全自動(dòng)血型及配血分析系統(tǒng)在血型鑒定中的應(yīng)用

(昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，昆明 650032)

ABO、RhD血型的鑒定是確保臨床輸血安全的重要環(huán)節(jié)，以往使用的鑒定方法是經(jīng)典試管法，結(jié)果可靠，但因手工加試劑操作步驟多，難以規(guī)范化，鑒定過程中增加了人為錯(cuò)誤的概率，不適用于批量標(biāo)本的處理。近年來微柱凝膠技術(shù)做為一種新興的血型血清學(xué)技術(shù)應(yīng)用于ABO、RhD血型抗原鑒定，反應(yīng)結(jié)果可靠，特異性強(qiáng)。特別是在引入全自動(dòng)加樣、離心判讀結(jié)果后，實(shí)現(xiàn)了血型鑒定的自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化、信息化，可用于大批量標(biāo)本的常規(guī)檢測，節(jié)省人力，消除了人為因素對(duì)檢測結(jié)果的影響［1］。2011年7～12月，我們采用美國強(qiáng)生Ortho Autouve Innova全自動(dòng)血型及配血分析系統(tǒng)(以下簡稱強(qiáng)生Autouve)(儀器法)和試管法分別檢測患者血型，并對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行了分析?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 本組9 350例份標(biāo)本均為患者首次入院第1份備血標(biāo)本。采用EDTA-K2抗凝真空無菌采血管，采集外周靜脈血3 mL，3 h內(nèi)進(jìn)行檢測。

1.2 儀器與試劑 強(qiáng)生Autouve，KA-2200型血型血清學(xué)多用離心機(jī)(日本久保田公司);ABO-Rh正反定型檢測玻璃微珠卡(美國強(qiáng)生公司)。單克隆抗A、抗B標(biāo)準(zhǔn)血清(長春博訊生物技術(shù)有限責(zé)任公司);IgM單克隆抗D血清(上海血液生物醫(yī)藥有限公司);3% ～5%標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞(參考強(qiáng)生ABO-Rh正反定型試劑卡使用說明書，由本實(shí)驗(yàn)室自制)。

1.3 方法 分別采用儀器法和試管法進(jìn)行血型檢測。①儀器法:應(yīng)用強(qiáng)生Autouve系統(tǒng)對(duì)9 350例份血樣按照儀器操作規(guī)范進(jìn)行全自動(dòng)加樣，進(jìn)行ABO正反定型及RhD血型檢測，使用系統(tǒng)進(jìn)行血型卡離心，結(jié)果判斷與信息保存。對(duì)于自動(dòng)判讀結(jié)果中提示可能有亞型存在或正反定型不一致的標(biāo)本用傳統(tǒng)試管法做進(jìn)一步確證實(shí)驗(yàn)。結(jié)合臨床病史、用藥史、輸血史等為血型鑒定提供依據(jù)。②試管法:按《輸血技術(shù)手冊(cè)》［2］中的具體步驟操作。RhD陰性確證及 ABO 亞型鑒定均按文獻(xiàn)［3，4］方法操作。

2 結(jié)果

儀器法和試管法共檢出A型2 982例、B型2 545例、O型2 823例、AB型1 000例，一次性判斷準(zhǔn)確率分別為 99.71%(9 313/9 350)、100.00%;共檢出Rh(D)陰性48例，陰性率為0.51%，一次性判斷準(zhǔn)確率分別為 99.74%(9316/9350)、100.00%。兩種方法血型檢測準(zhǔn)確率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)。儀器法中出現(xiàn)的正反定型不一致的37例用試管法做進(jìn)一步確證實(shí)驗(yàn)，其中18例為新生兒血液標(biāo)本，自身血型抗體未產(chǎn)生或抗原較弱引起;6例因疾病或藥物治療造成抗原抗體效價(jià)過低影響反定型結(jié)果;4例因血標(biāo)本抗凝不完全，纖維蛋白干擾導(dǎo)致假凝集;5例存在嚴(yán)重冷凝集。發(fā)現(xiàn)疑似亞型標(biāo)本4例，經(jīng)吸收放散等試驗(yàn)后確證定型［5］。

3 討論

血型是人體血液中的一種遺傳性狀，紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板各有復(fù)雜的血型系統(tǒng)。臨床輸血中血型鑒定錯(cuò)誤會(huì)造成嚴(yán)重的輸血反應(yīng)。因此，血型鑒定的準(zhǔn)確性是臨床安全輸血最關(guān)鍵的一步。在血型鑒定方面，微柱凝膠技術(shù)為一種新興技術(shù)［6］，其準(zhǔn)確、簡便且易于標(biāo)準(zhǔn)化。本研究中采用的全自動(dòng)血型及配血分析系統(tǒng)中的玻璃微珠間隙，只允許單個(gè)紅細(xì)胞通過，從而達(dá)到分離紅細(xì)胞的目的。抗原抗體反應(yīng)后陽性反應(yīng)凝集的紅細(xì)胞位于玻璃微珠上端，陰性反應(yīng)的游離紅細(xì)胞通過離心作用沉降至反應(yīng)柱底部，最后通過成像系統(tǒng)拍照判定反應(yīng)強(qiáng)度［7，8］。

本研究采用強(qiáng)生Autouve對(duì)9 350例份血標(biāo)本進(jìn)行ABO、RhD血型檢測，一次性判斷準(zhǔn)確率分別為99.71%、99.74%，與試管法的100%差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)儀器法檢測呈正反不符的37例份標(biāo)本進(jìn)一步鑒定發(fā)現(xiàn)，24例是少數(shù)新生兒、老年及某些惡性疾病患者因抗原、抗體較弱，細(xì)胞凝集現(xiàn)象減弱所致。此類標(biāo)本僅用試管法肉眼不易觀察到，需用顯微鏡觀察。對(duì)于這種情況，儀器法相對(duì)于試管法更易于檢出弱抗原、弱抗體［9，10］。而且，使用儀器法更有利于ABO血型亞型的發(fā)現(xiàn)。許多亞型紅細(xì)胞在與標(biāo)準(zhǔn)血清反應(yīng)呈現(xiàn)混合視野，即在一個(gè)反應(yīng)體系中同時(shí)出現(xiàn)凝集細(xì)胞群和游離細(xì)胞，而在傳統(tǒng)試管中難以實(shí)現(xiàn)。本研究中已有4例采用儀器法檢測的樣本經(jīng)進(jìn)一步確證為A3亞型、A2BX、CisAB型。說明儀器法較常規(guī)試管法更為靈敏，能捕捉到十分微弱的抗原抗體反應(yīng)，便于對(duì)可疑標(biāo)本進(jìn)一步確證定型或采用基因分子水平檢測以提高ABO血型系統(tǒng)亞型和變異型的檢出。

強(qiáng)生Antove系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)還在于其能將所有樣本、血型卡、試劑、稀釋液和測試細(xì)胞均用條碼識(shí)別進(jìn)入主數(shù)據(jù)庫，實(shí)現(xiàn)了血型鑒定過程中加樣、離心、結(jié)果判讀、保存與查詢?nèi)^程的自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化［11，12］，在節(jié)省人力的同時(shí)最大限度地減少了工作人員之間的操作差異和人為失誤對(duì)檢測結(jié)果的影響。同時(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過系統(tǒng)照相后進(jìn)行儲(chǔ)存，通過系統(tǒng)軟件可進(jìn)行快速檢索和查詢，實(shí)現(xiàn)了數(shù)據(jù)管理的標(biāo)準(zhǔn)化和信息化，為實(shí)驗(yàn)責(zé)任倒查和醫(yī)療舉證提供了技術(shù)支持。值得注意的是，我們?cè)诠ぷ鲗?shí)踐中也發(fā)現(xiàn)該系統(tǒng)存在一些不足之處:每日儀器維護(hù)初始化時(shí)間過長;系統(tǒng)對(duì)標(biāo)本抗凝要求較高，若血液中有纖維蛋白和細(xì)胞凝塊、離心不徹底、紅細(xì)胞配制濃度太高或太低時(shí)，易引起卡式儀器的假陽性或假陰性。

綜上所述，全自動(dòng)血型及配血分析系統(tǒng)是一種安全靈敏的血型鑒定技術(shù)，易于檢出弱抗原、弱抗體及發(fā)現(xiàn)ABO亞型，最大限度消除了人為因素對(duì)檢測結(jié)果的影響，使檢測結(jié)果便于保存、查詢，適于批量操作，對(duì)提高血型鑒定檢驗(yàn)質(zhì)量發(fā)揮了明顯的促進(jìn)作用，有望在臨床上得到進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

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