油菜花粉與油菜花粉內酯中總黃酮的對比分析

馬麗萍 章 琦 章定生

（1 甘肅中醫(yī)學院，蘭州 730020；2 甘肅農業(yè)大學，蘭州 730070；3 天水西聯(lián)蜂業(yè)有限公司，天水 741000）

油菜花粉內酯是應用亞臨界-超臨界聯(lián)合萃取工藝萃取油菜花粉所獲取的以脂肪酸為主的化合物的總稱。油菜花粉及油菜花粉內酯均具有降血脂、促進血液微循環(huán)、排毒養(yǎng)顏的功效，理論上分析，應該與其含有的類黃酮有關。為評價萃取工藝效果、探討其作用機理，我們對油菜花粉內酯與油菜花粉中總黃酮的含量進行了對比分析。

1 材料與方法

1.1 方法：分光光度法

1.2 材料

1.2.1 實驗用油菜花粉樣品由天水西聯(lián)蜂業(yè)有限公司提供，產地為甘肅張掖；實驗用油菜花粉內酯也由該公司提供。

1.2.2 乙醇（95%）（AR）、無水乙醇（AR）：開封市芳晶化學試劑有限公司。

1.2.3 硝酸鋁（AR）：天津光復精細化工研究所；硝酸鋁溶液（100 g/100 l）：稱取 Al(NO3)3.9H2O 17.60 g,加水溶解，定容至100 ml，均質。

1.2.4 乙酸鉀（AR）：天津光復精細化工研究所；乙酸鉀溶液(9.8g/100 ml)：稱取乙酸鉀9.814 g,加水溶解，定容至100 ml,均質。

1.2.5 蕓香苷標準品（色譜純）：中國藥品生物制品檢定所。

1.2.5.1 蕓香苷標準品儲備液（1mg/ml）:精密稱取經120℃減壓真空干燥至恒重的蕓香苷標準品50mg,置于50ml的容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。

1.2.5.2 蕓香苷對照品使用溶液（0.2mg/ml）：精密吸取蕓香苷標準品儲備液10ml置于50ml的容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。

1.2.6 實驗用水為重蒸蒸餾水。

2 儀器設備

752紫外可見分光光度計（上海佑科儀器儀表有限公司）；分析天平（上海精密儀器有限公司）；恒溫水浴鍋（金壇市華峰儀器有限公司）；低溫冰箱（海爾電器有限公司）。

3 分析步驟

3.1 試樣制備

3.1.1 稱取花粉樣品約10 g，在研缽中研細。

3.1.2 精密稱取花粉內酯樣品和花粉樣品各2g，精確到1mg，分別置燒杯中，加入95%的乙醇約30ml,置于65℃水浴中45min,攪拌，取出后冷卻至室溫，使用快速濾紙過濾。燒杯、漏斗、濾渣、濾紙用95%的乙醇洗滌。最后用95%的乙醇稀釋至50ml,搖勻，靜置1h,待測。

3.2 標準曲線的繪制及回歸方程的建立

3.2.1 精密吸取蕓香苷對照品使用溶液 1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml,分別置于 50ml容量瓶中；加 95%的乙醇至總體積15ml,依次加入硝酸鋁溶液1ml、乙酸鉀溶液1ml，搖勻；加水至刻度，搖勻，靜置1h。

3.2.2 以1cm比色杯于415nm處，以30%乙醇溶液為空白，測定其吸光度。

3.2.3 以50ml蕓香苷質量（mg）為橫坐標，以吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線，并建立直線回歸方程如式（1），并由標準曲線可以看出在0.4000～24.000μg的范圍內呈良好線性關系（n=6）r=0.9998。

2.3.4 空白實驗 精密吸取待測溶液1.0ml,置于50ml容量瓶中,加95%乙醇至14ml,用水稀釋至刻度，搖勻。

3.3 測定

3.3.1 精密吸取待測溶液1.0ml,置于50ml容量瓶中,加95%的乙醇至15ml，依次加入硝酸鋁溶液1ml、乙酸鉀溶液1ml，搖勻；加水至刻度，搖勻，靜置1h。

3.3.2 以空白為參比，用1cm比色杯于415nm處，測定試樣溶液的吸光度。

3.3.3 查標準曲線或通過式（1）計算溶液中黃酮類化合物的濃度。

3.4 計算

試樣中的黃酮類化合物的含量可用式（2）計算：

式中：X為試樣中黃酮類化合物的含量（g/100g）；M為從回歸方程（1）或工作曲線中求得的黃酮類化合物的濃度（mg）；W:樣品質量（g）；1000：由 mg化為 g。

4 結果 見表1

表1 油菜花粉內酯與油菜花粉中總黃酮檢測結果

5 實驗的重復性與精確性

為驗證實驗結果的可靠性，我們用同一樣品重復做了6次實驗，結果見表2：

表2 油菜花粉內酯與油菜花粉中總黃酮檢測重復實驗結果

由表2可以看出：6次重復實驗平行實驗誤差RSD≤3.0%。為此，認為方法可行，結果準確、可靠。

6 問題與討論

6.1 分光光度法的檢測原理是：溶于乙醇中的黃酮類化合物在弱堿性條件下，與顯色劑三價鋁離子生成有色物質，可在415nm波長附近產生最大吸收。在一定濃度范圍內，其吸光度與黃酮類化合物成正比，與標準曲線比較，可定量測定黃酮類化合物的含量。

6.2 應用亞臨界-超臨界聯(lián)合萃取工藝萃取油菜花粉所獲取的花粉內酯其總黃酮含量遠遠超過了油菜花粉的含量，為油菜花粉的2.96倍。

6.3 黃酮類化合物是蜂膠主要的功能成分，蜂膠制品具有的降血脂、輔助治療高脂血癥的功用與其含有一定量的生物類黃酮密切相關。表3列出了市售幾種蜂膠制品與花粉內酯的總黃酮含量[1]。由表3可以看出，油菜花粉內酯中的總黃酮含量雖低于蜂膠片和蜂膠膠囊，但高于蜂膠液中的含量，故可推斷油菜花粉內酯與蜂膠制品具有等同的降血脂的功效。與油菜花粉相比，油菜花粉內酯由于含有更高的生物類黃酮，因而，理論上講，油菜花粉內酯降血脂的功效要好于油菜花粉。

表3 市售幾種蜂膠制品與花粉內酯的總黃酮含量（%）

6.4 對于油菜花粉和油菜花粉內酯中所含類黃酮的種類和其具體的含量，尚待進一步探討。

[1]章定生等.分光光度法與RP-HPLC法測定蜂膠及其制品中總黃酮含量的分析與比較[J]中國蜂業(yè)，2009，（10）：38～39