淺談高效液相色譜在農藥殘留檢測中的應用

近年來，高效液相色譜在食品化學、環境化學、生物化學、臨床醫學等領域應用范圍的進一步拓寬，本文從液相色譜法的概念及特點入手，分析了液相色譜技術在食品中檢測農藥殘留的應用與研究現狀。

一、液相色譜法的概念及特點

（一）液相色譜法的概念

流動相為液體的色譜法稱為液相色譜法。液相色譜法包括傳統的柱色譜、薄層色譜和紙色譜。在20世紀60年代末期，在經典液相色譜和氣相色譜法的基礎上，在液相柱色譜中，采用極細顆粒的高效固定相，全部分離過程由計算機控制完成，由此發展起來的新型分離技術，稱為高效液相色譜法（簡稱HPLC）。

（二）液相色譜法的特點

上世紀60年代末期液相色譜開始飛速發展，在各領域中都得到廣泛使用。它的復興既借鑒了氣相色譜的成功經驗，也因氣相色譜的缺點與不足而促進發展。液相色譜和氣相色譜相比較，具有幾下個方面的特點：

1. 氣相色譜法分析的樣品限于氣體和沸點較低的具有揮發性的化合物。而液相色譜法分析的樣品不受樣品揮發性和熱穩定性的限制，適合于分離生物大分子、不穩定的天然產物、離子型化合物以及高沸點的高分子化合物。而這類化合物占有機物總數的大多數。

2. 氣相色譜采用的流動相是惰性氣體，它對被分離組分不產生相互作用力，僅起到運載作用。而液相色譜中的流動相可選用多種多樣的不同極性的液體，它對被分離組分可產生一定的作用力，這就為提高分離效能比氣相色譜多了一個可選擇的參數。而且液相色譜中具有獨特效能的柱填料（固定相）的種類較多，這樣就使固定相的選擇余地更大，從而增加了分離的可能性。

3. 氣相色譜法反洗一般在較高的溫度下進行，而高效液相色譜法經常在室溫條件下工作，分子間的相互作用在低溫時更為有效，因此降低溫度一般會提高色譜分離效率。

4. 和氣相色譜相比，液相色譜對樣品的回收比較容易，而且是定量的，樣品的各個組分很容易被分離出來。因此，在很多場合，液相色譜不僅作為一種分析方法。而且可以作為一種分離手段，用以提純和制備具有中等純度的單一物質。

二、高效液相色譜在農藥殘留中的技術應用

（一）氨基甲酸酯類農藥具有品種多、藥效好、分解快、殘留期短、低毒、高效、選擇性強等特點。這類農藥正逐漸替代有機氯農藥和部分替代有機磷農藥，但這類農藥不易揮發，熱定性差，因此不適合用氣相色譜測定。劉長武等采用氨基固相萃取分離凈化，用ODS-C18柱在梯度淋洗條件下對10種氨基甲酸酯類農藥及代謝物進行分離，通過柱后衍生化，熒光檢測器激發波長330納米，發射波長465納米，柱溫42℃，方法的檢出限0.008～0.02毫克/千克，將10種氨基甲酸酯類農藥混合標準溶液在0.05毫克/升、0.10毫克/升、0.50毫克/升三個水平添加到蔬菜和水果樣品中進行方法的精密度試驗，方法的添加回收率為70%～120%，變異系數小于20%。

（二）1996年，黃彩海等報道了用高效液相色譜法測定環境水中的嘧磺隆。他們研究了萃取劑及溶劑的選擇、酸度、搖動時間、萃取次數、靜置時間及萃取機理對萃取效率的影響。同時選擇最佳萃取條件，取1升水樣于1升分液漏斗中萃取。在甲醇+水=85+15，柱溫28℃，流速1.0毫升/分鐘和采用C18色譜柱的條件下，用紫外吸收檢測器檢測。結果表明，最低檢測量為2微克，最低檢出質量濃度為4微克/升。用本法對實際樣品測定，加標回收率為93%～107%，方法具有可靠的準確度和較高的精密度。

（三）2009年陳銘學等用高效液相色譜法測定蔬菜和水果中的多菌靈、甲基硫菌靈，在色譜柱C18柱和甲醇+離子對試劑=40+60，柱溫45℃，進樣量40微升，檢測波長275納米，流速1.0毫升/分鐘，用可調波長紫外檢測器，外標法定量，用本法對實際樣品測定，當添加水平在0.125毫克/千克時，添加回收率為75%～85%，添加水平在0.25毫克/千克時，添加回收率為90%～105%，方法具有可靠的準確性。

高效液相色譜不受樣品揮發性的限制，流動相的選擇范圍多，固定相的種類繁多，因而可以分離不穩定和非揮發性的物質。隨著固定相的發展，有可能在充分保持升華物質活性的條件下完成其分離。因此，高效液相色譜技術在食品分析領域具有巨大的現實意義。