檢測方法大PK

作者按：

隨著對人乳頭瘤病毒的深入研究，HPV的檢測技術也不斷進步，HPV檢測在宮頸癌篩查、治療、評估療效及監測預后中發揮了重要作用。臨床應用的這些檢測技術各有所長，也有所短，該如何選擇呢？

傳統的檢測方法

傳統方法主要通過形態學方法（包括細胞學、組織學、電鏡檢查等）和免疫學方法（免疫組化法）對其檢測。傳統方法操作容易，成本較低，準確度較差，特異性和靈敏度均不夠理想，存在較高的假陽性率和假陰性率，且不便于對HPV進行分型，目前較少應用。

PCR類檢測方法

包括導流雜交基因芯片技術、實時熒光定量PCR法和流式熒光雜交法檢測等。PCR 是基于核酸雜交的原理，設計與HPV-DNA互補的一對特異性核酸引物，如果體內存在HPV，則可以HPV-DNA為模板進行體外擴增，檢測結果陽性。PCR 方法有極高的敏感度，同時可進行HPV分型檢測。缺點是易受污染，假陽性率高，實驗條件要求嚴格，臨床應用受到限制。

核酸雜交法

核酸雜交檢測的特異性和靈敏度均顯著高于傳統檢測方法，并且可應用特異性探針對HPV進行分型。目前已有多種用于HPV-DNA檢測的核酸雜交檢測方法，如核酸印跡原位雜交、斑點雜交、原位雜交。

原位雜交法主要檢測蠟塊組織中的HPV，假陽性較高，靈敏性不高，不適合大規模篩查和臨床使用。

核酸印跡原位雜交靈敏度較高，但不能達到臨床所需的靈敏度，且繁瑣、費時耗力，不適于大通量臨床樣品的篩查，目前臨床使用較少，主要用于實驗室研究。

斑點印跡法的敏感度和特異性均低于核酸印跡原位雜交法，雖然經濟實用，但實驗過程存有放射性污染，是環保所不能輕視的問題。

雜交捕獲

第二代雜交捕獲法由美國Digene公司所創，可同時檢測13種高危型HPV(16、18、3l、33、35、39、

45、5l、52、56、58、59和68)。優點是操作簡單，檢測方法統一、標準化，不同實驗室之間可比性強，重復性好；自動化程度高，儀器判讀結果，可避免人為錯誤；高敏感，更適于大規模人群的篩查。中國醫學科學院腫瘤研究所一項比較研究結果顯示，HPV-DNA捕獲法檢測的靈敏度和特異度分別為95%和85%。該方法得到美國食品藥品管理局認證，并在全世界范圍內廣泛用于臨床宮頸癌的篩查和復查。缺點是不能對HPV分型，任何一種型別的HPV-DNA超過閾值，其檢測結果均為陽性。

基因芯片技術

基因芯片法是采用基因信號放大技術、導流雜交法并結合基因芯片技術，通過DNA提取，PCR基因擴增，在基因芯片上雜交，顯色，即可判定結果。可同時檢測多種HPV亞型，是檢測HPV多重感染的有效方法，真正實現了基因分析所具備的大規模、并行性、高效、自動化特點，敏感和特異性均高，是目前最前沿的HPV分型檢測手段。但該技術尚存一些亟待解決的問題，如有效合成芯片探針、提高芯片的特異性及增加信號檢測靈敏度等。

選擇HPV 檢測方法應該注意的問題

⑴敏感度：分析對比敏感度與臨床敏感度；

⑵重復性；

⑶臨床認證：未經臨床驗證的HPV 檢測方法是不安全的，分析敏感度不等于臨床敏感度，提高分析敏感度會導致臨床特異度降低。

目前臨床上比較廣泛應用的非HPV分型檢測方法是雜交捕獲二代技術。該法已得到世界范圍的認可，廣泛應用于宮頸癌的篩查和隨診。HPV 分型檢測在臨床上更適合高危型HPV檢測陽性而細胞學檢查陰性的女性的進一步分流管理。