脾腎兩助丸30味藥材的薄層鑒別研究

鄧雙炳 胡玉花 王成霞 李軍紅 李炎玉 張思巨

1.北京振東光明藥物研究院有限公司國家中醫藥三級實驗室，北京 100120；2.中國中醫科學院中藥研究所，北京 100700

脾腎兩助丸由明末清初名醫傅山創制，由黨參、白術、雞內金（炒）、川芎、山茱萸、補骨脂等30味中藥材組成。本品為黑褐色的大蜜丸，味甜、微酸，具有健脾益氣，滋補肝腎之功效。用于脾腎虛弱而致的肢體倦怠，氣虛無力，不思飲食，胃脘痞悶，腰膝疲軟，夢遺滑精，頭暈耳鳴。本品原質量標準（部頒標準WS3-B-1654-93）僅通過性狀、顯微鑒別進行質量控制，對一個包含高達30味中藥材的中成藥，質量可控性較差。為提高脾腎兩助丸的質量標準，本研究建立薄層色譜法對其中4味藥材進行鑒別。本法專屬性強，準確、簡便，可用于脾腎兩助丸的質量控制。

1 儀器和試藥

電子天平（BS223S，德國 Sartorius）、硅膠薄層板（G，青島海洋化工廠）；脾腎兩助丸（山西振東開元制藥有限公司，Z14021568，9 g/丸，批號：080916、080917、080918）；對照藥材山茱萸（121495-200702）、補骨脂（121056-200904）、當歸（120927-200613）、川芎（120918-200809）及對照品熊果酸（110742-200518）均購于中國藥品生物制品檢定所；陰性樣品，自制。所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 山茱萸的薄層鑒別[1]

取本品25 g，加硅藻土10 g，研細，加乙醚80 mL，回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣用石油醚（60～90℃）浸泡2次，每次15 mL（浸泡約2 min），棄石油醚液，殘渣加丙酮2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取山茱萸對照藥材0.5 g，加乙醚40 mL，同法制備對照藥材溶液。再取熊果酸對照品適量，加無水乙醇制成每1毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按脾腎兩助丸的處方比例稱取不含山茱萸的其他藥材，按該丸的制備工藝和上述供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VI B）試驗，吸取上述供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，對照藥材和對照品溶液各1 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-甲酸（5 ︰ 2 ︰0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。結果見圖1。供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的紫色斑點；陰性對照無干擾。

圖1 山茱萸薄層色譜圖

圖2 補骨脂薄層色譜圖

圖3 當歸、川芎的薄層色譜圖

2.2 補骨脂的薄層鑒別[1-2]

取本品20 g，加硅藻土10 g，研細，加乙醇80 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加0.3%氫氧化鈉15 mL使溶解，用稀鹽酸調節pH至5～6，然后用乙酸乙酯15 mL振搖提取，分取乙酸乙酯液，用鋪有適量無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品溶液。按脾腎兩助丸的處方比例稱取不含補骨脂的其他藥材，按該丸的制備工藝和上述供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。另取補骨脂對照藥材1 g，加乙醇20 mL，同法制備對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VI B）試驗，吸取上述供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，對照藥材溶液2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（10 ︰1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。結果見圖2。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同棕黃顏色的斑點；陰性對照顯灰色，無干擾。

2.3 當歸、川芎的薄層鑒別[3]

取本品20 g，加硅藻土10 g，研細，加乙醚50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醚1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取當歸、川芎對照藥材各0.5 g，同法制成對照藥材溶液。按脾腎兩助丸的處方比例稱取不含當歸、川芎的其他藥材， 按該丸的制備工藝和上述供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VI B）試驗，吸取上述供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，對照藥材溶液1μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（9︰1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果見圖3。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；陰性對照無干擾。

3 討論

（1）本研究另外考察了本方其他藥材的薄層鑒別方法，結果麥冬[4]、枸杞子[5]、川貝母[6]、肉蓯蓉[7]、小茴香[8]、郁金[9]、牽牛子[10]、白術、茯苓、山藥、半夏、黨參、白芍[11]、熟地黃[12]、杜仲[13]等藥材均無對應斑點。（2）考察本方中鎖陽、牛膝[14]、澤瀉[15]、甘草、黃芪、陳皮、款冬花、雞內金、土鱉蟲的薄層鑒別方法，結果陰性均存在干擾。（3）采用TLC 法鑒別脾腎兩助丸中山茱萸、補骨脂、當歸、川芎的色譜斑點清晰，陰性對照無干擾， 專屬性強，準確、簡便，可用于脾腎兩助丸的質量控制。（4）因脾腎兩助丸處方高達30味藥材，成分復雜繁多，為使藥品質量可控性進一步提高，需要繼續研究更多的TLC和HPLC檢測方法。

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