對(duì)葉百部中的非生物堿類成分*

王 珺，高 羽，張朝鳳，張 勉

中國(guó)藥科大學(xué)生藥學(xué)研究室，南京 211198

百部為臨床常用中藥，始載于《名醫(yī)別錄》，其性味甘、苦，微溫，歸肺經(jīng)，具有潤(rùn)肺止咳、殺蟲滅虱的功效，主要用于治療風(fēng)寒咳嗽、百日咳、肺結(jié)核、老年咳喘、蛔蟲病、蟯蟲病、皮膚疥癬、濕疹等[1]。《中國(guó)藥典》2010版一部[2]所收載的百部為直立百部Stemona sessilifolia （Miq.） Miq.、 蔓 生 百 部 S.japonica （Bl.） Miq.或?qū)θ~百部 S.tuberosa Lour.的干燥塊根，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立一直是該藥材的難點(diǎn)，新版藥典中只有性狀、顯微鑒定和生物堿的顯色、沉淀反應(yīng)。本課題組從全國(guó)各地收集了30多批次的百部藥材樣品，經(jīng)鑒定其基源植物均為對(duì)葉百部，說明對(duì)葉百部是百部藥材市場(chǎng)的主流品種，因此本課題組以對(duì)葉百部為研究對(duì)象。為了研究和建立對(duì)葉百部多類型、多成分質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并累積足夠量的化學(xué)對(duì)照品，對(duì)較大數(shù)量的對(duì)葉百部進(jìn)行了提取分離。百部類藥材的主要化學(xué)成分是生物堿類成分，但基于多類型成分質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，本課題組對(duì)對(duì)葉百部的非生物堿類成分也進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，從對(duì)葉百部的乙酸乙酯部位分離鑒定了11個(gè)非生物堿類化合物，即大黃素甲醚（1），3-羥基-4-甲氧基苯甲酸（2），對(duì)羥基苯甲酸（3），（Z）-1，1′-biindenyliden（4），胸腺嘧啶（5），2-（1′，2′，3′，4′-四羥基丁基）-6-（2′，3′，4′-三羥基丁基）-吡嗪 （6）， 掌葉半夏堿戊（7），豆甾醇（8），β-谷甾醇棕櫚酸酯（9），β-谷甾醇（10）和β-胡蘿卜苷（11）；其中化合物1～9均是首次從該科植物中分得。本研究結(jié)果表明了百部類藥材中非生物堿類成分的含量較低，類型也較多。

1 材 料

X-4型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（溫度未校正）；Brucker ACF-300、500 型核磁共振儀；Agilent 1100 LC-MS型質(zhì)譜儀。

薄層色譜和柱色譜所用硅膠均為青島海洋化工廠生產(chǎn)；Sephadex LH-20為 Pharmacia公司產(chǎn)品；所用試劑均為分析純。

對(duì)葉百部藥材購(gòu)買于河北省安國(guó)市藥材市場(chǎng)，經(jīng)本課題組張勉鑒定為對(duì)葉百部（Stemona tuberosa Lour.）的干燥根莖。憑證標(biāo)本存放于中國(guó)藥科大學(xué)生藥學(xué)研究室。

2 提取與分離

對(duì)葉百部藥材52 kg，采用5%Na2CO3浸潤(rùn)后，陰干，95%乙醇反復(fù)滲濾提取，直至滲濾液濃縮后，點(diǎn)板基本無(wú)碘化鉍鉀反應(yīng)為止。滲濾液濃縮，加5%稀鹽酸酸化至pH 1～2，過濾，濾液用濃氨水堿化至pH 10，用氯仿萃取，得到總生物堿部分。再將萃取后堿液濃縮，揮干至無(wú)氨水味、pH基本為中性，以水混懸，乙酸乙酯萃取，減壓回收得到乙酸乙酯部位浸膏。

取乙酸乙酯部位410 g經(jīng)硅膠柱色譜，用二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶100）梯度洗脫，根據(jù) TLC 結(jié)果合并相同流份，再經(jīng)硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇（100∶0）洗脫部分得到化合物 1（20 mg）、4（8 mg）和 9（20 mg）；二氯甲烷-甲醇 （50∶1） 洗脫部分得到化合物 2 （25 mg）、8（10 mg）和 10 （1 g）；二氯甲烷-甲醇（15∶1）洗脫部分得到化合物 3（210 mg）和 5（10 mg）；二氯甲烷-甲醇（10∶1）洗脫部分得到化合物 11（2 g）；二氯甲烷-甲醇（6∶1）洗脫部分得到化合物 7（350 mg）；二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫部分得到化合物 6（200 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 橘紅色針晶 （二氯甲烷-甲醇），mp 197～198℃，Borntrager反應(yīng)呈紅色，醋酸鎂反應(yīng)呈橙紅色，推測(cè)為蒽醌類化合物。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6） δ：12.16（1H，s，8-OH），11.96（1H，s，1-OH），7.52（1H，s，H-4），7.21（1H，s，H-7），7.20（1H，s，H-5），6.88 （1H，s，H-2），3.94 （3H，s，6-OCH3），2.43（3H，s，3-CH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：189.9（C-9），181.1（C-10），166.1（C-6），164.3（C-8），161.4 （C-1），148.5（C-3），134.8 （C-10a），132.8（C-4a），124.1 （C-2），120.5 （C-4），113.4 （C-9a），109.8 （C-8a），107.6 （C-5），106.5 （C-7），56.3 （6-OCH3），21.4（3-CH3）。 以上1H-NMR、13C-NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]基本一致，鑒定該化合物為大黃素甲醚。

化合物2 白色粉末（石油醚-丙酮），mp：215～217℃，F(xiàn)eCl3反應(yīng)呈陽(yáng)性。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6） δ：12.43 （1H，s，-COOH），9.78 （1H，s，3-OH），7.43～7.45 （2H，m，H-2，H-6），6.83 （1H，d，J=9.0 Hz，H-5），3.80（3H，s，-OCH3），由1H-NMR 數(shù)據(jù)推斷該化合物可能為苯甲酸的3，4-位羥基和甲氧基的衍生物。由于羥基的+C效應(yīng)要大于甲氧基，所以與羥基相鄰的質(zhì)子信號(hào)一般要比與甲氧基相鄰的處于高場(chǎng)，文獻(xiàn)[4]報(bào)道，甲氧基連在C-4時(shí)H-5的δ值為6.84，而羥基連在C-4時(shí)H-5的δ值為6.68。通過與文獻(xiàn)[4]對(duì)照，鑒定該化合物為3-羥基-4-甲氧基苯甲酸。

化合物3 白色粉末 （二氯甲烷-甲醇），mp 213～214℃，溴甲酚藍(lán)反應(yīng)陽(yáng)性。ESI-MS m/z：137[M-H]-，1H-NMR （300 MHz，DMSO-d6） δ：12.39（1H，s，-COOH），10.19 （1H，s，4-OH），7.77（2H，d，J=8.7，H-2，H-6），6.82（2H，d，J=9.0 Hz，H-3，H-5）。13C-NMR （125 MHz，DMSO-d6） δ：167.1（COOH），161.5 （C-4），131.4 （C-2，C-6），121.3 （C-1），115.0（C-3，C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]基本一致，鑒定該化合物為對(duì)羥基苯甲酸。

化合物4 白色片狀晶體 （氯仿），mp 312～314℃。 ESI-MS m/z：227[M-H]-，1H-NMR（500 MHz，CDCl3） δ：8.79 （2H，d，J=8.5 Hz，H-7，H-15），8.73（2H，d，J=9.0 Hz，H-1，H-9），8.02 （2H，d，J=9.0 Hz，H-2，H-10），8.00 （2H，dd，J=1.5，8.5 Hz，H-4，H-12），7.71 （2H，dt，J=1.5，8.5 Hz，H-6，H-14），7.64（2H，dt，J=1.5，8.5 Hz，H-5，H-13）。13C-NMR（125 MHz，CDCl3） δ：132.2 （C-3，C-11），130.6 （C-8，C-16），128.6 （C-4，C-12），128.3 （C-17，C-18），127.4（C-2，C-10），126.7 （C-6，C-14），126.4 （C-5，C-13），123.2（C-7，C-15），121.2（C-1，C-9）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]基本一致，鑒定該化合物為（Z）-1，1′-biindenyliden（見圖 1）。

化合物5 白色粉末 （二氯甲烷-甲醇），mp 308～310℃。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6） δ：10.96（1H，s，H-3），10.54（1H，s，H-1），7.23（1H，s，H-6），1.72（3H，s，5-CH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：164.8（C-4），151.4（C-2），137.6（C-6），107.8（C-5），11.7（5-CH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]基本一致，鑒定該化合物為胸腺嘧啶（見圖1）。

化合物6 白色粉末 （甲醇），ESI-MS m/z：305[M+H]+，1H-NMR（300 MHz，DMSO-d6） δ：8.62（1H，d，J=0.9 Hz，H-3），8.39 （1H，d，J=1.5 Hz，H-5），5.27（1H，d，J=6.3 Hz，H-1′），4.93 （1H，d，J=6.3 Hz，1′-OH），4.65（1H，s，3′′-OH），4.61（1H，s，2′-OH），4.59（1H，s，2′-OH），4.41（1H，s，4′′-OH），4.39（1H，s，3′-OH），4.34（1H，s，4′-OH），3.75（1H，m，H-2′′），3.61（1H，m，H-4′a），3.60（1H，m，H-3′），3.58（1H，m，H-2′），3.54（1H，m，H-4′a），3.44（1H，m，H-4′b），3.40（1H，m，H-4′b），3.36 （1H，m，H-3′′），3.05（1H，m，H-1′′a），2.72（1H，m，H-1′′b）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6） δ：155.6（C-2），153.2 （C-6），143.2（C-5），142.2（C-3），74.9（C-3′′），73.8（C-2′），71.4（C-1′），71.3（C-3′），71.2（C-2′），63.6（C-4′），63.2（C-4′′），39.9（C-1′）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8-9]基本一致，鑒定該化合物為 2-（1′，2′，3′，4′-四羥基丁基）-6-（2′，3′，4′′-三羥基丁基）-吡嗪（見圖 1）。

化合物7 無(wú)色針晶 （二氯甲烷-甲醇），mp 189～190℃。 ESI-MS m/z：215[M+H]+，1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6） δ：8.59 （1H，s，H-6），8.35（1H，s，H-3），5.26（1H，d，J=6.5 Hz，1′-OH），4.92（1H，d，J=6.5 Hz，H-1′），4.60 （1H，d，J=5.5 Hz，3′-OH），4.37（1H，d，J=7.5 Hz，2′-OH），4.33 （1H，t，J=5.5 Hz，4′-OH），3.64（1H，m，H-4′a），3.62（1H，m，H-3′），3.59（1H，m，H-2′），3.44（1H，m，H-4′b），2.47（3H，s，2-CH3）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6） δ：157.8（C-5），151.5（C-2），141.8（C-3），140.4（C-6），73.7（C-2′），71.5（C-1′），71.2（C-3'），63.5（C-4′），20.9（2-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]基本一致，鑒定該化合物為掌葉半夏堿戊（pedatisectine E） [2-甲基-5-（1′，2′，3′，4′-四羥基丁基）-吡嗪，2-methyl-5-（1′，2′，3′，4′-tetrahydroxybutyl）-pyrazine]（見圖 1）。

圖1 化合物4～7的結(jié)構(gòu)式

化合物8 白色片狀晶體 （氯仿），mp 167～168℃，5%濃硫酸香草醛 105℃加熱顯紫紅色，Libermann-burchard反應(yīng)為陽(yáng)性。1H-NMR（500 MHz，CDCl3） δ：5.35 （1H，d，J=5.0 Hz，H-6），5.16（1H，dd，J=15.5，8.5 Hz，H-22），5.02 （1H，dd，J=15.5，9.0 Hz，H-23），3.53 （1H，ddd，J=18.0，13.0，4.5 Hz，H-3），1.01 （3H，s，19-Me），0.93 （3H，d，J=5.5 Hz，21-Me），0.85 （3H，m，29-Me），0.84 （6H，m，26-Me，27-Me），0.68（3H，s，18-Me）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]基本一致，鑒定該化合物為豆甾醇。

化合物9 白色粉末 （氯仿），mp 87～88℃，5%濃硫酸香草醛105℃加熱顯紫紅色，Libermann-burchard 反應(yīng)為陽(yáng)性。1H-NMR （300 MHz，CDCl3） δ：5.37 （1H，d，J=4.4 Hz，H-6），4.61 （1H，m，H-3），2.30（2H，m，H-4a，H-4b），2.25 （2H，m，H-2′a，H-2′b），1.85（2H，m，H-2a，H-2b），1.02（3H，s，19-CH3），0.88（3H，m，16′-CH3），0.85 （3H，m，26-CH3），0.82（3H，m，29-CH3），0.80 （3H，m，27-CH3），0.68 （3H，s，18-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故確定該化合物為β-谷甾醇棕櫚酸酯。

[1] 張宏武.中藥百部炮制歷史沿革及現(xiàn)代研究概況[J].國(guó)外醫(yī)學(xué) 中醫(yī)中藥分冊(cè)，2004， 26（5）：265-70.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：123-4.

[3] 唐力英，王祝舉，傅梅紅，等.決明子中游離蒽醌類化學(xué)成分研究[J]. 中藥材，2009，32（5）：717-9.

[4] 尚小雅，李 帥，王映紅，等.紅絨毛羊蹄甲的化學(xué)成分研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2006，31（23）：1953-5.

[5] 徐 瑞，陳 立，李 彬，等.回回蒜子正丁醇部位化學(xué)成分研究[J]. 國(guó)際藥學(xué)研究雜志，2011，38（1）：68-70.

[6] 唐于平，樓鳳昌，胡 杰，等.槐果皮中的脂溶性成分[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2001，13（3）：4-7.

[7] 孫武興，李 銑，李 寧，等.毛金竹葉提取物化學(xué)成分的分離與鑒定[J]. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，25（1）：39-43.

[8] 李 琦，葉蘊(yùn)華，閆愛新，等. 三七中 2-（1′，2′，3′，4′-四羥基丁基）-6-（2′′，3′′，4′′-三羥基丁基）-吡嗪的分離、鑒定及藥理活性研究 [J].高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào)，2001，22（11）：1824-8.

[9] 陳 磊.白背三七降血糖物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D].上海：第二軍醫(yī)大學(xué)，2009.

[10] 吳 笛，張朝鳳，張 勉，等.中藥款冬花的化學(xué)成分研究[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志，2008，43（4）：260-3.

[11] 安熙強(qiáng)，李宗主，沈連剛.陽(yáng)春砂仁的化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2011，23（6）：1021-4.

[12] 許文成，蔣建勤.荷梗的化學(xué)成分研究[J].藥學(xué)與臨床研究，2011（3)：235-7.