支氣管哮喘患兒誘導性調節性T淋巴細胞水平變化及意義

王 煒，李 芳，段國威，吳曉玲，宋 青

(1河北醫科大學第二醫院，石家莊050000;2河北井陘縣醫院;3河北深澤縣醫院)

哮喘是由多種細胞和細胞組分共同參與的氣道慢性炎癥性疾病。近年來隨著對哮喘發病機制的深入研究，發現免疫耐受的破壞也是哮喘發病的重要環節［1］。調節性T淋巴細胞是一群能夠有效地調節或抑制其他免疫活性細胞功能，在誘導免疫耐受中發揮著重要作用的細胞［2］。調節性T淋巴細胞在多種免疫性疾病中發揮著重要的調節作用［3］。而目前有關誘導性調節性 T淋巴細胞(Foxp3+IL-10+)在哮喘兒童中的變化以及其與病情關系的研究尚無報道。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 根據2008年中華醫學會兒科學會呼吸學組制定的《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》中兒童支氣管哮喘的診斷標準，2009年7月～2010年12月，選擇80例對戶塵螨過敏(戶塵螨過敏原皮膚點刺試驗陽性，風團反應范圍≥++)的中度支氣管哮喘患兒，按臨床表現分為急性期組和緩解期組，每組40例，兩組患兒在性別、年齡、病程、伴隨疾病、皮膚點刺試驗結果的陽性過敏原分布情況等方面均無差異。兩組患兒采血前4周內未全身使用糖皮質激素及其他免疫抑制劑，均未用過抗過敏藥物;均間斷應用小至中等劑量的吸入型糖皮質激素(布地奈德吸入劑)，必要時應用β2受體激動劑(硫酸沙丁胺醇吸入劑)，不合并使用長效抗組胺及抗白三烯類藥物。同時選擇30例健康查體患兒作為對照組，此組患兒戶塵螨過敏原皮膚點刺實驗陰性。急性期組男22例、女18例，年齡(8.26± 2.72)歲;緩解期組男23例、女17例，年齡(8.83± 2.64)歲;對照組男16例、女14例，年齡(8.52± 2.47)歲。3組在性別、年齡方面無統計學差異。

1.2 實驗方法 全部患兒及對照組均于清晨留取外周肝素鈉抗凝靜脈血3 mL，應用淋巴細胞分離液分離外周血單個核細胞(PBMC)，用含10%小牛血清的完全RPMI 1640培養基調整淋巴細胞濃度為2 ×106/mL，接種于24孔細胞培養板內，每孔1 mL，并給予戶塵螨浸出液20 μg/mL刺激后將PBMC于37℃ 5%CO2飽和濕度細胞培養箱中培養48 h。培養結束后按試劑盒說明書處理標本，經FACSCantoⅡ流式細胞分析儀進行檢測并分析。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件進行數據分析，數據均采用±s表示。各組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗和Nemenyi檢驗。調節性T淋巴細胞水平和哮喘疾病嚴重程度相關性分析采用Spearman等級相關分析。以P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.2 相關性分析 支氣管哮喘患兒誘導性調節性T淋巴細胞水平與病情呈負相關(r=－0.652，P＜0.01)。

3 討論

調節性T淋巴細胞是指既可天然產生又可以經誘導而產生的具有免疫抑制功能的細胞亞群。它主要包括自然調節性T淋巴細胞(nTreg，Foxp3+IL-10－)、適應性調節 T淋巴細胞(iTreg、Tr1、Th3、T等)以及具有調節活性的固有類T細胞(自然殺傷性 T細胞、dgT淋巴細胞)等［4，5］。其中與免疫性疾病關系密切的主要有nT-reg、誘導性調節性T淋巴細胞(Foxp3+IL-10+)、Tr1細胞Foxp3－IL-10+)和Th3細胞()等。調節性T淋巴細胞主要通過分泌IL-10、TGF-β1等具有免疫抑制作用的細胞因子以及細胞—細胞直接接觸的抑制作用等多種機制發揮免疫抑制作用［6，7］。其中IL-10是主要的抑制性細胞因子，它可通過直接和間接機制明顯降低抗原特異性T細胞增殖［8］。IL-10可有效抑制IL-12的產生，而IL-12是Th1細胞分化的關鍵因子。IL-10還可阻止T細胞受體介導的細胞活化。以IL-10處理T細胞導致持久的抗原特異性T細胞無反應，以抗CD3和CD28抗體重新刺激細胞不能逆轉IL-10誘導的T細胞無能，加入外源性的IL-2也不能逆轉IL-10誘導的T細胞無能。除了主動抑制T細胞增殖，在特定條件下，IL-10可誘導Tr1的分化，人和小鼠細胞在IL-10存在時經慢性活化可產生Tr1，增強Tr1的抑制作用。可見IL-10是調節性T淋巴細胞發揮免疫抑制功能的主要細胞因子。而目前有關可分泌IL-10的誘導性調節性T淋巴細胞在哮喘兒童中的變化以及其與病情關系的研究尚無報道。

根據本研究結果，我們認為誘導性調節性T淋巴細胞數目減少，導致抑制免疫功能減弱或呈低反應性可能是引起支氣管哮喘發病的機制之一，同時也說明哮喘患兒癥狀的緩解可能與體內誘導性調節性T淋巴細胞水平的恢復有關。誘導性調節性T淋巴細胞在哮喘的發病中發揮著重要作用，其水平可用來評估哮喘病情。

［1］陽艷麗，潘玉琴，何幫順，等.哮喘患兒外周血調節性T細胞和Th1/Th2的變化及其與哮喘病情的關系［J］.中國當代兒科雜志，2011，13(6):482-486.

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［3］Long SA，Buckner JH.regulatory cells in human autoimmunity:more than a numbers game［J］.J Immunol，2011，187(5):2061-2066.

［4］Sakaguchi S.Regulatory T cells in the past and for the future［J］.Eur J Immunol，2008，38(4):901-937.

［5］King C，Tangye SG，Mackay CR.T follicular helper(TFH)cells in normal and dysregulated immune responses［J］.Annu Rev Immunol，2008，(26):741-766.

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［8］Sakaguchi S.Regulatory T cells:history and perspective［J］.Methods Mol Biol，2011，(707):3-17.