杜梨類鈣調磷酸酶B亞基蛋白PbCBL10基因的克隆和表達特性研究
2012-04-29 00:00:00李慧叢郁常有宏藺經盛寶龍
果樹學報 2012年4期
摘要: 【目的】為了探明杜梨類鈣調磷酸酶B亞基蛋白（Calcineurin B-like protein，CBL）基因的序列特征和表達特點，【方法】以杜梨幼苗為試材，運用同源克隆和半定量RT-PCR對PbCBL10基因進行克隆和表達分析。【結果】結果表明，PbCBL10基因編碼區cDNA長度為801 bp，編碼的多肽由266個氨基酸組成。該多肽預測的等電點為4.56，估計的相對分子質量為30.45 ku。其對應基因組DNA序列長1 983 bp，包括9個外顯子和8個內含子。通過PSORT進行亞細胞定位分析發現PbCBL10蛋白位于質膜上的幾率最大。PbCBL10基因編碼的多肽具有4個鈣離子結合域EF手形結構和1個鈣調磷酸酶A亞基結合位點。PbCBL10與番茄SlCBL10（NP_001239045）和擬南芥AtCBL10（NP_195026）蛋白間的同源性較高，分別為82%和77%，并與AtCBL10親緣關系最近。PbCBL10基因在杜梨幼苗根、莖和葉片中均為誘導型表達，50～200 mmol·L-1 CaCl2、20 μmol·L-1 ABA、100 mmol·L-1 NaCl、10% （w/v） PEG6000或180 mmol·L-1 甘露醇處理后其表達量明顯上調。【結論】PbCBL10基因具備植物CBL基因家族的固有特征，能夠響應胞內鈣濃度變化，對ABA、鹽堿、干旱和滲透脅迫均存在轉錄響應。
關鍵詞： 杜梨； 類鈣調磷酸酶B亞基蛋白； 基因克隆； 表達特性
