液相色譜串聯質譜法同時測定化妝品中的多種性激素

2012-05-03 09:14:08姜曉輝

中國測試 2012年1期

姜曉輝

（珠海市質量計量監督檢測所，廣東珠海 519002）

0 引言

化妝品中添加性激素，雖然在短時間內可以起到促進毛發生長、減緩皮膚老化、增加皮膚彈性的作用，但長期使用就會導致色素沉積，產生黑斑或皮膚萎縮，甚至有一定的致癌性。我國的《化妝品衛生規范》規定，化妝品中禁止添加性激素；因此，建立快速準確的激素檢測方法具有重要意義。本文利用液相色譜串聯質譜法（LC-MS）同時檢測化妝品中的6種雌激素，兩種雄激素和3種孕激素，方法快速、簡便、靈敏度高，適合于日常檢測。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

液質聯用儀Aglient 6430，安捷倫科技有限公司；高速臺式離心機TDL-100，上海安亭科學儀器廠；臺式超聲波清洗器DL-120B，上海之信儀器有限公司。

睪酮、甲基睪酮、孕酮、醋酸甲地孕酮、甲羥孕酮乙酸酯、雌酮、雌二醇、雌三醇、炔雌醇、己烯雌酚、己烷雌酚等標準物質，百靈威科技有限公司。

甲醇、乙腈均為色譜純，德國CNW公司；welchromRSPE BRP，月旭材料科技有限公司。

1.2 樣品前處理

準確稱取樣品0.5000g（貼膜取擠出的液體），化妝水和貼膜可以直接上樣，其他樣品加入5mL甲醇，超聲萃取至樣品與溶劑充分混勻，8000 r/min離心5min，提取甲醇層，加蒸餾水至25mL。精油樣品重復提取兩次，合并甲醇層，在水浴上蒸去甲醇至2mL左右，然后加蒸餾水至25mL。然后分別用5mL甲醇和5mL水先后洗滌SPE小柱，上樣，用2mL 25%的甲醇水溶液淋洗，用2mL 80%甲醇水溶液洗脫。洗脫液上機測試。

1.3 儀器分析條件

色譜條件：色譜柱為月旭Ultimate XB-C8 2.1m×100mm×3μm；流動相為水∶乙腈＝40∶60，流速 0.3mL/min。質譜條件：電噴霧離子源；毛細管電壓4.0 kV；噴霧器壓力 2.895×105Pa；干燥氣流速 10 L/min；干燥氣溫度為350℃；多反應監測（MRM）模式。其中孕激素和雄激素采用正模式，雌激素采用負模式。其他質譜分析參數見表1。

表1 激素質譜分析參數1）

2 結果和討論

2.1 前處理條件的選擇

與溶劑萃取上機測試的方法相比較，通過SPE小柱處理樣品可以將樣品進一步凈化并濃縮，提高了定量回收率和檢出靈敏度，也減少了溶劑的用量和工作時間。

2.2 儀器條件的選擇

分別在正負兩種模式下考察了不同激素的母離子強度，雌激素采用負模式，雄激素和孕激素采用正模式。盡管串聯質譜有較好的檢測性能，但是好的色譜分離可以減少雜質的干擾和基質的影響，有利于提高定性和定量的準確性。因此，分別考察了C8和C18兩種色譜柱的分離度，實驗表明樣品在C8柱上的分離更完全，峰形也更加對稱，所以選擇C8柱作為分離柱。由于各激素均溶于甲醇、乙腈等有機溶劑，因此使用水∶甲醇和水∶乙腈作為流動相，并嘗試多種流動相配比。選擇水∶甲醇作為流動相時，水量從低到高分別嘗試均發現有一個或幾個激素不出峰，因此選擇水∶乙腈作流動相，綜合考慮分離效果及分析時間，最終選擇水∶乙腈＝40∶60，以 0.3mL/min的流速等度洗脫。

2.3 定量分析

按上述色譜質譜條件，得到正模式下雄激素和孕激素的標準色譜圖（TIC），如圖1所示；負模式下雌激素下的標準色譜圖（TIC），如圖2所示。11種激素的定量標準工作曲線及相關系數、檢出限見表2。不同狀態樣品的三水平加標回收率平均值及精密度測定結果如表3所示。不同激素的回收率在73%～105%之間，相對標準偏差（RSD）小于10%。

圖1 雌激素色譜圖（TIC）

表2 工作曲線及檢出限

3 結束語

與《化妝品衛生規范》中環己烷液－液萃取方法相比較，固相萃取方法節省了大量的有機溶劑，無需蒸餾濃縮，節省了前處理的時間。用液相色譜串聯質譜法測定化妝品中的多種性激素，與傳統的液相色譜法相比較，質譜的定性能力不僅明顯優于紫外及熒光分光光度的檢測方法，而且比二極管陣列檢測器的定性準確度更高。優化的質譜條件，使方法的靈敏度更高，檢出限也遠遠低于傳統的液相色譜法，而且操作簡單，快速，定量準確。本文提出的方法可為功能性化妝品中性激素多組分同時監測提供參考。