

由表 3可知，各組始重在(2 522.58±29.21)g和(2 559.25 ±50.43)g 之間，差異不顯著(P＞0.05)。試驗結束時，經差減法得出對照組自由采食量為(259.55±18.59)g/d。除 300 g/d填飼組外，其他填飼組北京鴨末重和平均日增重顯著高于對照組(P＜0.05)。末重和平均日增重隨填飼量水平的提高而逐漸提高，當填飼量為420 g/d時，平均日增重比對照組提高了47.86%，填飼量繼續增大，末重和平均日增重基本保持穩定。填飼組料重比與對照組相比差異不顯著(P＞0.05)。

以平均日增重為評定指標，建立直線折線模型估計填鴨的最佳填飼量，結果如下:

以上模型可以看出，填鴨的最佳填飼量為414.2 g/d，當填飼量大于 414.2 g/d 時，填鴨的平均日增重基本趨于穩定。

表3 不同填飼量對北京鴨生長性能的影響Table 3 Effects of different force-feeding amounts on growth performance of Pekin ducks

2.2 不同填飼量對北京鴨血清生化指標的影響

2.2.1 對血清Glu、TG和CHO 的影響

由表4可知，不同填飼量對北京鴨血清中Glu濃度的影響各組之間差異不顯著(P＞0.05)，這說明北京鴨在不同填飼量下，血清中Glu濃度經過隔夜禁食后能夠恢復到自由采食的狀態。不同填飼量顯著提高血清TG和CHO的濃度(P＜0.05)，隨填飼水平的升高，血清中TG和CHO濃度逐漸升高。在填飼量為 300、330、360、390、420 g/d時，血清中TG濃度沒有顯著差異(P＞0.05)，在填飼量為450 g/d時，TG濃度達到最大，顯著高于其他各組(P＜0.05)。當填飼量為480 g/d時，血清CHO濃度達到最大，顯著高于其他各組(P＜0.05)，且與對照組相比，提高了77.4%。

表4 不同填飼量對北京鴨血清Glu、TG和CHO濃度的影響Table 4 Effects of different force-feeding amounts on serum Glu，TG and CHO concentration of Pekin ducks mmol/L

2.2.2 對血清GPT、GOT和GGT的影響

由表5可知，血清GPT活性隨填飼量的升高而逐漸升高，當填飼量大于360 g/d時，GPT活性顯著高于對照組(P＜0.05)。而填飼對血清GOT和GGT活性影響不大，除450 g/d填飼組血清GGT活性顯著高于對照組(P＜0.05)外，其他填飼組與對照組差異均不顯著(P＞0.05)。

表5 不同填飼量對北京鴨血清GPT、GOT和GGT活性的影響Table 5 Effects of different force-feeding amounts on serum GPT，GOT and GGT activity of Pekin ducks U/L

2.3 不同填飼量對北京鴨肝臟組織學的影響

填鴨屠宰后分離肝臟，觀察肝臟的外觀和組織結構。對照組北京鴨肝臟呈紅褐色，表面光滑，切面無油脂滲出。而420、450和480 g/d填飼組北京鴨大部分肝臟腫大，表面色澤呈灰黃色，部分肝臟變硬，切面有油脂滲出。分別對8組試鴨進行肝臟蘇木精-伊紅(HE)染色，觀察其肝臟脂肪的沉積情況(圖1)。對照組肝臟呈現規則的肝細胞形態，肝細胞呈多角形，細胞核清晰可見，細胞質中有部分脂滴，但數量較少，不影響肝細胞的大小和形態(圖1-A)。填飼量為360 g/d時，肝細胞脂肪沉積情況與對照組相比，變化不明顯(圖1-B)。當填飼量達到390 g/d時，肝臟脂肪沉積量有明顯的不同，脂肪組織增多，能清楚辨認完整的肝細胞(圖1-C)。填飼量進一步提高到420 g/d時，肝細胞內出現大小不等的油滴，且有部分油滴融合成了油囊，肝臟細胞脹大變型，但肝細胞完整(圖1-D)。450和480 g/d填飼組脂肪沉積差異不明顯，共同特點是脂肪空泡明顯增多，有的脂肪滴連成一片，將細胞核擠壓到一側，但并未發現肝細胞嚴重受損。

圖1 北京鴨肝臟組織學切片圖Fig.1 Histological slices of liver tissue of Pekin ducks

3 討論

3.1 不同填飼量對北京鴨生長性能的影響

在水禽生產上，填飼的主要目的是快速沉積脂肪以及生產肥肝，關于填飼對動物生長性能的影響已經有了比較深入的研究。許多研究表明，對水禽進行填飼后，其生長性能有了很大的提高［5-6］。本試驗中，除300 g/d填飼組外，其他填飼組北京鴨試驗末重和平均日增重均顯著高于對照組(P＜0.05)，420 g/d填飼組與對照組相比，平均日增重提高了47.86%，以上結果說明填飼能夠提高北京鴨生長性能，這與Zanusso等［7］在番鴨上和Chartrin等［8-9］在騾鴨上的研究結果一致。北京鴨沉積脂肪主要通過2個途徑:一是飼糧中的碳水化合物在糖酵解過程生成大量的脂肪酸，脂肪酸經酯化生成TG存儲在體內;二是飼糧中的脂肪進入消化道后，被腸上皮細胞內的脂肪分解酶分解為甘油和脂肪酸后進入血液，進一步生成TG。而本試驗中填鴨主要通過第1個途徑沉積脂肪，填飼造成脂肪酸合成代謝大于分解代謝，從頭合成的TG就會儲存在肝臟和脂肪組織中［10-12］。另一方面，填飼大量碳水化合物飼糧對北京鴨機體刺激增強，從而引起消化系統發育加速，有利于為機體發育輸送更多的營養物質，這也是填鴨增重的原因［13］。

本試驗中，當填飼量從420 g/d增加到480 g/d時，末重和平均日增重基本保持穩定，再結合試驗期間觀察420 g/d到480 g/d填飼組北京鴨排泄物的情況，發現有大量黃色玉米顆粒未能充分消化而直接排出體外，說明填飼量達到某一值時，北京鴨已不能繼續充分消化飼料中更多的營養物質而只能使體重保持穩定。李琨瑛等［2］研究也表明，北京鴨填飼后胰淀粉酶的活性增長與飼料量的增加不成比例，有部分淀粉未能充分消化。一般來說，飼喂食物越多，腸道與食物接觸面積越小，必然會造成食物消化率低［14］。Tafaj等［15］也曾研究報道，奶牛和綿羊的飼喂量是自由采食的3倍時，2種動物的營養物質利用率都降低，體重增加不明顯。本試驗結果顯示，北京鴨體重和平均日增重隨填飼量的增加而逐漸增加，當填飼量繼續增大時體重保持穩定，該結果與上述研究一致。

目前直線折線模型已經廣泛應用于動物氨基酸和維生素需要量的估算上。Luo等［16］和Yuan等［17］在水產上也應用直線折線模型來確定魚類飼喂量的研究報道，但還沒有相關填鴨填飼量的研究報道。本試驗中，以填鴨平均日增重為評定指標，建立直線折線模型估算填鴨的最適填飼量為414.2 g/d，與本試驗平均日增重結果較好的420 g/d相似，可為填鴨生產提供更好的技術方法。

3.2 不同填飼量對北京鴨血清生化指標的影響

血糖在動物機體的能量代謝中起著重要的作用，它是維持機體穩定的首要物質，而水禽肝臟又是調節血糖平衡的主要器官［18］。家禽脂肪發育和脂肪沉積的程度主要取決于血清中TG和CHO水平［19］，而血清中的脂質主要來源于肝臟和飼糧。本試驗研究結果顯示，不同填飼量對填鴨血清中Glu濃度沒有顯著影響(P＞0.05)，顯著影響血清TG和CHO濃度(P＜0.05)。在填飼量為300、330、360、390、420 g/d 時，血清中 TG 濃度沒有顯著差異(P＞0.05)，在填飼量為450 g/d時，TG濃度達到最大;而在填飼量為480 g/d時，CHO濃度達到最大，與對照組相比提高了77.4%。這說明當飼糧中的碳水化合物經北京鴨腸道消化進入血液后，大部分會被肝臟攝取用于脂肪的合成［20］，最終導致血清中TG和CHO濃度升高，而Glu濃度沒有變化。有研究表明，北京鴨被填飼或注射Glu以后，其糖耐量變大，但血糖最終在110 min內恢復到正常水平［21］。過量的脂肪進入肝臟會使脂肪以極低密度脂蛋白(VLDL)的形式運輸到外圍脂肪組織和肌肉中，當脂肪含量進一步增加時，誘發脂肪肝的形成，血清中TG和CHO濃度也隨之增加［22］。Armstrong 等［23］和 van den Brand 等［24］給母豬飼喂不同能量水平的飼糧，母豬空腹后血清中Glu濃度沒有任何變化。Davail等［25］研究也表明，對番鴨、騾鴨和北京鴨填飼后，血清中的TG和CHO濃度急速升高，Glu濃度卻是先升高再降低，而后基本保持穩定，Glu濃度沒有TG和CHO濃度變化明顯，這與李翔［26］在朗德鵝上和 Molee等［27］在騾鴨上的研究結果一致。

肝臟是機體內含酶最豐富的器官，肝臟受損時，會發生肝細胞通透性增加和細胞壞死等癥狀，致使血清酶量發生變化，因此，血清酶檢查是評估肝細胞損傷的重要途徑。當肝細胞破壞、細胞通透性增高及線粒體損傷時，GPT、GOT活性增高，并且GPT、GOT活性的高低變化與肝細胞受損的程度相一致。血清中GGT含量很少，主要來自肝臟，當動物發生病毒性肝炎、肝硬化和肝臟腫瘤等疾病時，血清GGT才有不同程度升高。而GOT與GPT活性的比值(GOT/GPT值)有助于估計患者肝細胞損傷的嚴重程度和肝臟疾病的鑒別［28］。慢性肝炎時GOT/GPT值小于1，肝細胞嚴重受損時GOT/GPT值大于1，并且隨著病情發展，GPT活性逐漸增大［29］。本試驗中，GOT/GPT值小于1，并且GPT隨填飼量增加而逐漸增加，差異顯著。這說明填飼導致北京鴨發生慢性肝炎，但肝細胞是否受到嚴重損傷還需從肝臟切片觀察進一步驗證。Babilé等［30］也研究表明，填鴨的肝臟并未發生壞死，填飼停止后肝臟可以恢復到正常狀態。本試驗也驗證了Davail等［25］的研究結果，北京鴨比番鴨、騾鴨肥肝易感性弱，肝臟變性和壞死的比率較小，這可能與北京鴨脂蛋白酯酶(LPL)活性維持在一定的水平，而番鴨與騾鴨填飼后LPL活性顯著降低有關，這說明與騾鴨和番鴨相比，北京鴨肝臟可能具有相對較強的脂質分泌功能。

本試驗結果顯示，填飼組北京鴨血清中TG、CHO濃度和GPT活性顯著高于對照組，與Fournier等［11］和蘇勝彥等［31］研究結果一致。

3.3 填鴨肝臟組織學觀察

肝臟中合成的TG主要通過VLDL和高密度脂蛋白(HDL)運送，當肝臟合成TG的速度高于VLDL和HDL的分泌速度和脂肪酸β氧化速度時，造成肝臟中TG的大量沉積，形成肥肝。本試驗中，隨著填飼量的升高，北京鴨肝臟組織中脂肪沉積量逐漸增加，在填飼量在420 g/d以上時，肝細胞充滿大小不等的脂滴，部分小脂滴融合成大脂滴，有的甚至連成一片，肝細胞雖急劇增大，但結構仍保持完整，組織中沒有壞死和破裂的現象，與蘇勝彥等［31］和朱麗慧等［32］在朗德鵝上肝細胞變化趨勢一致，同時也驗證了上述肝細胞未受到嚴重損傷的結論。而瞿浩等［33］研究還發現，肝臟除了脂肪滴的沉積和肝細胞體積的增大之外，還包含細胞數量的增多。本試驗結果顯示，肝臟細胞數量并未增多。

4 結論

①本試驗條件下，與對照組相比，填飼能顯著提高北京鴨平均日增重。當繼續提高填飼量至420 g/d以上時，末重和平均日增重基本保持穩定。用平均日增重建立直線折線模型估算填鴨的最佳填飼量為414.2 g/d，與本試驗平均日增重結果較好的420 g/d相近。

②填飼能明顯提高北京鴨血清中TG、CHO濃度和GPT活性，造成肝臟細胞沉積大量脂肪，發生慢性炎癥，但肝細胞未受到嚴重損傷。

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