聲門上型喉癌CT表現與c-Met、MMP-2表達的關系

王樂秋 蔡勝艷 張建波 郝艷坤 隋萍萍

聲門上型喉癌CT表現與c-Met、MMP-2表達的關系

王樂秋 蔡勝艷 張建波 郝艷坤 隋萍萍

目的探討c-Met和MMP-2在人聲門上型喉癌組織中的表達與其CT的關系。方法收集48例聲門上型喉癌患者的CT圖像及癌組織標本，分別采用原位雜交方法檢測其c-Met基因及用免疫組化法檢測MMP-2基因，分析檢測結果與CT圖像的關系。結果聲門上型喉癌原發灶不同范圍的c-Met、MMP-2基因表達差異無顯著意義（P＞0.05）。而CT顯示有無侵襲會厭前間隙、會厭谷、梨狀窩、喉咽側壁、聲帶以及有無頸淋巴結轉移各組中c-Met、MMP-2基因的表達差異有顯著性（P＜0.05）。結論c-Met、MMP-2基因表達的異常在喉癌細胞的增殖、發展及轉移中起重要作用，其陽性表達與聲門上型喉癌的侵襲與轉移密切相關，可成為聲門上型喉癌預后不良的標志。

聲門上型喉癌；基質金屬蛋白酶-2；肝細胞生長因子受體；侵襲與轉移；CT

喉癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，其發病率約占全身惡性腫瘤的 5%[1]。目前喉癌的物理診斷方法之一為喉部CT掃描，是確定腫瘤侵犯喉范圍的有效手段。早期聲門型喉癌的預后較好，五年生存率可達 70%以上，但仍有很多聲門上型喉癌直至晚期才被發現，五年生存率降至 50%左右。腫瘤的局部復發、淋巴結轉移及遠處轉移是影響喉癌患者預后的主要因素[2]。c-Met、MMP-2的高表達與多種腫瘤的發生、發展相關性的研究較多，但其與喉癌CT表現在國內尚無報道。因此，結合臨床資料進行回顧性分析，做此項研究以探討 c-Met和MMP-2在人喉癌組織中的表達與喉癌CT的關系及其對喉癌患者預后的影響。現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料收集本院紅旗醫院2009～2011年接受64排螺旋CT檢查的聲門上型喉癌患者手術切除的喉癌組織標本48例。其中男31例，女17例，年齡48～78歲，平均58歲。所有患者術前均未接受過任何系統的放療和化療。

1.2 64排螺旋CT掃描方法采用Aquilion64排螺旋CT掃描機。掃描條件：120kv，200mAs，層厚0.5mm。48例患者均行橫斷掃描，以舌骨上0.5cm開始向下至環狀軟骨連續切層，層厚及層間距均為3mm。根據某一CT表現的有無進行對應分組：會厭喉面根部單側腫塊組26例和多側腫塊組22例；會厭前間隙有侵襲組34例和無侵襲組14例；會厭谷有侵襲組33例和無侵襲組15例；梨狀窩有侵襲組32例和無侵襲組16例；喉咽側壁梨狀窩有侵襲組30例和無侵襲組18例；聲帶有侵襲組37例和無侵襲組11例；頸淋巴結轉移組28例和無頸淋巴結轉移組20例。

1.3一般組織學處理組織標本均經 4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，PH7.3）固定（其中含0.1%DEPC），常規石蠟包埋，厚4um連續切片。

1.4主要試劑與方法

1.4.1 c-Met基因原位雜交檢查采用武漢博士德公司的地高辛標記及檢測原位雜交試劑盒，設陽性對照和陰性對照。

1.4.2 MMP-2的免疫組化檢測兔抗人MMP-2單克隆抗體為武漢博士德公司的產品，采用SABC法，經高溫高壓抗原修復，嚴格按照操作規范進行。設置陽性和陰性對照以保證染色結果的可靠性。陽性對照為陽性對照片，陰性對照用PBS代替一抗。

1.5結果判斷

1.5.1原位雜交結果判定以細胞膜和/或細胞漿中出現清晰棕黃色顆粒著色為c-Met基因表達陽性顯色。

1.5.2免疫組化染色結果判定MMP-2陽性為細胞漿著色且呈棕黃色或黃褐色，視野中腫瘤細胞的20%以上被染色判定為陽性。

1.5.3特異性免疫反應強度分級標準陽性細胞＜5%為陰性(-)；陽性細胞5%～25%為弱陽性(+)；陽性細胞25%～50%為中度陽性(++)；陽性細胞＞50%為強陽性(+++)。

1.6統計學分析對c-Met、MMP-2基因表達與喉癌的關系進行χ2檢驗，P＜0.05為差異有顯著意義。

2 結果

喉癌與c-Met、MMP-2基因表達的關系，見表1。聲門上型喉癌原發灶不同范圍的c-Met、MMP-2基因表達差異無顯著意義（P＞0.05）。而 CT顯示有無侵襲會厭前間隙、會厭谷、梨狀窩、喉咽側壁、聲帶以及有無頸淋巴結轉移各組中 c-Met、MMP-2基因的表達差異有顯著性（P＜0.05），并且有侵襲組兩基因均呈高度表達（均在80%以上）。

表1 喉癌與c-Met、MMP-2基因表達的關系

3 討論

頭頸部惡性腫瘤的發生率約為14/10萬，占全身惡性腫瘤的16%～40%，5年生存率大約35%～60%[3]。以往的研究表明c-Met編碼的酪氨酸激酶活性受體蛋白，與多種癌基因產物和調節蛋白相關，參與細胞信息傳導、細胞骨架重排的調控，是調節細胞增殖、分化和運動的重要因素。目前認為，c-Met的激活與多種腫瘤的發生發展有密切關系。MMP-2亦稱IV型膠原酶或稱明膠酶A，其主要功能為降解IV型膠原，因而它在腫瘤細胞突破基底膜屏障和浸潤轉移中起著重要作用[4-7]。另有多項研究表明，在肝癌、喉鱗癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、肺癌、泌尿系統等多種腫瘤中MMP-2有較高表達[6,8,9]。本研究表明，聲門上型喉癌的CT征象與c-Met、MMP-2基因表達密切相關，雖然其原發灶范圍大小與c-Met、MMP-2基因表達無關，但其癌組織中兩基因的陽性表達率為61.54%～68.18%；同時可見隨著聲門上型喉癌CT表現的其浸潤和轉移越顯著。c-Met、MMP-2基因表達越強，提示此兩基因的表達與喉癌呈正相關，因此c-Met、MMP-2基因表達的異常在喉癌細胞的增殖、發展及轉移中起重要作用，可成為喉癌預后不良的標志。

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Supraglottic carcinoma CT and c-Met、the relationship of the expression of MMP-2

Wang Leqiu Cai Shengyan Zhang Jianbo Hao Yankun Sui Pingping

ObjectiveStudy of c-Met and MMP-2 on vocals door type laryngeal carcinoma and its relation to CT.MethodsCollected 48 cases of supraglottic laryngeal carcinoma CT image and cancer tissue specimens,respectively,using in situ hybridization methods for the detection of the c-Met gene and by immunohis tochemistry Assay for detection of MMP-2gene,analysis of test results and the relationship between CT image.ResultsSupraglottic carcinoma primary different ranges of c-Met,MMP-2 gene expression had no significant difference (P＞0.05).But CT showed no invasion preepiglottic space,epiglottic vallecula,piriform fossa,hypopharyngeal side wall,vocal and without cervical lymph node metastasis in groups c-Met,MMP-2gene expression differences are significant (P＜0.05).Conlusion C-Met,MMP-2 abnormal gene expression in laryngeal cancer cell proliferation,development and play an important role in metastasis,its expression and supraglottic carcinoma invasion and metastasis is closely related to carcinoma of the supraglottic larynx,can be a sign of a poor prognosis.

Supraglottic Cancer; MMP-2; c-Met; lnvasion and metastasis; CT

牡丹江醫學院紅旗醫院耳鼻咽喉科，黑龍江牡丹江 157011

王樂秋（1978-）女，牡丹江醫學院紅旗醫院，黑龍江省牡丹江市，郵箱：mdjwangleqiu@163.com。