苣荬菜中木犀草素的檢測方法研究＊

楊智峰 李彤暉 蒙麥俠 辛智科 陜西省中醫藥研究院（西安710003）

苣荬菜是陜西地方習用藥材“北敗醬”的主要來源，1977年版《中國藥典》一部收載過。在陜西分布廣、產量大，干燥幼嫩全草臨床主要用于治療闌尾炎、腸炎、痢疾，瘡癤癰腫，產后瘀血腹痛和痔瘡。多年來一直缺乏切實可靠的檢測手段，使市場監管和臨床用藥安全有效保障乏力，為此，我們研究了其中木犀草素的富集方法和檢測方法。

1 儀器和試藥 1.1 儀器 高效液相色譜儀（LC－2010AHT型，日本島津），CLASS－VP色譜數據工作站；電子分析天平（型號：BP211D，d＝0.01mg，德國賽多利斯天平有限公司）；超聲波清洗器（型號：KQ－100，昆山市超聲儀器有限公司）；UV－8型三用紫外儀（無錫科達分析儀器廠）。

1.2 試藥 乙腈為色譜純，購自陜西科儀科技有限公司；水為純凈水；三氯化鋁、甲醇、甲酸、三氯甲烷、丙酮、氨水和冰乙酸均為分析純。木犀草素對照品（供含量測定用，批號111720－200905，購自中國生物制品檢定所）；聚酰胺－6薄層板（浙江四青或國藥集團）；樣品北敗醬1＃采自陜西太白縣（2009.07.16），2＃采自陜西太白縣（2006.07.10），3＃購自甘肅天水（2004.04.17），4＃購自西安市萬壽路藥材市場，5＃購自陜西寶雞市（2005.08.30），6＃購自甘肅（2004.04.16），7＃來自西安盛興飲片廠（2008.09.12），8＃來自華陰勝福中藥飲片廠（2005.10.12），9＃陜西省食品藥品檢驗所（2011.07.19）。

2 方法與結果 2.1 目標成分富集和薄層鑒別方法 取本品粉末10.0g，置具塞錐形瓶中，加石油醚（60～90℃）浸泡1h，回流兩次，依次加石油醚100和80mL，每次回流1h，放冷，過濾，濾液棄去，濾渣揮干，加甲醇浸泡1h，回流2次，依次加甲醇100和80mL，每次1h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘留物用15～20mL溫水溶解，上聚酰胺柱（柱高15～17cm，內徑1.4cm），60mL水洗（可加壓），洗脫液棄去，體積分數為30%乙醇60mL洗，洗脫液棄去，體積分數為50%乙醇80mL洗，洗脫液棄去，體積分數為70%乙醇80mL洗，洗脫液蒸干，用甲醇1.6mL使溶解，作為供試品溶液。另取木犀草素對照品適量，加甲醇制成1mL含木犀草素1.5mg的對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄ⅣB）試驗，吸取上述兩種溶液各0.5μL，點于同一聚酰胺－6薄層板（浙江四青或國藥集團）上，以甲醇－丙酮－－冰乙酸（12︰5︰0.8）為展開劑展開，取出，晾干，噴50g·L－1三氯化鋁乙醇液，氨氣薰蒸，日光下或置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜與對照色譜在相應的位置上有相同的黃色或黃綠色斑點?；蛭∩鲜鰞煞N溶液各1.5μL，點于同一以0.25%的CMC－Na為黏合劑的硅膠G板上，以氯仿－甲醇－甲酸（18︰3︰0.8）為展開劑展開，取出，晾干，噴50g·L－1三氯化鋁乙醇液，氨氣薰蒸，置日光下或紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜與對照色譜在相應的位置上有相同的暗黃色或黃綠色斑點。

2.2 含量測定方法 2.2.1 色譜條件：Lichrosper C18色譜柱（250×4.6mm，5μm），柱溫：35℃，流動相：乙腈－0.4%磷酸（24：76），流速：1mL·min－1，檢測波長：348nm，進樣量：10μL。

2.2.2 對照品溶液的制備：精密稱取木犀草素對照品3.93mg，加甲醇定容于25mL量瓶中，制成每1mL含0.1572mg的儲備溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備：取北敗醬藥材細粉約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱質量，超聲處理40min，取出，放涼，稱質量，用甲醇溶液補足質量，過濾。精密吸取續濾液10mL，置圓底燒瓶中，精密加鹽酸1mL，稱質量，加熱回流2h，放冷，稱質量，用甲醇溶液補足重量，過濾，以0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.4 分離效果：在上述色譜條件下，分別吸取稀釋10倍的對照品儲備液和樣品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，可見木犀草素分離效果良好（見圖）。

高效液相色譜圖 A 對照品；B 供試品；1 木犀草素

2.2.5 方法學考察：2.2.5.1 線性關系考察：精密吸取稀釋10倍量后的木犀草素對照品儲備溶液（0.01572mg·mL－1）2、4、6、8、10、12μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積（A）為縱坐標對進樣量（μg）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程：Y＝2000000 X＋39506，r＝0.9995。結果表明：在0.0314～0.1886μg范圍內，對照品峰面積值與進樣量呈良好的線性關系。

2.2.5.2 樣品處理之超聲時間考察：分別稱取北敗醬藥材（2009.07.16）約2.0g，3份，超聲處理分別為：30、40和50min，其余按2.2.3方法和2.2.4方法進行。結果表明：超聲40min，藥材中木犀草素的提取量最大且隨時間推移提取量不再增加，說明藥材中的木犀草素已提取完全，故確定之。

2.2.5.3 樣品處理之鹽酸用量考察：分別稱取北敗醬藥材（2009.07.16）約2.0g 3份，精密加鹽酸分別為1、2和4mL，其余按2.2.3方法和2.2.4方法進行。結果表明：加入鹽酸量1mL時，藥材中木犀草素的提取量最大且隨酸度增加不再增加，故確定之。

2.2.5.4 精密度實驗：精密吸取對照品溶液和供試品（2009.07.16）溶液各10μL，重復進樣6次，記錄峰面積，計算RSD分別為1.83%，0.50%。對照品和樣品的精密度良好。

2.2.5.5 穩定性實驗：精密稱取北敗醬藥材（2009.07.16）約2.0g，按2.2.3方法進行，即得供試品溶液。分別在0、2、4、8、12和24h，吸10μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算RSD為0.35%。表明供試品溶液在24h內穩定性良好。

2.2.5.6 回收率實驗：稱取已知含量的北敗醬藥材（含量0.01629%）約1.0g，6份，精密稱取，均精密加入木犀草素對照品溶液（C標＝0.1572mg·mL－1）1mL，下按2.2.3方法和2.2.4方法進行。數據見表1，結果表明：回收率在95% ～105%之間，平均回收率為101.32%，說明該方法測定系統響應性好。

表1 回收率實驗結果 （Results of recovery test）

2.2.5.7 樣品測定：分別精密稱定不同來源的北敗醬藥材2.0g，共8份，下按2.2.3方法和2.2.4方法進行，結果見表2。

表2 不同來源的北敗醬的含量測定結果

3 討 論 苣荬菜在東北用于虛弱咳嗽［1］，在河南用于乙型肝炎［2］，大家在歸經方面缺乏共識，有人認為歸肝、脾、大腸經［3－4］；在清濕熱、消腫排膿和化瘀解毒功效［5－6］上大家認識趨于一致，有人對化瘀排膿存疑，認為用于產后瘀血腹痛效果不佳［7］。

從薄層分析實驗看，苣荬菜中含有游離木犀草素，也有木犀草素苷類，因此，酸解法測定木犀草素含量，應為苷元和苷總含量，與文獻報道［8－9］一致。

從樣品含量測定結果結合藥材性狀，建議藥材中的木犀草素含量應規定在0.018%以上，否則為劣藥，當然與測定方法的精度有關。

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