1083例婦女HPV感染狀況分析

西電集團(tuán)醫(yī)院（西安710077） 楊小藝 李 娜 王海寧

宮頸癌是比較常見的婦女惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于乳腺癌。有研究證實(shí)，在世界范圍內(nèi)罹患宮頸癌的患者中，有93%以上均能檢測(cè)到 HPV感染［1－2］。其中，高危型HPV感染、病毒的持續(xù)存在是導(dǎo)致宮頸癌前病變及宮頸癌的必要因素［3］。目前已分離出110余種HPV－DNA，其中30多種與宮頸感染和病變有關(guān)。國外有文獻(xiàn)報(bào)道因地域差異和檢測(cè)方法不同，宮頸原位腺癌及浸潤性腺癌與HPV型別的關(guān)系及檢出率大有不同［4］。為了解西安地區(qū)婦女HPV感染狀況及常見型別分布，本文采用HPV－RDB法對(duì)1083例西安市城區(qū)婦女進(jìn)行HPV－DNA檢測(cè)，現(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果報(bào)道如下。

對(duì)象與方法

1 研究對(duì)象 以2010年6月至2011年6月在西電集團(tuán)醫(yī)院及西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦科門診就診的1083例婦女為研究對(duì)象，年齡18～80歲，平均年齡36.5歲。每例均檢測(cè)HPV19種亞型。

2 標(biāo)本采集 宮頸脫落細(xì)胞在無菌條件下用特制宮頸刷深入宮頸管內(nèi)2cm，旋轉(zhuǎn)數(shù)周后并停留片刻取出，取出后放入裝有2ml細(xì)胞保存液的保存管中，沿刷柄折痕將宮頸刷折斷，旋緊管蓋，－20℃保存待測(cè)。

3 試劑與儀器 人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)試劑盒（PCR－反向斑點(diǎn)雜交法）由廣州達(dá)安基因有限公司提供；儀器是由廣州達(dá)安基因有限公司提供的DA7600型擴(kuò)增儀。

4 樣本DNA的提取 將宮頸刷上的細(xì)胞洗脫于2ml細(xì)胞保存液中，洗脫液轉(zhuǎn)至1.5ml離心管中，10000r／min離心5min，棄去上清，保留管底細(xì)胞沉淀。向沉淀中加入50μl DNA提取液，充分振蕩混勻，100℃保溫10min，10000r／min離心5min，上清備用。PCR擴(kuò)增：嚴(yán)格按照試劑盒使用說明，取PCR反應(yīng)管若干于室溫解凍平衡10min，分別加入提取上清5μl，6000r／min瞬時(shí)（3s）離心后，將各反應(yīng)管放入PCR儀，按下列條件擴(kuò)增：93℃3min變性，然后按93℃40s→55℃40s→72℃40s擴(kuò)增，共40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7min。雜交：將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物98℃，8min變性，立即置于冰水混合物中2min以上，按試劑盒說明進(jìn)行雜交反應(yīng)。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 西安市城區(qū)婦女HPV感染率及HPV亞型分布 見表1。1083例樣本中，檢出HPV陽性402例，總陽性率為37.12%（402／1083）。亞型感染率相對(duì)較高的3個(gè)型別依次為16、52和58型，分別占檢出總例數(shù)的38.06%、16.42%和14.43%。分別占總例數(shù)的14.13%、6.09%和5.36%。

表1 西安市城區(qū)婦女HPV感染亞型分布

2 以年齡分組1083例西安市城區(qū)婦女HPV感染及分布情況 見表2。以＜20組和＞60歲組檢出率最高（75.00%和70.00%）。剩下的4個(gè)年齡段組，以20～29歲和40～49歲年齡段檢出率較高（P＜0.05）。

表2 以年齡分組HPV感染情況

討 論

人乳頭瘤病毒是一種具有種屬特異性的嗜上皮病毒，屬于乳頭瘤病毒科，是一種雙鏈閉環(huán)小DNA病毒。流行病學(xué)研究表明，HPV感染與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，現(xiàn)已知20余種與癌癥相關(guān)的HPV型別，例如HPV16、18、45、31、33、52、58和35是引起宮頸癌的比較常見的幾種基因型別，但是其地理變異及區(qū)域分布尚待研究［2］。

Clifford等［4］研究發(fā)現(xiàn)在世界范圍內(nèi)除亞洲之外的區(qū)域比較常見的HPV基因型別是16、18、45、31和33，而在亞洲比較常見的是52和58。Bao等［5］對(duì)大量處于宮頸病變各個(gè)時(shí)期以及細(xì)胞學(xué)檢查正常的中國女性HPV感染進(jìn)行監(jiān)測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)感染最多的型別是16型，其次比較廣泛流行的是58和52型。國內(nèi)有學(xué)者研究證實(shí)，福州地區(qū)HPV陽性檢出率為25%，沈陽地區(qū)HPV陽性檢出率為21.63%，貴州地區(qū)HPV陽性檢出率為25.9%，HPV主要檢出亞型為16、52和58［6－8］。

本研究結(jié)果顯示，1083例受檢者中HPV陽性者402例，陽性率為37.12%。檢測(cè)HPV 19種亞型中，單純感染一種亞型者287例，同時(shí)感染2個(gè)亞型者93例，同時(shí)感染3個(gè)亞型者18例，同時(shí)感染4個(gè)亞型者4例。從表1中可以看出19種亞型中以16型感染例數(shù)最多，為153例（38.06%）（其中單一感染102例，混合感染41例）；其次為52型66例（16.42%）（其中單一感染29例，混合感染37例）；58型58例（14.43%）（其中單一感染32例，混合感染26例）。而在世界范圍內(nèi)流行比較廣泛的18型，僅檢出陽性14例，陽性率1.29%，說明西安市城區(qū)育齡婦女在已檢出的高危亞型中比較常見的3種基因型別是16、52和58，與國內(nèi)外學(xué)者研究結(jié)果大致相同。但是西安地區(qū)HPV陽性檢出率為37.12%，明顯高于福州、沈陽、貴州等地，考慮與受檢病例大部分為門診有宮頸病變的患者有關(guān)。

年齡也是HPV感染的重要因素。30歲之前的年輕婦女由于性生活活躍，HPV感染機(jī)會(huì)大，但是30歲之前自身免疫能力也較強(qiáng)，大部分HPV可通過自身免疫系統(tǒng)清除，只造成一過性感染。30歲之后，HPV的感染率下降，但是隨著年齡的增長，宮頸癌的發(fā)病率逐漸升高。所以對(duì)于30～50歲的婦女進(jìn)行HPV的檢測(cè)和隨訪意義重大。本研究結(jié)果顯示，在＜20組和＞60歲組檢出率各出現(xiàn)兩個(gè)高值（75.00%和70.00%），但這兩組我們檢測(cè)例數(shù)過少。剩下的4個(gè)年齡段組，以20～29歲和40～49歲年齡段檢出率較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝24.11，P＜0.05）。結(jié)果表明30歲以前HPV感染率較高，這與年輕婦女性生活活躍有關(guān)；40～49歲為宮頸癌高發(fā)階段，HPV病毒的持續(xù)感染造成了宮頸的癌前病變乃至宮頸癌的發(fā)生，提示宮頸癌普查計(jì)劃應(yīng)該對(duì)這一階段人群進(jìn)行重點(diǎn)關(guān)注。

HPV分型檢測(cè)是檢測(cè)受檢者罹患宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)度及決定其篩查間隔的重要手段。本文通過對(duì)西安城區(qū)1083例婦女HPV感染型別的檢測(cè)，總結(jié)出本地區(qū)主要流行的HPV感染型別為16、52和58型；并對(duì)感染率較高年齡段進(jìn)行了分析統(tǒng)計(jì)，為宮頸癌的普查提供了基本信息，并為宮頸癌疫苗的研究提供了一定的依據(jù)。

［1］ Walboomers JM，Jacobs MV，Manos MM，et al.Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide［J］.The Journal of Pathology，1999，189（1）：12－19.

［2］ Bosch FX，Manos MM，Munoz N，et al.Prevalence of Human Papillomavirus in Cervical Cancer：a Worldwide Per－spective［J］.J NCI J Natl Cancer Inst，1995，87（11）：796－802.

［3］ Schiffman M，Castle PE.Human papillomavirus：epidemiology and public health［J］.Arch Pathol Lab Med，2003，127（8）：930－934.

［4］ Clifford GM，Smith JS，Plummer M，et al.Human papillomavirus types in invasive cervical cancer worldwide：a meta－analysis［J］.Br J Cancer，2003，88（1）：63－73.

［5］ Bao YP，Li N，Smith JS，et al.Human papillomavirus type－distribution in the cervix of Chinese women：a metaanalysis［J］.Int J STD AIDS，2008，19 （2）：106－111.

［6］ 汪 欣，趙素萍，魏建威.福州地區(qū)935例婦女HPV感染情況的分析［J］.分子診斷與治療雜志，2011，3（1）：33－35.

［7］ 李艷紅，張 偉，朱少君，等.早期宮頸癌篩查有效方案的探討和研究［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2006，35（7）：842－843.

［8］ 高玉華，高 巖.2104名體檢婦女高危型 HPV－DNA檢測(cè)情況的分析［J］.醫(yī)藥與保健，2010，18（1）：124－125.